博舒替尼对大鼠脑缺血_再灌注损伤的影响.pdf
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1、博舒替尼对大鼠脑缺血 再灌注损伤的影响张艺,吴超,张奇,孔钰,卞晓倩,王影,李曙(皖南医学院研究生学院;皖南医学院基础医学院,安徽 芜湖 ;芜湖市第二人民医院 老年医学科,安徽 芜湖 ;皖南医学院公共卫生学院;皖南医学院临床医学院,安徽 芜湖 )【摘要】目的:探索博舒替尼()对大鼠脑缺血 再灌注损伤早期的干预作用。方法:只 大鼠随机分成 组(随机数字法),每组 只,设 组(对照组):只分离颈部血管,不做其他处理;(模型组):采用改良线栓法制作大鼠脑缺血 再灌注损伤模型,缺血 后再灌注 ;组(溶剂组):实验前 尾静脉注射溶剂 (),脑缺血 再灌 ;组(干预组);实验前 予以尾静脉注射现配的 ()
2、,脑缺血 再灌 。缺血 再灌注 后,进行神经功能评分;用 染色后计算脑梗死面积;法检测 蛋白表达水平;检测脑组织中细胞因子 、含量。结果:神经功能评分,与 组比较,及 组的评分显著升高();与 及 两组比较,组的评分显著下降()。脑梗死体积,与 组对比,及 组梗死体积百分比均显著增大();与 及 两组相比较,组脑梗死体积百分比显著减少()。的蛋白表达,与 组比较,及 组的 蛋白表达无显著变化();与 及 比较,组 蛋白表达显著下降()。炎症因子变化,与 组对比,组及 组的 、含量均显著升高();与 组及 组比较,组 、含量均显著下降()。结论:可减少脑缺血 再灌注引起的损伤,其可能机制与抑制
3、蛋白及炎症因子的表达有关。【关键词】博苏替尼;脑缺血 再灌注损伤;炎症【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】()【】,(,;,;,)【】:(),;():;():,;():(),;():,(),;:,(),(),();,():,【】;【基金项目】安徽省高校科学研究重大项目();年高校优秀拔尖人才培育资助项目();皖南医学院中青年课题(,);安徽省大学生创新创业训练计划()【收稿日期】【修回日期】【通讯作者】:;:脑卒中为一种与衰老相关的严重脑血管疾病,约 的脑卒中为缺血性卒中 。脑缺血后,血管再通,继而脑组织再灌注,一般会导致继发性脑损伤,称之为脑缺血 再灌注损伤(,)。炎症反应是 的重要诱发
4、因素之一,促炎因子激活神经元和血管内皮中国应用生理学杂志,()细胞,释放活性氧(,)和蛋白水解酶等,介导微血管功能障碍,破坏血脑屏障导致血浆纤连蛋白和纤维原蛋白渗入脑组织,加重神经元凋亡和坏死 ,因此,有效地抑制炎症因子释放或许有助于缓解 。盐诱导激酶(,),已知它属于丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶。既往研究发现,盐诱导激酶 ()与脑缺血 再灌注损伤的发生发展密切相关 。此外,可能参与脑出血(,)后的炎症反应 ;盐诱导激酶()已被提议作为开发炎症性肠疾病治疗应用的靶点 ,而 是一种酪氨酸酶抑制剂,被 批准用于治疗成人慢性粒细胞性白血病,其可以抑制 ,。本课题组前期研究表明,在脑缺血 再灌注损伤早期呈动
5、态变化,而有关 对大鼠脑缺血 再灌注损伤早期的干预作用,尤其是 能否通过抑制 表达以减轻脑缺血 再灌注后的炎症反应及脑损伤的相关研究,鲜有报道,本文探究 对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,旨在为对脑缺血 再灌注后损伤的干预提供靶点;为脑缺血 再灌注损伤的治疗提供指导。材料与方法 实验动物及分组 周的 雄性大鼠(济南朋悦公司 (鲁)。所有大鼠自然光照饲养 周,正常饮食,体重在 。大鼠分四组(随机数字法),每组 只。组:只分离血管不插栓,不做其他处理;:缺血 后再灌注 ;组:实验前 ,尾静脉注射 (),脑缺血 再灌 ;组:根据前期实验结果,实验前 尾静脉注射 ()(按说明书 溶于 配置成浓度 ),脑缺
6、血 再灌 。主要材料 级栓线(购于深圳市瑞沃德公司);二甲基亚砜();,三苯基氯化四氮唑()试剂(购于 上 海 源 叶 公 司);及 试 剂 盒()(购于索莱宝公司);兔多克隆抗体抗 (购于博奥森);兔多克隆抗体抗 (购于合肥白鲨公司);多功能酶标仪(购于美谷分子仪器公司)。建立 大鼠模型实验前大鼠禁食 ,。参照改良 法制备大鼠脑缺血再灌注模型:新鲜配置的 水合氯醛()腹腔注射麻醉,颈部常规消毒,分离皮下软组织,暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉,分离颈外动脉主干,在其远端 左右处结扎并离断切断,近心端打结;动脉夹夹闭颈总动脉和颈内动脉,剪刀于颈外动脉游离端与固定线间剪一小切口,插入 级栓线
7、进入颈内动脉,于标记处停止进栓。缺血 后,将栓线轻轻拔出至颈总动脉。组不插入栓线,余步骤同模型组。评分法检测大鼠神经功能脑缺血 再灌 后评估神经功能,标准如下:可正常活动,分;手术对侧前肢呈部分伸直,分;行走时向手术对侧转弯,分;如果出现向手术对侧跌倒并且呈跛行,分;不能主动行走,或有意识丧失表现,分。分表示建模成功。随后拔出线栓,并进行再灌注。再灌注 后取脑,超低温冰箱冻存或 多聚甲醛浸泡室温放置。染色计算大鼠脑组织梗死体积评分后,麻醉后取脑,用 生理盐水去除组织上的血液,放于载玻片上放入 冰箱冰冻 ,与此同时配制 染液,然后沿冠状面切成 厚度的薄片 片,避光置于 溶液,恒温水箱加热 。染色
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