千年健多糖提取工艺的优化及其生物活性研究.pdf
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1、第 51 卷第 9 期2023 年 5 月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.51 No.9May.2023科学实验千年健多糖提取工艺的优化及其生物活性研究冯 娟,王笑丹,宋 卉(广东食品药品职业学院,广东 广州 510520)摘 要:本研究优化了千年健多糖提取工艺,考察千年健多糖降血糖的活性。以提取温度、提取时间、料液比和醇沉浓度为影响因子,多糖得率为指标,寻找最优提取方案。通过考察对-淀粉酶和-D-葡萄糖苷酶的抑制活性,研究其降血糖活性。最佳提取参数:提取温度 70,提取时间 70 min,料液比 1 50,醇沉浓度 80%,对-淀粉酶和-D-葡萄糖
2、苷酶活性均具有较强的抑制作用,EC50分别为 2.58、2.49 mg/mL。该工艺稳定可靠,千年健多糖具有较强的降血糖能力。关键词:千年健;提取;多糖;降血糖中图分类号:TS201.1 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2023)09-0026-03 基金项目:广东食品药品职业学院校级自然科学(一般项目)课题(项目编号:2020ZR26)。第一作者:冯娟(1981-),女,医学博士,讲师。Study on Optimization of Extraction Process of Polysaccharide ofHomalomena Occulta and Its Biologi
3、cal ActivityFENF Juan,WANG Xiao-dan,SONG Hui(Guangdong Food and Drug Vocational College,Guangdong Guangzhou 510520,China)Abstract:To optimize the extraction process of Homalomena occulta and investigate its biological activity,the effectsof extraction temperature,extraction time,material-liquid rati
4、o and alcohol precipitation volume fraction on the extractionrate of polysaccharides were investigated to find the optimal extraction scheme.By examining the inhibitory activity of-amylase and -D-glucosidase,the hypoglycemic activity was investigated.The best extraction parameters were asfollows:ext
5、raction temperature was 70,extraction time was 70 min,material-liquid ratio was 1 50,alcoholprecipitation concentration was 80%.Polysaccharides had a strong inhibitory effect on both -amylase and -D-glucosidase activities,with EC50of 2.58 and 2.49 mg/mL,respectively.The process was stable and reliab
6、le.Homalomena occulta polysaccharide had strong hypoglycemic capacity.Key words:Homalomena occulta;extraction;polysaccharide;hypoglycemic千年键,别名一包针、千颗针、千年见,始载于 本草纲目拾遗,是我国传统中药材,主要分布于广东、广西、云南等地1,为天南星科植物千年健 Homalomena occulta(Lour.)Schott 的干燥根茎,具有祛风湿、舒筋活络、止痛、消肿等功效,临床上常用于治疗风湿腰腿痛、风湿及类风湿性关节炎、骨折、跌打损伤等2。现代研究
7、表明,千年健具有多种药理活性。本课题组前期研究发现,千年健多糖对 DPPH、OH、ABTS+、O-2均表现出较好的清除效果,具有较强的抗氧化能力,对 DPPH清除率最高达 78%3.2%,对 OH清除率最高为 68%3.4%,对 ABTS+最高清除率为 66%2.6%,对 O-2最高清除率为 65%2.4%,EC50分别为 2.04、2.53、2.99、2.35 mg/mL3。尹伟等4从千年健乙醇提液中分离得到的 10 个新型化合物,与抗肿瘤药物甲氨蝶呤的体外细胞毒性及单细胞凝胶电泳对比试验表明,化合物的抗肿瘤细胞效果显著,对 4T1、A549、Hela 及 HepG2 肿瘤细胞有很强的毒性。
8、除此以为,千年健中的黄酮5、倍半萜类6等化合物的活性研究也备受关注。为提高千年健这一药用植物资源的开发价值,本实验优化了千年健多糖提取工艺,并考察其降血糖能力。1 试药与仪器1.1 药 材千年健,广东清源中药饮片有限公司(1932146)。1.2 试 剂-淀粉酶、-D-葡萄糖苷酶,阿拉丁试剂公司;葡萄糖、苯酚、硫酸、乙醇、石油醚(60 90)等其他试剂均为分析纯,广州化学试剂厂;所用水为蒸馏水。1.3 仪 器DFT-150 多功能粉粹机,温岭市戴德科技有限公司;SHZ-DIII 循环水真空泵,巩义予华仪器有限责任公司;TDL-40B-II低速大容量离心机,上海安亭科学仪器厂;N-1210 旋转
9、蒸发仪,东京理化;BT125D 电子天平(十万分之一),瑞士梅特勒-托利多公司;UV-2600 紫外可见分光光度计,日本岛津;FDU-1200 冷冻干燥机,东京理化;DF-101S 集热式恒温磁力搅拌第 51 卷第 9 期冯娟,等:千年健多糖提取工艺的优化及其生物活性研究27 器,巩义予华仪器有限责任公司。2 方法与结果2.1 葡萄糖标准溶液的配制将葡萄糖在 105 下干燥至恒重,精密称取 10 mg 于100 mL 容量瓶中,加适量水溶解,定容至刻度,摇匀,配成0.1 mg/mL 的标准葡萄糖溶液,备用。2.2 绘制标准曲线精密吸取 0.1 mg/mL 的葡萄糖标准溶液 0.2,0.4,0.
10、6,0.8,1.0 mL 于 25 mL 具塞试管中,加水至 2 mL,得到浓度为0.01,0.02,0.03,0.04,0.05 mg/mL 的标准溶液,采用苯酚-硫酸法7-8,往试管依次滴加 1.0 mL 的 5%苯酚溶液,轻轻振荡加摇动,小心准确地加入浓硫酸5.0 mL,反应30 min 后,于490 nm 处测定吸光度值。横坐标 X:葡萄糖溶液的浓度(mg/mL),纵坐标 Y:葡萄糖溶液的吸光度(A),对这些数据回归处理,即得线性方程 y=13.55x+0.0195,R2=0.9999,在 0.01 0.05 mg/mL 范围内线性良好。以 2 mL 多糖溶液代替葡萄糖溶液同步测定吸光
11、度,进而求得多糖含量。其原理是多糖在浓硫酸作用下水解成单糖,并迅速脱水形成糠醛衍生物,进一步又与苯酚缩合形成一种颜色稳定的橙黄色物质,该物质在 490 nm最大吸收波长处测得的吸光度与多糖的浓度在一定浓度范围内呈正相关。图 1 葡萄糖标准曲线Fig.1 Glucose standard curve2.3 千年健的脱脂处理千年健含有丰富粗脂肪、粗蛋白和可溶性多糖。脂质含量较高,在水浸提多糖的过程中会阻碍水溶液渗透到样品内部,使多糖的提取率下降。将买来的千年健干品进行手工粉碎至细碎或细粉状,准确称取适量的千年健细粉,装进用脱脂滤纸折叠成的纸筒并放入索氏提取器中,以 125 mL 石油醚,恒温下回流
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