复发性流产患者绒毛组织HI...HL蛋白的表达及其临床意义_娄欢.pdf
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1、东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023,Feb;42(1):98-103收稿日期2022-07-26 修回日期2022-11-08基金项目河南省医学科技攻关计划项目(2018020801)作者简介娄欢(1985 ),女,河南郑州人,副主任医师,医学硕士。E-mail:louhuan1985l163 com通信作者杨小风E-mail:pkiit12163 com引文格式娄欢,杨小风,武明莉,等 复发性流产患者绒毛组织 HIF-1、VHL 蛋白的表达及其临床意义J 东南大学学报(医学版),2023,42(1):98-103 论著 复发性流产患者绒毛
2、组织 HIF-1、VHL蛋白的表达及其临床意义娄欢,杨小风,武明莉,郭婷婷,李怡梅(郑州大学附属郑州中心医院 妇产科,河南 郑州450000)摘要目的:检测复发性流产患者绒毛组织缺氧诱导因子-1(HIF-1)、希佩尔林道抑癌基因(VHL)蛋白表达水平并分析其临床意义。方法:选取2019 年5 月至2021 年11 月本院收治的83 例复发性流产患者作为观察组,另选取 80 例行人工流产的正常早孕者设为对照组。收集两组绒毛组织,采用免疫组化法检测绒毛组织 HIF-1、VHL 蛋白表达水平,采用 Spearman 法分析复发性流产患者 HIF-1 与 VHL 蛋白表达的关系,并采用 Logisti
3、c 回归分析复发性流产的影响因素。结果:观察组绒毛组织 HIF-1 蛋白阳性表达率高于对照组(P 0 05),VHL 蛋白阳性表达率低于对照组(P 0 05);观察组 HIF-1 蛋白表达与 VHL 蛋白表达呈负相关(r=0 504,P 0 05);观察组孕妇被动吸烟、人工流产3 次、作息不规律占比均高于对照组(P 0.05);经 Logistic 回归分析可知,人工流产3 次、作息不规律及 HIF-1 蛋白阳性表达率升高均是发生复发性流产的危险因素(P 0 05),VHL 蛋白阳性表达是其保护因素(P 0 05)。结论:复发性流产患者绒毛组织中 HIF-1 蛋白表达水平异常升高,VHL 蛋白
4、表达水平异常降低,且两者呈负相关,均可能与复发性流产的发生有关。关键词复发性流产;绒毛组织;缺氧诱导因子-1;希佩尔林道抑癌基因 中图分类号714 21 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0098-06doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 014Expressions of HIF-1 and VHL proteins in villi of patients with recurrentabortion and their clinical significanceLOU Huan,YANG Xiaofeng,WU Mingli,G
5、UO Tingting,LI Yimei(Department of Obstetrics and Gynecology,Zhengzhou Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Zhengzhou 450000,China)AbstractObjective:To detect the expressions of hypoxia inducible factor-1(HIF-1)and Von Hippel Lin-dau tumor suppressor gene(VHL)protein in villi of patie
6、nts with recurrent abortion and analyze their clinical signif-icance Methods:83 patients with recurrent abortion treated in our hospital from May 2019 to November 2021 wereselected into observation group,and 80 normal early pregnant patients with induced abortion were selected into con-trol group Th
7、e villi tissues of the two groups were collected,and the expressions of HIF-1 and VHL protein in vil-89li were detected by immunohistochemical method The relationship between HIF-1 protein expression and VHLprotein expression in patients with recurrent abortion was analyzed by Spearman method,and th
8、e influencing factorsof recurrent abortion were analyzed by Logistic regression esults:The positive expression rate of HIF-1 proteinin villi of the observation group was higher than that of the control group(P 0 05),and the positive expressionrate of VHL protein was lower than that of the control gr
9、oup(P 0 05)The expression of HIF-1 protein in villiof patients with recurrent abortion was negatively correlated with that of VHL protein(r=0 504,P 0 05)Theproportion of passive smoking of pregnant women,induced abortion 3 times,irregular work in the observationgroup were higher than those in the co
10、ntrol group(P 0 05)Logistic regression analysis showed that inducedabortion 3 times,irregular schedule and high positive expression rate of HIF-1 protein were the risk factors forrecurrent abortion(P 0 05),and the positive expression of VHL protein was the protective factor(P 0 05)Conclusion:The exp
11、ression of HIF-1 protein in villi of patients with recurrent abortion is abnormally increased,and the expression of VHL is abnormally decreased The expression of the two proteins is correlated,which may berelated to the occurrence of recurrent abortion Key wordsrecurrent abortion;decidual tissue;hyp
12、oxia inducible factor-1;Von Hippel Lindau tumor suppres-sor gene复发性流产是指连续发生 3 次或 3 次以上的自然流产,其临床表现为停经后阴道出血和腹痛,部分患者没有临床症状1。在复发性流产的患者中能够明确其病因的约占 50%,主要包括染色体异常、母体生殖道异常、免疫功能异常、内分泌因素、生殖道感染、宫颈机能不全及血栓形成倾向等2-3,但仍有多数患者发生流产的病因尚不明确。因此,积极探索复发性流产的相关影响因素,从而进一步阐明其发病机制至关重要。徐英姬等4 认为,胎盘循环异常可导致胚胎停止发育或发育异常。缺氧诱导因子-1(HIF-
13、1)是一种激活缺氧反应基因转录的调节因子,在胎盘循环过程中具有重要的作用5。此外,Hoefflin 等6 报道,希佩尔林道抑癌基因(VHL)是一种蛋白质编码基因,与 HIF-1的表达水平密切相关,VHL 失活可使 HIF-1 在细胞中表达和活性升高,从而促进血管内皮细胞增殖,但目前国内外少有 VHL 及 HIF-1 蛋白表达水平是否与复发性流产有关的研究报道。鉴于此,本研究通过研究复发性流产患者绒毛组织 VHL 蛋白及 HIF-1 蛋白的表达情况及其与复发性流产的关系,探讨 VHL 蛋白及HIF-1 蛋白在复发性流产中的可能作用机制,现报道如下。1资料与方法1 1一般资料经本院伦理委员会批准,
14、选取2019 年5 月至2021年 11 月本院收治的 83 例复发性流产患者设为观察组,另选取 80 例行人工流产的正常早孕者设为对照组。其中观察组年龄 22 45 岁,平均(30 36 5 54)岁;孕周6 12 周,平均(9 14 2 26)周。对照组年龄20 43 岁,平均(29 25 4 78)岁;孕周 7 12 周,平均(8 87 1 70)周。两组年龄及孕周具有可比性(P 0 05)。纳入标准:(1)观察组均有3 次的无诱因自然流产史,且孕周12 周,就诊时经 B 超检测确诊胚胎无原始心血管搏动;(2)对照组就诊时经 B 超检测可见胚胎有原始心血管搏动;(3)两组均无早产、死产等
15、不良妊娠史;(4)患者及家属均签署知情同意书。排除标准:(1)多胎妊娠者;(2)夫妻双方染色体异常者;(3)生殖道感染或生殖器官异常者;(4)合并心、肝、肾等重要脏器功能障碍者;(5)合并肿瘤或凝血功能障碍者;(6)合并精神疾病或认知功能障碍者;(7)近期接触过重金属等毒物者;(8)近 1 个月接受重大手术者;(9)因各种原因不能全程参与本研究者。1 2方法1 2 1绒毛组织 HIF-1、VHL 蛋白表达检测取流产清宫术后的绒毛组织 5 8 g,无菌盐水冲洗后,依次经过 4 0%的甲醛溶液固定、石蜡包埋及连续切片处理,然后进行免疫组化检测。鼠抗人单克隆抗 VHL 抗体为即用型工作液,试剂盒购自
16、上海研生生化试剂有限公司;鼠抗人多克隆抗 HIF-1 抗体购自上海伊莱博生物科技公司。操作严格按照试剂盒说明进行,具体包括:绒毛组织石蜡切片,常规脱蜡至水,3%H2O2灭活内源性过氧化物酶,微波修复抗原;磷酸缓冲盐溶液(PBS)液洗 3 次,滴加一抗(VHL、HIF-1,稀释至 1 99娄欢,等 复发性流产患者绒毛组织 HIF-1、VHL 蛋白的表达及其临床意义200),38 孵育 60 min;PBS 洗涤后再滴加通用型二抗,36 孵育 20 min;最后显色、复染、脱水、封片。1 2 2结果判断HIF-1、VHL 蛋白阳性染色分别位于细胞核和胞浆。所有切片均由 2 名以上经验丰富的医师采用
17、 H-score 评分法为标准对免疫组化结果判定7。每张切片随机选取 5 个高倍视野,细胞内呈深棕黄色计为 3 分,呈棕黄色计为 2 分,呈现淡黄色计为 1分,均无着色计为 0 分;着色细胞数5%为 0 分,5%且25%为 1 分,25%且50%为 2 分,50%为 3 分。将以上两项得分相乘,进行判断:0 分为阴性(),1 3 分为弱阳性(+),4 5 分为中度阳性(+),6 分及以上为强阳性(+)。1 2 3资料收集收集两组年龄、合并高血压、孕前体质量指数(BMI)24 0 kgm2、丈夫饮酒、孕期被动吸烟、人工流产3 次、作息不规律、HIF-1 蛋白及VHL 蛋白阳性表达率等资料,将上述
18、指标作为自变量,另将流产情况记为因变量,均进行赋值,见表 1。表 1变量赋值结果Tab 1Variable assignment results变量赋值变量赋值年龄实测值人工流产3 次否=0,是=1合并高血压否=0,是=1作息不规律否=0,是=1孕前 BMI24 0 kgm2否=0,是=1HIF-1 蛋白阴性表达=0,阳性表达=1孕期被动吸烟否=0,是=1VHL 蛋白阴性表达=0,阳性表达=1丈夫饮酒否=0,是=1流产情况人工流产=0,复发性流产=11 3观察指标(1)比较两组绒毛组织中 HIF-1、VHL 蛋白表达情况;(2)复发性流产患者 HIF-1 与 VHL 蛋白表达水平的相关性分析;
19、(3)复发性流产发生的影响因素分析,记录比值比(O)、95%可信区间(95%CI)等。1 4统计学处理采用 SPSS 27 0 软件对数据进行分析处理。经检验符合正态分布的计量资料,以 x s 表示,采用 t 检验;计数资料以 例(%)描 述,采 用 2检 验;采 用Spearman 等级相关分析复发性流产患者 HIF-1 与VHL 蛋白表达的关系,采用 Logistic 回归分析法分析影响复发性流产发生的因素。P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1两组绒毛组织 HIF-1、VHL 蛋白表达水平比较观察组绒毛组织 HIF-1 蛋白阳性表达率高于对照组(P 0 05),VHL 蛋白阳性表
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