大黄酸对革兰阴性菌的体外抑菌作用及其机制研究.pdf
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1、论著 大黄酸对革兰阴性菌的体外抑菌作用及其机制研究古卓强梁文辉 作者单位:广州市广州中医药大学第一附属医院【摘 要】目的 探讨大黄酸对革兰阴性致病菌的体外抑菌作用及其机制 方法采用液体二倍稀释法测定大黄酸对大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌等革兰阴性致病菌的最低抑菌浓度()和最低杀菌浓度()同时以大肠埃希菌为对象采用酶标仪检测核酸、蛋白质等细胞膜内含物的渗透量 结果 大黄酸对大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌等标准菌株的 为./为./同时在大黄酸作用后大肠埃希菌细胞膜内的核酸、蛋白质外泄量明显增加 结论 大黄酸对革
2、兰阴性菌具有良好的抑菌作用作用机制与破坏菌体细胞膜的通透性有关【关键词】大黄酸革兰阴性菌体外抑菌作用作用机制【】././.【】././.【】革兰阴性菌指革兰氏染色反应呈红色的细菌常见的有大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、嗜水气单胞菌是临床颅脑、呼吸道、胸腹腔、胆道、泌尿道、血流等感染性疾病的主要致病原 据 年 中国细菌耐药监测结果显示 年共收集国内主要地区 所医院临床分离菌 株其中革兰阳性菌占.革兰阴性菌占.中国细菌耐药监测研究 革兰阴性菌监测报告中显示大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等为临床上易产生耐药的主要致病菌且其多重耐药菌
3、()、泛耐药菌()问题日益突出 由于革兰阴性菌自身的特殊结构药物较难以有效渗透而发挥抗菌作用同时因乱用、滥用引发的耐第三代头孢菌素大肠埃希菌、耐碳青霉烯绿假单胞菌等耐药性问题使得临床上缺乏安全有效的用于治疗耐药革兰阴性菌感染的药物严重威胁人类健康近年来研究发现中草药的单体化合物对革兰阳性菌、革兰阴性菌均有不同强度的抗菌活性表现出广谱抗菌作用同时对细菌的代谢活动调控、细胞膜通透性、生物膜形成、耐药质粒产生等方面均可临床合理用药 年 月 日第 卷第 期 发挥作用表现出多途径抑菌作用 因此在新型抗生素研发时从中草药天然产物寻找和开发抗菌先导化合物具有重要的实际意义可为临床治疗感染性疾病快速提供新的药
4、物方案 本研究选用大黄酸为受试药物开展对革兰阴性菌的抗菌活性及作用机制研究为临床治疗细菌感染性疾病提供一定的参考依据 材料与方法.菌株来源 标准菌株:大肠埃希菌 福氏志贺氏菌()绿脓杆菌 副溶血弧菌(广东环凯微生物科技有限公司提供)鲍曼不动杆菌 肺炎克雷伯菌(广东省微生物菌种保藏中心提供).试剂与仪器大黄酸(上海源叶生物科技有限公司提供)培养基、培养基、.溶液(青岛海博生物技术有限公司提供)试剂盒江苏宝莱(酶免)生物科技有限公司提供二甲基亚枫(天津市富宇精细化工有限公司提供)洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司生产)型压力蒸汽灭菌器(合肥华泰医疗设备有限公司生产)恒温培养箱(上海一恒科技有限公
5、司生产)酶标仪(公司生产).实验方法.药液制备:称取大黄酸 先加入二甲基亚砜溶液 振荡溶解再加入无菌水定容至 制备成./的溶液置于冰箱 保存备用.菌液制备:将标准菌株接种于已灭菌的液体培养基中 培养 与麦氏比浊管比对用无菌生理盐水配制成.个麦氏浊度即 /.最低抑菌浓度()测定:取 孔板在每横排孔中加入菌液 再加入 “.”项下大黄酸溶液至第 孔吹打混匀采用倍比稀释法使得混合液中大黄酸质量浓度依次为、.、.、.、.、.、.、.、./以 二甲基亚砜溶液和菌液为阳性对照肉汤培养基和菌液为阴性对照每孔再加入 的.溶液实验平行 份将 孔板置于 培养箱中培养 取出后根据颜色变化进行判别无颜色变化者即为.最低
6、杀菌浓度()测定:选取大黄酸质量浓度为、对应孔吸取 混合液进行涂板将琼脂板置于 培养箱中培养 以菌落数 个者为.细胞膜内含物外泄量测定:将对数生长期浓度的菌液比浊稀释至 /取适量于试管中加入大黄酸溶液使得质量浓度为 以二甲基亚砜溶液和菌液为对照组置于 培养箱中培养 每隔 取出在 /离心 采用酶标仪测定上清液的 值评价核酸外泄量水平同时将上清液加样至 试剂盒采用酶标仪测定 计算蛋白质外泄量实验平行 份 结 果.大黄酸对革兰阴性菌的 测定 大黄酸对大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌的 范围为./测定结果显示大黄酸对不同革兰阴性菌的作用强弱依次为:副溶血弧菌
7、福氏志贺氏菌 鲍曼不动杆菌/肺炎克雷伯菌 绿脓杆菌 大肠埃希菌其中对副溶血弧菌的抗菌作用最强对大肠埃希菌的作用则最弱见表 表 大黄酸对革兰阴性菌的 测定结果菌株(/)菌株(/)大肠埃希菌.肺炎克雷伯菌.福氏志贺氏菌.绿脓杆菌.鲍曼不动杆菌.副溶血弧菌.大黄酸对革兰阴性菌的 测定大黄酸对大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌的 范围为./测定结果显示大黄酸对不同革兰阴性菌的作用强弱依次为:副溶血弧菌 福氏志贺氏菌 鲍曼不动杆菌 肺炎克雷伯菌 绿脓杆菌/大肠埃希菌其中对副溶血弧菌的抗菌作用最强对大肠埃希菌、绿脓杆菌的作用则最弱见表.大黄酸作用后大肠埃希菌细内含物
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