氨基酸含量结合多元统计分析对蜂蜜品种的判别.pdf
《氨基酸含量结合多元统计分析对蜂蜜品种的判别.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《氨基酸含量结合多元统计分析对蜂蜜品种的判别.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、问亚琴,张金振,罗帅.氨基酸含量结合多元统计分析对蜂蜜品种的判别 J.食品工业科技,2023,44(20):305310.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022110213WENYaqin,ZHANGJinzhen,LUOShuai.DiscriminationofBotanicalOriginsforChineseHoneyAccordingtoAminoAcidsContentwith Chemometric ApproachesJ.Science and Technology of Food Industry,2023,44(20):305310.(in Ch
2、inese with Englishabstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022110213 分析检测 氨基酸含量结合多元统计分析氨基酸含量结合多元统计分析对蜂蜜品种的判别对蜂蜜品种的判别问亚琴1,*,张金振2,3,罗帅1(1.北京电子科技职业学院生物工程学院,北京100176;2.资源昆虫高效养殖与利用全国重点实验室,中国农业科学院蜜蜂研究所,北京100093;3.中国农业科学院蜜蜂研究所,北京100093)摘要:本研究利用氨基酸分析仪对我国 3 个不同品种单花蜜洋槐蜜、椴树蜜和油菜蜜,共计 110 个蜂蜜样品中17 种氨基酸含量进行分析,并基于氨基
3、酸含量结合统计分析方法进行蜂蜜种类鉴别分析。结果表明,油菜蜜中水解氨基酸含量高于椴树蜜和洋槐蜜,16 种氨基酸含量在三个蜂蜜品种间存在差异。主成分分析(principlecomponentanalysis,PCA)结果表明不同植物源蜂蜜具有聚类趋势,偏最小二乘法判别分析(Partialleastsquaresdiscriminantanalysis,PLS-DA)结果表明油菜蜜可以和洋槐蜜和椴树蜜区分开来。线性判别分析(Lineardiscriminantanalysis,LDA)结果表明 3 种蜂蜜整体判别率为 92.7%,油菜蜜的判别率为 92.3%。本研究为油菜蜜、洋槐蜜和椴树蜜分类鉴别
4、提供数据支撑和参考依据。关键词:蜂蜜,品种鉴别,氨基酸,多元统计分析本文网刊:中图分类号:TS209文献标识码:A文章编号:10020306(2023)20030506DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022110213DiscriminationofBotanicalOriginsforChineseHoneyAccordingtoAminoAcidsContentwithChemometricApproachesWENYaqin1,*,ZHANGJinzhen2,3,LUOShuai1(1.BeijingPolytechnic,CollegeofBiotechno
5、logy,Beijing100176,China;2.StateKeyLaboratoryofResourceInsects,BeeResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100093,China;3.BeeResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100093,China)Abstract:Inthisstudy,17aminoacidswereanalyzedbyaminoacidanalyzerin110honeysampl
6、esfromthreedifferentmonofloralhoneys,i.e.acaciahoney,lindenhoneyandrapehoneyinChina,andthehoneyvarietydiscriminationwasperformedbasedonaminoacidcontentcombinedwithchemometrics.Theresultsshowedthatthecontentofhydrolyzedaminoacidswashigherinrapehoneythaninacaciaandlindenhoney,andthecontentof16aminoaci
7、dsshowedsignificantdifferences among the honey varieties.The results of principal component analysis(PCA)revealed that the botanicaloriginsofhoneysamplesclusteredaccordingtotheiraminoacidcontent.Theresultsofleastsquaresdiscriminantanalysis(PLS-DA)showedthatrapehoneycouldbedistinguishedfromacaciahone
8、yandlindenhoney.Lineardiscriminantanalysis(LDA)showedthattheoveralldiscriminantrateofthethreehoneyswas92.7%,andthediscriminantrateofrapehoneywas92.3%.Thisstudywouldprovidedatasupportandreferencefortheclassificationandidentificationofrapehoney,acaciahoneyandlindenhoney.Keywords:honey;varietydiscrimin
9、ation;aminoacid;multivariateanalysis收稿日期:20230315基金项目:国家自然科学基金(31701669);北京市教育委员会科学研究计划项目资助(KM201910858003);北京市科学技术协会青年人才托举工程(BYESS2022135);北京市属高等学校优秀青年人才培育计划项目(BPHR202203242)。作者简介/通信作者*:问亚琴(1989),女,博士,副教授,研究方向:食品风味化学,E-mail:。第44卷第20期食品工业科技Vol.44No.202023年10月ScienceandTechnologyofFoodIndustryOct.202
10、3蜂蜜是蜜蜂采集植物花蜜,结合自身分泌物并在蜂巢经过酿造而成的天然甜味物质。蜂蜜含有多种活性物质,如氨基酸、酶、多酚类物质和矿物质12。按照蜜蜂所采集的蜜源植物种类进行划分,蜂蜜可以分为单花蜜(主要蜜源是单一植物)、杂花蜜或者百花蜜(采自多种植物)3。由于单花蜜香味纯正,因此价格会高于百花蜜,例如我国消费者喜欢味道淡的蜂蜜,因此浅色蜜如洋槐蜜和椴树蜜价格比较高。在利益的驱动下,市场上存在蜂蜜品种掺假,蜂蜜品种标识混淆等问题。由于蜂蜜独特的化学特性,不同品种蜂蜜的主要成分含量差别很小,传统的方法难以鉴别蜂蜜品种45。因此蜂蜜品种鉴别是蜂产业急需解决的重要问题之一,也是近年来研究的热点。多种检测技
11、术已被应用于蜂蜜品种的鉴别,例如色谱技术(高效液相色谱、液相色谱-质谱联用技术、气相色谱-质谱联用技术)、光谱技术(包括近红外光谱、中红外光谱、拉曼光谱、荧光光谱)6,以及核磁共振技术等78。这些方法有各自的特点及缺陷,目前尚未有一种检测技术能够有效地鉴别不同品种的蜂蜜。蜂蜜中氨基酸总量约占 1%(W/W),含有超过26 种氨基酸9。蜂蜜中氨基酸的来源主要有两个途径:蜜蜂或者蜜源植物,花粉是植物来源氨基酸的唯一途径10。不同植物花粉粒不同,因此花粉氨基酸可以作为蜂蜜植物源鉴别指标,氨基酸也可作为蜂蜜掺假鉴别指标1112。目前关于蜂蜜中氨基酸和蜂蜜品种鉴别的研究已经很多。Hermosn 等9根据
12、31 种西班牙蜂蜜中脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、组氨酸和缬氨酸含量,利用PCA 法可以很好的区分薰衣草蜂蜜和其它蜂蜜。Iglesias 等13利用 PCA 和连续判别分析结果表明,氨基酸浓度尤其是谷氨酸和色氨酸可以区分蜂蜜和甘露蜜。Rebane 等14分析了爱沙尼亚 61 种蜂蜜中游离氨基酸含量,脯氨酸和苯丙氨酸是主要的氨基酸。基于氨基酸组成 PCA 分析可以区分石南蜂蜜和其它蜂蜜。Kecke等15分析了塞尔维亚 192 个蜂蜜样品中 17 种氨基酸的含量,结果表明线性判别分析可以对不同植物源蜂蜜进行区分。Chen 等16对我国 4 种不同植物源(椴树蜜、洋槐蜜、荆条蜜和
13、油菜蜜)87 个蜂蜜样品 18 种游离氨基酸进行分析,利用化学计量学手段可以进行区分。钟舒洁等11分析了鹅掌柴蜂蜜和掺假蜂蜜氨基酸组成,通过贝叶斯判别的方法,建立鹅掌柴蜂蜜中掺假量与氨基酸总量的模型。这些前期的研究表明不同蜂蜜品种氨基酸含量不同,也暗示了利用氨基酸结合化学计量学进行蜂蜜植物源鉴别的可行性1719。氨基酸分析仪检测不同品种蜂蜜氨基酸组成,具有操作简单、适用性强等特点20。本研究以来源于我国 7 个产区的 3 种不同植物源 110 个蜂蜜为实验样本,通过酸水解氨基酸自动分析仪对其中的17 种水解氨基酸进行了定性定量分析,主要目的是分析我国不同植物源单花蜜油菜蜜、椴树蜜、洋槐蜜中水解
14、氨基酸含量范围,并基于此利用化学计量学方法进行建模分析,筛选潜在的氨基酸作为品种鉴别标志物。另外,氨基酸也是人类基本营养素之一,氨基酸不仅可以作为植物源鉴别指标,同时可以作为蜂蜜营养指标。1材料与方法1.1材料与仪器单花蜜共 3 种,均采自我国 7 个不同省市,覆盖各单花蜜主产区。其中洋槐蜜 37 个采自陕西省、甘肃省和吉林省。椴树蜜 47 个采自吉林省和黑龙江省。油菜蜜 26 个采自江苏省、湖北省和四川省,蜂蜜样品均采自 2015 年。为了保证样品的真实性,蜂蜜样品直接从蜂农处采集,通过花粉形态分析进行蜂蜜植物源确认。蜂蜜样品保存在 4 冰箱;混合氨基酸标准溶液 2.5mmol/mLSigm
15、a;盐酸、柠檬酸钠的缓冲溶液、茚三酮溶液(39g 茚三酮溶于979mL 乙二醇单甲基醚等所有分离用有机溶剂均为国产优级纯。日立 L-8900 氨基酸自动分析仪天美(中国)科学仪器有限公司;UGC-24C 水浴氮吹仪北京优晟联合科技有限公司。1.2实验方法1.2.1蜂蜜中水解氨基酸的前处理准确称取 10.0g蜂蜜加 20mL超纯水,混匀。取上清,加入 4mL100%三氯乙酸,混匀,20 放置 15min,4 放置 1h 沉淀蛋白。10000r/min,4,离心 15min,去除上清,准确吸取 10mL6mol/L 盐酸溶解沉淀,收集于 20mL耐压螺盖玻璃管,充满氮气,立刻盖紧盖子,110水解
16、24h;冷却至室温后,用普通滤纸过滤蛋白水解液,用超纯水定容至 50mL。取 1mL 滤液 60 氮吹干,然后准确吸取 1.0mL0.2mol/L 盐酸溶液溶解,过 0.22m 水系滤膜后上机分析。1.2.2氨基酸的测定按照氨基酸分析仪标准分离程序,离子交换柱初始温度 37;反应管温度 130;流动相:柠檬酸缓冲液,流速:0.45mL/min;茚三酮溶液流速:0.25mL/min;进样体积:20L;检测器:双通道紫外检测器,570 和 440nm。1.2.3氨基酸的定性定量方法用 0.02mol/L 盐酸配制成各氨基酸浓度均为 5、20、50、100、200nmol/mL的系列混合氨基酸标准工
17、作溶液。该标准工作溶液在 4 冰箱内可保存 3个月。用氨基酸分析仪测定系列混合氨基酸标准工作溶液,得到 17种氨基酸的积分峰面积,用峰面积为纵坐标,氨基酸浓度(g/mL)为横坐标分别建立 17 种氨基酸的标准工作曲线。1.3数据处理线性判别分析(LDA)是一种通用的数据分类和降维方法。线性判别分析(LDA)采用 SPASS20.0 软件分析,分类判别方法选择 WilksLambda,描述统计量选择 BoxM(博克斯)复选项。PCA 和 PLSDA分析在代谢组学网站进行(http:/www.metaboanalyst.306食品工业科技2023 年10月ca/),PCA 和 PLSDA 分析是在
18、数据进行标准化处理后进行的。2结果与分析2.1蜂蜜中 17 种水解氨基酸含量分析实验中测定的氨基酸为蛋白水解氨基酸,蜂蜜中的蛋白水解氨基酸一部分来源于蜜源植物的花粉,另外一部分来源于蜜蜂的分泌蛋白(包括酶类物质)。洋槐蜜、椴树蜜和油菜蜜中共检测出 16 种氨基酸,其中半胱氨酸(Cys)均没有检测到,由于半胱氨酸在酸水解过程中会发生降解,这与其他水解氨基酸测定结果一致2122。检测到的氨基酸中包括了8 种必需氨基酸中的赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸。天冬氨酸、谷氨酸、缬氨酸和亮氨酸是洋槐蜜和椴树蜜中含量较高的氨基酸,在油菜蜜中赖氨酸含量也相对较高。这与花粉中氨基酸组成
19、相似,Yang等23的研究结果表明谷氨酸和天冬氨酸是花粉蛋白的主要成分。这说明蜂蜜中水解氨基酸主要来源于花粉。油菜蜜 16 种氨基酸总量为 607.78g/g,高于洋槐蜜和椴树蜜,这可能与油菜蜜花粉含量相对较高有关24。酪氨酸和天冬氨酸油菜蜜中含量高于洋槐蜜和椴树蜜,16 种氨基酸含量在三个蜂蜜品种间存在差异(表 1)。2.2蜂蜜品种判别分析2.2.1PCA 分析PCA 是统计分析中常用的无监督判别分析方式。首先应用主成分分析进行聚类分析,观察应用氨基酸进行 3 种蜂蜜辨别的可行性。由于蛋氨酸在水解过程中会有降解,所以在后面的多元统计分析过程中,均去除掉蛋氨酸。图 1 显示了 PCA的主成分分
20、析结果图,从图中可以看出,3 种蜂蜜有比较明显的聚集趋势,尤其是油菜蜜与其他两种蜂蜜有较明显的区分,洋槐蜜和椴树蜜部分有交叉。主成分 1 和主成分 2 累计贡献率为 46.4%,低于其他研究者基于游离氨基酸进行蜂蜜品种鉴别的判别率25,这可能是因为水解氨基酸中有一部分来源于蜜蜂分泌蛋白的水解;另一部分来源于花粉水解,洋槐蜜和椴树蜜花粉率含量较低有关26,这些因素都会影响 3 种蜂蜜中水解氨基酸组成与含量,也会影响 PCA分类结果。DSYCYH642024PC2(20.6%)PC1(25.8%)642024Scores plot图1三个蜂蜜品种 PCA 得分散点图Fig.1Principalco
21、mponentanalysis(PCA)scoresplotofthreeunifloralhoneys.注:DS 为椴树蜜;YC 为油菜蜜;YH 为洋槐蜜。2.2.2PLS-DA 判别分析PLS-DA 是建立在偏最小二乘法线性回归基础上的一种有监督的模式识别方法,为了获取更加理想的组间分离及增强对分类贡献大的变量的识别,进一步进行了有监督的 PLS-DA分析,从图 2A 可以看出椴树蜜和洋槐蜜有部分重叠,而油菜蜜可以很好地和椴树蜜和洋槐蜜分开。通过 PLSDA 分析后,结合变量重要性投影值(variableimportanceprojection,VIP)及 P0.05 可以筛选出潜在的花蜜
22、标志物。图 2B 和图 2C 显示了成分 1 和表1不同品种蜂蜜氨基酸含量范围(mg/kg)Table1Aminoacidscontentofdifferentmonofloralhoney(mg/kg)氨基酸缩写洋槐蜜(n=37)椴树蜜(n=47)油菜蜜(n=26)最大值最小值平均值最大值最小值平均值最大值最小值平均值天冬氨酸Asp158.3719.5978.9635.22162.5519.1163.0137.51322.5329.5292.0858.16苏氨酸Thr47.5011.3624.259.3357.6611.9126.468.7298.5813.1928.6017.35丝氨酸Se
23、r70.7015.8237.3614.0668.7314.9039.8112.58136.4518.4542.0023.64谷氨酸Glu102.4924.3252.8719.86101.0130.7055.1216.36222.4010.6866.2939.59甘氨酸Gly42.568.4418.428.4635.847.6017.556.0777.1212.9526.5212.96丙氨酸Ala42.0210.2321.638.2244.239.0923.457.9662.3612.7627.9911.07缬氨酸Val82.6320.2145.2514.2878.0025.0544.2010.
24、75136.2416.6739.2423.96蛋氨酸Met23.488.8415.123.3926.129.3916.443.7139.960.008.717.56异亮氨酸Ile56.1112.4029.5911.9458.5211.6431.6710.03102.919.6531.1017.70亮氨酸Leu91.8020.1645.1818.1189.6319.6148.5714.63174.8018.0053.5630.04酪氨酸Tyr36.310.0017.878.1233.930.0016.796.18137.394.2137.4424.89苯丙氨酸Phe60.3715.4230.38
25、10.2053.8614.9530.768.03129.5217.6838.3621.93赖氨酸Lys59.2115.6332.5211.4154.8611.8528.729.12120.5319.5442.5620.75组氨酸His24.187.0713.014.4424.476.9213.793.8146.957.4715.327.98精氨酸Arg54.077.3321.8011.0043.089.4521.447.70101.2312.7630.5917.71脯氨酸Pro52.1918.7729.828.1975.330.0032.2813.8475.2710.5327.4312.70总
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 氨基酸 含量 结合 多元 统计分析 蜂蜜 品种 判别
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。