铁代谢异常在乙型肝炎病毒感染慢性化中作用机制的初步研究.pdf
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1、铁代谢异常在乙型肝炎病毒感染慢性化中作用机制的初步研究潘 颖 杨 凯 孙蓓蓓基金项目:安徽省自然科学基金面上项目(编号)和安徽省高校自然科学研究重点项目(编号)的成果之一收稿日期:第一作者简介:潘颖()安徽芜湖人 主管检验师 硕士研究生:(安徽医学高等专科学校 安徽医科大学第二附属医院 安徽合肥)摘要:目目的的 研究慢性乙型肝炎患者肝组织铁的表达及分布 并在体外细胞初步探讨铁代谢异常在乙肝病毒感染慢性化中的作用机制 方方法法 以普鲁氏蓝铁染色检测 例不同程度的慢性乙型肝炎()患者及 例非 患者肝组织铁表达情况并分析肝组织中铁的表达与 严重程度的关系 比较分析 细胞和含有完整的 病毒颗粒的 细胞
2、内和上清中铁代谢相关指标含量的差异 运用柠檬酸铁处理 细胞 荧光定量 技术检测细胞上清 的水平 化学发光法测定细胞上清液中 和 含量 结结果果 普鲁氏蓝铁染色结果显示 患者肝组织中铁的表达量显著高于非 患者肝组织 且与肝脏炎症等级呈显著正相关 细胞内及上清液中铁蛋白的含量显著高于 细胞()柠檬酸铁可促进 分泌 及乙肝抗原的表达 结结论论 感染可诱导肝组织的铁沉积 引起铁代谢紊乱而铁可促进 的复制及抗原的分泌 关键词:乙肝病毒 炎症 铁沉积 铁蛋白 中图分类号:文献标识码:文章编号:()():/乙型肝炎病毒()是一种嗜肝性病毒 通过与肝细胞上特异性受体结合进入肝细胞完成病毒复制的同时 引起局部肝
3、组织免疫炎症与损伤 部分患者肝脏在持续炎症处理下 逐步发展为慢性乙型肝炎()、肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌 据估 现阶段约有 亿人携带 病毒并呈慢性感染 每年死亡人数高达 万 严重威胁人类的生命健康 目前研究认为 感染与宿主相互作用关系决定 感染结局 研究表明 患者体内免疫系统的免疫细胞耗竭或功能下降是维持肝细胞内 持续复制和感染慢性化的重要机制之一铁是维持人体正常生命活动的基本元素之一在造血细胞生成、氧化代谢转化和基因转录复制中扮演重要角色 近年来 国内外研究报道器官或组织内铁含量过多 出现铁过载现象 能通过诱导机体产生大量活性氧自由基继而发生局部炎症反应 团队发现意大利 感染患者肝脏较易出
4、现铁过载 但与 合并感染患者肝脏铁过载更为严重 无独有偶 我国学者 等研究证实 相较健康人群 感染患者血清铁蛋白含量显著升高且与肝脏炎症呈正相关 尽管国外报道 感染患者肝组织铁沉积情况 但关于我国 患者肝组织铁沉积研究报道却较为鲜见 为此 该研究拟以普鲁氏蓝铁染色方法分析 患者肝组织铁沉积情况 在此基础上 通过体外细胞实验进一步研究肝细胞内铁与 相互作用在病毒感染慢性化中的可能机制 研究对象和方法 研究对象 年第 期 九江学院学报(自然科学版)()(总第 期)(.)收集 年 月 年 月安徽医科大学第二附属医院住院患者肝组织穿刺标本 例 分别来自 例确诊的 患者和 例非 患者 临床诊断标准符合中
5、华医学会感染病学分会和肝病学分会制定的 慢性乙型肝炎防治指南(年版)患者均已知情同意 试剂与仪器 和 由安徽医学高等专科学校生化检验实验室保存 普鲁士蓝染色试剂购自北京索莱宝科技有限公司 铁和铁蛋白测定试剂盒购自德国西门子 兔抗人铁蛋白抗体购自英国 公司 山羊抗兔 ()试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司 柠檬酸铁购自美国 公司 核酸提取试剂盒购自上海复星医药公司 和 检测发光试剂盒购自瑞士罗氏公司 荧光显微镜()购自 全自动蛋白分析仪()购自德国西门子公司 电化学发光全自动免疫分析仪()购自瑞士罗氏公司 荧光定量 仪()购自美国 公司 方法 细 胞 培 养 与 爬 片 制 作 和 细胞复苏后
6、用含 胎牛血清的 培养基 在、培养箱内培养并制作细胞爬片 具体方法如下:将 的专用细胞爬片置于 孔板中 以/孔的细胞浓度接种传代生长良好的细胞 待细胞 融合时改为无血清培养基培养 后 倒去培养基 洗涤盖玻片 次 预冷的 多聚甲醛固定爬片 浸洗玻片 次 每次 普鲁士蓝染色分析铁在肝组织中的沉积 选取肝组织切片()经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、蒸馏水水化后与普鲁士蓝铁染色:清洗石蜡片 与滴加新鲜配置的 盐酸与 亚铁氰化钾等体积混合液 常温孵育染 蒸馏水充分冲洗 后加入核固红染色液复染细胞核 蒸馏水冲洗 常规脱水透明 中性树胶封片 镜检拍照 细 胞 免 疫 荧 光 分 析 铁 蛋 白 在 和 细胞中的
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