DACT3在卵巢癌中的表达及其意义.pdf
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1、交通医学 2023 年第 37 卷第 4 期 Med J of Communications,2023,Vol.37,No.4咱文章编号暂1006-2440渊2023冤04-0341-04咱引文格式暂徐慧,王璇,韩勇,等.DACT3 在卵巢癌中的表达及其意义 J.交通医学,2023,37(4):341-344.*基金项目 南通市科技项目(JC2021148;JC2021150)。*作者简介 徐慧,女,汉族,江苏宿迁人,生于 1995 年 11 月,硕士。研究方向:妇科肿瘤。通信作者:石宇,E-mail:DACT3 在卵巢癌中的表达及其意义*徐慧1袁2*袁王璇2袁韩勇3袁4袁石宇3渊1淮安市第二
2、人民医院妇产科袁江苏 223002曰2南通大学医学院曰3南通大学附属医院肿瘤放疗科曰4上海交通大学附属第一人民医院肿瘤中心冤摘要目的院探究 茁-环连蛋白抑制基因 3(dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 3,DACT3)在卵巢癌中的表达及其预后意义。方法院从 TCGA 及 GTEx 数据库中收集卵巢癌组织基因测序数据,分析 DACT3 表达与卵巢癌患者总生存期(overall survival,OS)及无进展生存期(progression-free survival,PFS)的相关性。选择 60 例手术切除的浆液性卵巢癌及正常卵巢组织标本
3、,采用免疫组化检测组织中 DACT3 表达,分析 DACT3 表达与患者临床病理特征及OS 的相关性,采用单因素和多因素 COX 回归分析影响卵巢癌预后的危险因素。采用细胞划痕实验观察 siRNA 转染对人卵巢癌腺癌细胞株 SKOV3 迁移能力的影响。结果院TCGA 及 GTEx 数据库数据显示,DACT3 高表达患者的 OS 和PFS 较短(P约0.05),COX 回归分析显示,DACT3 表达是影响卵巢癌预后的独立危险因素(P=0.00051)。对 60 例临床卵巢癌患者分析显示,DACT3 表达与肿瘤分化程度及 FIGO 分期相关(P0.05),DACT3 高表达患者 OS 较短。免疫组
4、化显示,卵巢癌组织中 DACT3 高表达,高级别卵巢癌组织中 DACT3 表达较低级别更强。干扰 DACT3 表达后 SKOV3 细胞迁移能力显著减弱。结论院DACT3 在卵巢癌中高表达,是影响卵巢癌预后的独立危险因素,有可能作为卵巢癌患者的预后指标和分子治疗的靶标。关键词茁-环连蛋白抑制基因 3;卵巢癌;预后中图分类号R737.31文献标志码ADOI10.19767/ki.32-1412.2023.04.003Expression and significance of DACT3 in ovarian cancerXU Hui1袁2,WANG Xuan2,HAN Yong3袁4,SHI Y
5、u3(1Department of Obsetetrics and Gynecology,Huai爷an Second People爷s Hospital,Jiangsu 223002;2Medical College of NantongUniversity;3Department of Radiation Oncology,Affiliated Hospital of Nantong University;4Cancer Center of the First People爷s Hospital affiliated to the Shanghai Jiao Tong University
6、)AbstractObjective:To investigate the expression and prognostic significance of dishevelled-binding antagonist ofbeta-catenin 3(DACT3)in ovarian cancer.Methods:Ovarian cancer tissue and normal tissue sequencing data were down鄄loaded from the Cancer Genome Atlas(TCGA)and GTEx databases to analyze the
7、 correlation of DACT3 with overall sur鄄vival(OS)and progression-free survival(PFS)in patients with ovarian cancer.Sixty cases of serous ovarian cancer andnormal ovarian tissue were selected.Immunohistochemistry was performed to detect DACT3 expression in ovarian cancertissues.Univariate and multifac
8、torial COX analyses were performed to test the risk factor affecting the prognosis of ovariancancer.Cell migration ability of SKOV3 was detected by cell scratch assay.Results:TCGA and GTEx database data dis鄄played that OS and PFS were shorter in patients with high DACT3 expression(P0.05);COX analyse
9、s suggested thatDACT3 could be an independent prognostic predictor in ovarian cancer(P=0.00051).Analysis of 60 ovarian cancer patientsshowed that DACT3 expression was correlated with tumor differentiation and FIGO stage(P1.5 且P0.01。RNA-seq 数据使用 R 语言进行归一化处理。1.2临床资料收集 2016 年 1 月2017 年 12 月南通大学附属医院 60
10、例手术切除的浆液性卵巢癌及其癌旁正常卵巢组织标本,年龄 32耀74 岁,平均55依2.02 岁;低级别 33 例,高级别 27 例;FIGO 分期I耀II 期 33 例,III耀IV 期 27 例。本研究获我院医学伦理委员会批准同意。1.3免疫组化检测 DACT3 表达将 60 例手术切除的浆液性卵巢癌及其癌旁正常卵巢组织标本连续切片,4 滋m 厚,免疫组化染色采用 ElivisionTMPlus 法。DACT3 表达水平根据染色强度和范围综合评估。染色强度:未染色计 0 分,淡黄色计 1 分,浅棕色计 2 分,深褐色计 3 分。染色范围:阳性细胞占总细胞75%计 4 分。上述两项得分的乘积为
11、最终分数,逸3 分视为高表达,约3 分为低表达。1.4细胞培养与转染人卵巢癌 腺癌细胞 株SKOV3(ATCC 细胞库)以 DMEM 高糖培养基(含10%FBS 和 1%青霉素-链霉素)于 5%CO2、37 益下培养,当镜下细胞密度达到 80%耀90%时传代,传代后细胞密度达到 70%时进行 siRNA 转染,采用Lipofectamine 2000 试剂(美国 Thermo Fisher)进行细胞转染。分为 DACT3 干扰组和阴性对照组。1.5Western blot 实验收集转染 48 h 的 SKOV3细胞,用 RIPA 裂解液提取蛋白。经 SDS-PAGE 电泳后转移至 PVDF 膜
12、上,5%脱脂牛奶封闭。加入一抗稀释液(DACT3 稀释比例 1颐250,GAPDH 稀释比例1颐1 000),4 益孵育过夜。TBST 洗膜,加二抗稀释液(1颐3 000)室温孵育 1 h,TBST 洗膜后,使用 ECL 化学发光检测试剂盒进行信号检测。DACT3 购自 Bio-Techne,GAPDH 及二抗购自碧云天生物技术有限公司。1.6细胞划痕实验收集已转染的 SKOV3 细胞分别接种在 6 孔板上,置于 37 益、5%CO2培养箱中培养。细胞密度达到 90%以上时,采用无菌枪头在培养皿中均匀划痕,PBS 洗涤 3 次,加入无血清培养基继续培养。在划痕 0 h 和 24 h 后显微镜下
13、拍照,通过Image J 图像处理软件计算划痕愈合率。1.7统计学处理应用 SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析。计数资料以频数和率表示,组间比较采用字2检验;采用 Kaplan-Meier 法分析患者生存期;单因素及多因素 COX 比例风险回归模型分析 DACT3与卵巢癌预后的关系。以 P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1DACT3 基因与卵巢癌预后相关基于 TCGA数据库卵巢癌组织基因表达及生存数据分析,有 40个基因在卵巢癌组织中差异表达,并与预后相关(图1A),DACT3 表达与卵巢癌患者总生存期(overallsurvival,OS)及无进展生存期(progressio
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