Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究.pdf
《Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、Vol.9 No.4Aug.2023生物化工Biological Chemical Engineering第 9 卷 第 4 期2023 年 8 月文章编号:2096-0387(2023)04-04Vero 细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量 关系的研究简伟,刘永连,张瑞,郭林,肖海峰,李国顺*(北京民海生物科技有限公司/北京市新型联合疫苗工程技术研究中心,北京 102600)摘 要:目的:建立一种应用于片状载体培养的 Vero 细胞计数方法。方法:Vero 细胞于细胞瓶内培养,分别于 24 h、48 h、72 h、96 h和120 h 取样检测上清液中葡萄糖含量,同时消化细胞并计数。以葡萄
2、糖累计消耗量为X轴,以细胞收获数量为Y轴,获得葡萄糖累计消耗量和细胞数量的关系方程,从而建立一种细胞计数的方法。通过计算反应器中细胞生长消耗的葡萄糖量来计算细胞数量,从而优化控制细胞生长。结果:得到葡萄糖消耗量与细胞数量线性方程为 Y=4.107108X;Vero 细胞在反应器内培养 6 d,累计消耗葡萄糖 71.28 g,所获得细胞数量为 2.931010个。结论:建立了葡萄糖消耗量与细胞数量的线性关系,即每消耗 1 g 葡萄糖对应的细胞数量为 4.107108个,可作为片状载体细胞培养过程中细胞计数的参考。关键词:Vero 细胞;片状载体;细胞计数方法;葡萄糖中图分类号:Q939.9;Q3
3、43.6 文献标识码:AStudyontheRelationshipBetweenGlucoseConsumptionandCellNumberDuringtheGrowthofVeroCellsJIAN wei,LIU Yonglian,ZHANG Rui,GUO Lin,XIAO Haifeng,LI Guoshun*(Beijing Minhai Biotechnology Co.,Ltd./Beijing Engineering Technology Research Center for New Combined Vaccine,Beijing 102600,China)Abstra
4、ct:Objective:To establish a Vero cell counting method applied to the culture of flake carriers.Methods:Vero cells are cultured in cell flasks,and samples are taken at 24 h,48 h,72 h,96 h,and 120 h to detect the glucose content in the supernatant,and the cells are digested and counted.Taking the cumu
5、lative glucose consumption as the X axis and the number of cells harvested as the Y axis,the relationship equation between the cumulative glucose consumption and the number of cells is obtained,so as to establish a method for cell counting.Optimizing cell growth is controlled by calculating the cell
6、 number by calculating the amount of glucose consumed for cell growth in the reactor.Results:The linear equation of glucose consumption and cell number is Y=4.107108X;Vero cells are cultured in the reactor for 6 days,the cumulative glucose consumption is 71.28 g,and the number of cells obtained was
7、2.931010.Conclusion:A linear relationship between glucose consumption and cell number is established.That is,the number of cells corresponding to each consumption of 1 g of glucose is 4.107108,which can be used as a reference for cell count in the flake carrier cell culture process.Keywords:Vero cel
8、ls;flake carrier;cell counting method;glucose贴壁细胞培养的放大方式包括从方瓶或平皿放大至转瓶、多层方瓶或细胞工厂,这些培养方式均为低密度细胞培养,放大能力只能依靠增加培养单元的数量来提高1-2。因此,无论是贴壁培养工艺还是悬基金项目:北京市科技计划课题(Z201100005420004)。作者简介:简伟(1985),男,湖北安陆人,本科,副研究员,研究方向为微生物发酵、细胞病毒培养、疫苗开发。通信作者:李国顺(1980),男,河北邯郸人,硕士,研究员,研究方向为蛋白纯化、细胞病毒培养、疫苗开发。E-mail:。110生物化工2023 年浮培养工艺,
9、生物反应器工艺是大规模培养细胞和病毒最适合的选择3。固定床生物反应器片状载体工艺在病毒性疫苗领域已得到广泛应用,具有剪切力低、换液快、可大规模连续灌流培养等优势4。但由于不能实时取样难以对细胞进行消化计数,从而难以准确检测细胞密度、判断细胞生长速度,对于需严格按病毒感染复数(MOI)接毒的病毒培养工艺也造成一定的困扰5。本实验建立了一种简单快捷应用于固定床生物反应器(片状载体)的细胞计数方法,为片状载体细胞培养工艺的细胞计数提供参考。1 材料与方法1.1 细胞Vero 细胞 142 代,由北京民海生物科技有限公司研发中心保存。1.2 试剂及耗材Gibco OptiPRO SFM 培养基、基因重
10、组胰酶,美国Thermo Fisher Scientific 公司;Cedex Bio 配套葡萄糖检测试剂盒,瑞士 Hoffmann-La Roche 公司;片状载体,上海楚鲲生物科技有限公司。75 cm2细胞培养瓶(T75)、225 cm2细胞培养瓶(T225)、2层细胞工厂(CF2)、10层细胞工厂(CF10),丹麦 Corning 公司。1.3 设备MCO-20AIC 型二氧化碳培养箱,日本 Panasonic公司;CKX53 型倒置显微镜,日本 OLYMPUS 公司;IC1000 型细胞计数仪,上海睿钰生物科技有限公司;Cedex Bio 型生化分析仪,瑞士 Hoffmann-La R
11、oche 公司;Cellipower 09-5L 型生物反应器,上海戈洛思生物科技有限公司。1.4 方法1.4.1 细胞复苏和传代(1)复苏。取 1 支 Vero 细胞(代次 142),在(391)水浴快速化冻后接入 T75 细胞培养瓶中,缓慢补加细胞培养液至 30 mL,置于 37.0、5%CO2的培养箱内培养 3 d。(2)传代。将 1 个 T75 按照 1 6 的传代比例,传 2 个 T225,置于 37.0、5%CO2的培养箱内培养3 d,此时的细胞代次为 144。取 1 个 144 代的 T225按照16的传代比例,传6个T225,置于37.0、5%CO2的培养箱内培养 3 d,此时
12、的细胞代次为 145。取1 个 145 代的 T225 按照 1 6 的传代比例,传 1 个CF2,置于 37.0、5%CO2的培养箱内培养 3 d,此时的细胞代次为 146。(3)传代比例控制。取 146 代细胞消化后的细胞悬液,按照 1 4(7.5104个/cm2)、1 6(5 104个/cm2)、1 8(3.75104个/cm2)的接种密度接种至T75细胞培养瓶,每个密度接种16瓶,置于5%CO2培养箱内(371)进行培养。1.4.2 葡萄糖含量检测及细胞计数分别于 24 h、48 h、72 h、96 h 和 120 h 取 3 瓶不同传代比例细胞的上清液检测葡萄糖含量,并消化细胞,取
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- Vero 细胞 生长 过程 葡萄糖 消耗量 数量 关系 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。