二氧化氯对褐腐菌、酵母菌及大肠埃希菌的抑菌作用研究.pdf
《二氧化氯对褐腐菌、酵母菌及大肠埃希菌的抑菌作用研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《二氧化氯对褐腐菌、酵母菌及大肠埃希菌的抑菌作用研究.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、.894.文章编号:1001-8689(2023)08-0894-06收稿日期:2022-02-28基金项目:四川省重点研发项目(No.2022YFS0435);成都市重点研发支撑计划(No.2022-YF05-00447-SN)作者简介:幸红霞,女,生于1995年,在读硕士研究生,研究方向为食品防腐与保鲜,E-mail:*通信作者,E-mail:二氧化氯对褐腐菌、酵母菌及大肠埃希菌的抑菌作用研究幸红霞1 姚倩2 张雨铖2 廖俊米3 董娟3 余沁2 郭晓强2,*(1 成都大学食品与生物工程学院,成都 610106;2 成都大学药学院,成都 610106;3 四川双金多肽生物技术有限责任公司,成
2、都 610100)摘要:目的 考察二氧化氯对桃褐腐病主要致病菌褐腐菌(Monilinia fructicola)、酵母菌(Kazachstania exigua)以及大肠埃希菌(Escherichia coli)的抑制效果。方法 以褐腐菌、酵母菌、大肠埃希菌为实验对象,采用固体培养法测定菌斑直径和细菌存活率;测定胞外培养液电导率,蛋白质和DNA含量,检测胞内丙二醛浓度和脱氢酶活性,并采用扫描电镜进行形态学观察。结果 随着二氧化氯浓度升高,菌斑直径和细菌存活率逐渐降低,胞外培养液电导率、蛋白质、DNA含量和胞内丙二醛含量增加,脱氢酶活性显著下降;二氧化氯对褐腐菌的抑菌效果显著高于酵母菌和大肠埃希
3、菌(P0.05)。电镜扫描下可见细菌细胞膜边界模糊,有明显渗出液。结论 二氧化氯能有效抑制褐腐菌的生长,其机制与破坏细菌细胞膜,使细菌代谢酶失活有关。关键词:二氧化氯;褐腐菌;酵母菌;大肠埃希菌;抑菌机制中图分类号:R978.1 文献标志码:AAntibacterial effects of chlorine dioxide on Monilinia fructicola,yeast and Escherichia coliXing Hongxia1,Yao Qian2,Zhang Yucheng2,Liao Junmi3,Dong Juan3,Yu Qin2,and Guo Xiaoqian
4、g2(1 School of Food and Biological Engineering,Chengdu University,Chengdu 610106;2 School of Pharmacy,Chengdu University,Chengdu 610106;3 Sichuan Shuangjinduotai Biotechnology Co.,LTD,Chengdu 610100)Abstract Objective To study the inhibitory effect of ClO2 on Monilinia fructicola,the primary pathoge
5、n of peaches,as well as yeast(Kazachstania exigua)and Escherichia coli(E.coli).Methods The plaque diameter and bacterial survival rate of Monilinia fructicola,yeast,and E.coli were measured using the solid culture method.The conductivity,protein,and DNA content of the extracellular culture medium,as
6、 well as the intracellular malondialdehyde content and dehydrogenase activity,were all tested using the same approach.Finally,scanning electron microscopy was applied to observe the bacterial morphology.Results The plaque diameter and bacterial survival rate gradually reduced as ClO2 concentration i
7、ncreased.However,extracellular conductivity,protein and DNA content as well as intracellular malondialdehyde content increased,while dehydrogenase activity declined dramatically.The inhibitory effect of ClO2 on Monilinia fructicola was notably stronger than that on yeast and E coli(P0.05).The blurre
8、d boundary of bacterial cell membrane with visible intracellular effusion were observed 中国抗生素杂志2023年8月第48卷第8期.895.二氧化氯对褐腐菌、酵母菌及大肠埃希菌的抑菌作用研究 幸红霞二氧化氯是一种新型的空气消毒剂,具有适用面广、使用剂量低、灭菌率高、持续时间长、无毒副作用及对环境无污染等优点,己被世界卫生组织列为A1级安全高效的绿色消毒剂1,被公认为食品除臭和消毒最突出和最有效的化学品之一。二氧化氯对饮用水、水果和蔬菜进行消毒处理时通常采用水溶液或者气体形式2;研究表明,二氧化氯气体处理后残
9、留的氯气比其水溶液形式少,且表面的渗透速度也更快3。成都龙泉山脉区域是全国重要的水蜜桃生产基地之一,有“天下第一桃”的美誉4。桃的软组织和薄果皮在采后贮藏期间易受到真菌感染引起疾病,褐腐菌是桃果实采后软腐病的主要致病菌5,由褐腐菌引起的褐腐病是桃收获后最具破坏性的病害6,在贮藏、运输、销售及消费过程中极易发生,使果实迅速腐败,导致无法食用,造成巨大的经济损失7。大肠埃希菌是食品主要污染源之一,食用后易引起腹泻、呕吐等消化道症状。酵母菌可利用果皮表面和伤口处的营养迅速大量繁殖,从而消耗伤口处营养且布满整个伤口表面8。细菌加速了桃的腐烂变质,不利于贮藏和运输。目前,桃果实采后主要依赖于化学杀菌剂防
10、治微生物污染,但杀菌剂的过度使用会造成环境污染、对人体健康有一定的危害,为减少环境污染和满足消费者对安全食品日益增长的需求,寻找新的褐腐菌防治方法迫在眉睫9。本文选择水蜜桃贮存和运输过程中常见的3种菌-褐腐菌、酵母菌和大肠埃希菌,采用固体反接培养方法考察二氧化氯对3种菌的抑制作用,以期更好地模拟果蔬贮藏的实际状况,找到高效低毒的水蜜桃保鲜策略,为延长水蜜桃货架期、提高水蜜桃营养价值提供有益指导。1 材料与仪器1.1 实验菌株大肠埃希菌BNCC336902(Escherichia coli)、酵母菌JC2636(Kazachstania exigua)均由成都大学四川省生物医药基础实验教学中心微
11、生物实验室提供。1.2 试剂丙二醛(malondialdehyde,MDA,AR,纯度98%,广东翁江化学试剂有限公司);营养琼脂和LB肉汤购自青岛海博生物技术有限公司;硫代巴比妥酸、乙酸异戊酯和2,3,5三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)购自上海泰坦科技股份有限责任公司;二氧化氯(AR,含量10%)由四川金科药业有限公司提供。1.3 仪器UV5100B紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司),FE30台式电导仪(梅特勒-托力多仪器有限公司),SPX-250生化培养箱(常州迈科诺仪器有限公司),CT14D高速冷冻离心机(上海天
12、美生化仪器设备工程有限公司),Quanta 200扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM,美国FEI仪器有限公司)。2 方法2.1 褐腐菌的分离与复苏2.1.1 褐腐菌的分离在龙泉水蜜桃病果上挑取少量腐烂部分,用无菌水连续稀释,0.1 mL稀释液置于PDA灭菌固体培养基,涂布均匀,25 培养1 d,根据菌落形态挑选单个菌落,转移至新的灭菌培养基中培养,重复3次。经形态学和PCR验证10,鉴定为褐腐菌。菌株置于PDA斜面上,4 低温保存。2.1.2 菌种复苏与生长 用接种环挑取褐腐菌、酵母菌、大肠埃希菌,分别接种于100 mL LB灭菌液体培养基中,分别
13、在 25、28 和37 下以100 r/min振荡培养24 h。调整其浓度为106 CFU/mL,吸取50 L菌悬液置于PDA平板中央,涂布均匀,将培养皿分别置于25、28 和37 下培养1 d备用11。2.2 反接培养法参照文献11的方法并稍作改进。将灭菌的PDA培养基倒入培养皿中,冷却备用,无菌打孔器(6 mm)取“2.1.2”项下含菌培养基,制得菌饼,将其反接于PDA平板中央;精确称量二氧化氯固体,分别用蒸under SEM.Conclusion The antibacterial mechanisms are associated with the impairment of cell
14、 membrane and inactivation of bacterial metabolic enzymes.Key words Chlorine dioxide;Monilinia fructicola;Yeast;E.coli;Antibacterial mechanism.896.馏水配置成0.0125、0.025、0.05和0.1 mmol/L的二氧化氯溶液10 mL,将10 mL二氧化氯溶液倒入50 mL烧杯中;将烧杯和培养皿(加盖)放置于10 L塑料盒中,将塑料盒分别置于25、28 和37 下培养16 h。取出培养皿,继续培养直至空白组的菌落直径大于培养皿直径的2/3,结束培
15、养。以未经二氧化氯处理的菌饼作为空白组。2.3 抑菌活性测定2.3.1 菌落直径 培养结束后,用游标卡尺采用十字交叉法测定各组菌斑直径3次,结果取平均值。2.3.2 存活率 菌落培养结束后,用小刀刮下相同大小的菌斑(直径约4 cm),置于试管中,用20 mL无菌PBS分散均匀,于600 nm波长处测吸光值,与空白组的吸光度值做比较,按下式计算存活率lg(Nt/N0)12:lg(Nt/N0)=lg(At/A0)其中,Nt和N0分别表示二氧化氯处理组和空白组的细菌数量,At和A0分别表示二氧化氯处理组和空白组细菌混悬液的吸光度值。2.4 抑菌机制考察2.4.1 电导率 取“2.3.2”项下培养结束
16、后的菌斑,用无菌水分散样品置于烧杯中,用电导仪测定电导值记为A1,测完后将所有样品沸水浴15 min,冷却后再次测其电导值记为A2,参照文献13计算电导率。电导率(%)=A1/A21002.4.2 蛋白质和DNA使用PBS冲洗反接处理培养后菌落,12000 r/min 离心30 min;吸取上清液,用紫外分光光度计测定A260和A280,DNA含量用260 nm波长处的吸光值表示,参照文献14计算蛋白质含量。蛋白质含量/(mg/mL)=1.45A280-0.74A2602.4.3 MDA测定 MDA含量测定参照文献15,并稍作改进。取反接菌斑,用PBS分散,随后吸取1.5 mL,加入3 mL
17、10%三氯醋酸(w/v),在4、4500 r/min离心30 min;吸取上清液2 mL,加0.67%硫代巴比妥酸(w/v)4.5 mL,沸水浴10 min,离心,于532 nm波长处测吸光值,根据MDA标准曲线计算含量。2.4.4 脱氢酶活性测定 脱氢酶活性测定参照文献15,并稍作改进。取经PBS分散的菌液6 mL,加入2 mL Tris-HCl(pH 8.8)溶液,以及2 mL TTC-葡萄糖溶液,37 水浴加热2 h,分别加入7.5 mL甲苯和冰醋酸溶液,室温放置1 h后,于485 nm波长处测吸光值;以未经二氧化氯处理的细菌作为阴性对照。2.5 细菌形态观察取“2.1.2”项下培养的细
18、菌,二氧化氯处理16 h,用6 mm无菌打孔器取菌饼,分散于灭菌蒸馏水中,8000 r/min离心5 min;弃上清液,加入2 mL 2.5%戊二醛(w/v),4下放置12 h;然后参照Tao等16方法进行梯度洗脱,样品经自然干燥后,喷金、上样,在扫描电镜下观察形态。2.6 统计学分析样品测定重复3次,以平均值标准偏差表示。使用Origin 2021软件作图,SPSS 26.0软件进行统计分析17,当P0.05时,组间有显著性差异。3 结果3.1 抑菌活性菌落直径结果如表1所示,二氧化氯浓度与菌落直径呈负相关,即浓度越大,菌落直径越小。采用相同浓度的二氧化氯处理后,褐腐菌的菌落直径均显著小于酵
19、母菌和大肠埃希菌,表明二氧化氯对褐腐菌的杀菌效果最好。细菌存活率表现了相同的趋势,即随着二氧化氯浓度的升高,细菌存活率下降,显示了二氧化氯较强的杀菌作用(图1);浓度0.025 mmol/L时褐腐菌的存活率显著低于酵母菌和大肠埃希菌(P0.05),浓度0.05 mmol/L时酵母菌存活率显著低于大肠埃希菌(P0.05)。3.2 抑菌机制研究3.2.1 电导率 电导率测定结果如图2(A)所示,随着二氧化氯浓度的增加,细菌培养液的电导率不断增加;在二氧化氯浓度0.0125 mmol/L时,3种菌株电导率无显著性差异;二氧化氯浓度升至0.025 mmol/L,电导率中国抗生素杂志2023年8月第48
20、卷第8期.897.胞外DNA浓度显著高于其他两种细菌(P0.05)。3.2.4 MDA含量 细菌MDA含量测定结果如图2(D)所示,随着二氧化氯浓度增加,细菌胞内MDA含量逐渐增大;在多数浓度作用下,MDA含量顺序为褐腐菌酵母菌大肠埃希菌,浓度0.0125 mmol/L时褐腐菌胞内产生的MDA显著高于酵母菌和大肠埃希菌(P0.05)。3.2.5 脱氢酶活性 脱氢酶活性测定结果如图2(E),随着二氧化氯浓度增加,3种细菌的脱氢酶活性迅速降低。二氧化氯浓度为0.0125 mmol/L时,大肠埃希菌的酶活性显著高于褐腐菌与酵母菌(P0.05),表明二氧化氯对大肠埃希菌酶的破坏作用相对较弱;二氧化氯浓
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 氧化 褐腐菌 酵母菌 大肠 埃希菌 抑菌作用 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。