棉类纺织品文物霉变菌株的分离与鉴定.pdf
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1、第 卷 第 期 年 月文物保护与考古科学 .收稿日期:修回日期:基金项目:年度开封市哲学社会科学规划调研课题()资助作者简介:曾祥鹤()年毕业于北京服装学院服装设计与工程专业研究方向传统服饰与文物 :.文章编号:():././.棉类纺织品文物霉变菌株的分离与鉴定曾祥鹤(开封大学艺术设计学院河南开封)摘要:纺织品文物霉变研究在纺织品文物保护、修复、贮藏中占重要地位 为了确定馆藏棉类纺织品文物霉变微生物的种类了解棉织物纺织品文物真菌病害特点本研究采用 培养基对棉类纺织品文物上霉变部位提取微生物进行分离纯化对纯化后的霉菌进行 序列分析通过比较 核酸序列数据库序列同源性构建发育树 最终分离纯化共得到
2、株霉菌测序结果鉴定为青霉属、交链孢霉属、曲霉属、镰刀属该四种霉属可能是棉类纺织类文物的致霉优势霉属 利用形态学方法结合分子生物学手段对棉类纺织品文物霉变微生物进行分离鉴定确保获取结果更加快速和精准结合当前博物馆对纺织品文物的保护现状提出棉类纺织品文物综合保护措施为此类文物的防霉工作以及抗霉材料的开发提供理论依据关键词:纺织品文物菌种分离菌种鉴定 序列中图分类号:文献标识码:引 言纺织品文物作为我国文化遗产的重要组成部分是古代文明的载体之一也是我国文化软实力的重要代表 纺织品文物通常是由蚕丝、棉麻、葛布等天然材料织造而成在掩埋、挖掘以及保存的过程中易受侵蚀细菌、软腐真菌和腐生真菌等微生物的侵蚀和
3、降解 霉菌对纺织品的危害是持久的、多样的霉菌能够将含有碳、硫等营养源的棉、毛和丝纤维分解为养分促进自身快速繁殖和生长同时霉菌分泌有机酸和色素对文物造成酸蚀、颜色污染甚至造成腐烂和降解等危害并且霉菌具有顽强的生命力有的能持续几十年的休眠期 目前留存在世的纺织品文物服饰通常是从棺椁、土壤中发掘有研究表明埋藏于地下的服饰类文物微生物降解主要来自侵蚀细菌和软腐真菌在纺织品文物中至今已发现 余属 多种霉菌 博物馆中常见的霉菌有根霉菌、曲霉菌、球毛壳菌、青霉菌等纺织品文物相较于瓷器文物、木质文物、金属文物等更容易受到腐蚀 陶娅妃对纺织物上霉变微生物进行分离鉴定共得到三种致霉菌分别为曲霉属、青霉属和根霉属
4、王毅婧对真丝文物上的霉变微生物进行分离鉴定共得到三种致霉菌孢霉属、曲霉属和芽枝霉属 纺织品文物又因其材质、染料、颜料、性质等因素在馆藏过程中易受外界环境影响 因此对纺织品文物上的真菌进行分离鉴定确定致霉优势菌属根据其生长规律和生理生化特性为纺织品文物开发长效防霉技术靶标菌株 对文物保护具有重要意义 目前对纺织品霉变菌株的研究多利用生物技术手段对霉变菌株进行分离纯化、形态学鉴定以及生物学鉴定从而确定致霉优势菌属为文物的清洗、修复、保存奠定理论基础 本研究从已发生霉变的棉类纺织品文物上的酶菌斑块提取霉菌利用 培养基分离纯化得到了单一的菌株再采用显微形态学观察与 序列分析相结合的方法对霉变微生物进行
5、鉴定 确定致霉优势菌属为纺织品文物的博物馆防霉保护工作以及抗霉材料的开发提供理论依据 样品和方法.材料与仪器.霉变织物本次实验所采集的霉菌来自河南省开封市汴绣私人博物馆中一件表面明显发生霉变的棉织物文物(图)据记载该文物属于晚清年 文物保护与考古科学第 卷间文物常年保存在室内温度 相对湿度 之间的环境中 通过对织造组织以及毛边显微镜观察分析可知该文物是棉织物 霉菌附着在纺织品文物表面成散落状服装对襟领口处霉斑较为明显暂无侵蚀织物内部结构迹象图 霉变纺织品文物.试剂 培养基:马铃薯切块 煮沸 过滤滤液加入葡萄糖 琼脂 蒸馏水定容至 液体培养基与固体培养基成分和配制方法相同不加琼脂 以上培养基经过
6、高压灭菌后使用 引物采用真菌通用引物(表)由上海生物工程有限公司合成 试剂盒购自上海生物工程有限公司 购自河南东格生物技术有限公司真菌基因组 提取试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司表 引物序列 引物序列 .仪器 超净工作台:苏州苏洁净化设备股份有限公司振荡培养箱:上海智诚科学仪器公司可见分光光度计:海精密科学仪器有限公司灭菌锅:上海申安医疗器械厂显微镜:凝胶成像系统:东胜有限公司.方法.霉变菌株采集、分离、纯化用无菌棉签轻轻擦拭汴绣文物表面霉斑部位轻轻涂在 培养基平板中于 培养箱中恒温培养 形成菌落 挑选菌落在新的 培养基平板中划线继续培养 后选择菌落形态典型、分离效果明显的平板分别挑取单菌落边
7、缘的菌丝转接到新的 培养基平板上继续培养经此方法 次纯化后获得单菌落菌株.形态学鉴定利用无菌接种环挑取少量纯化后的菌落菌丝在 培养基平板中间点植接种 于 霉菌培养箱中恒温培养 形成菌落观察菌落的生长情况和形态特征并拍照按照真菌鉴定手册 对分离得到的霉菌进行初步鉴定 利用乳酸石炭酸染料对菌丝进行染色观察显微结构并拍照.霉菌 提取 取纯化过的菌落或菌丝接种于 液体培养基中于 条件下于摇床震荡培养 收集 菌液离心弃上清 根据试剂盒说明书对霉菌 进行提取.分子生物学鉴定 扩增真菌 序列使用通用引物 和 反应体系以及条件如表 所示 产物进行 的琼脂糖凝胶检测观察条带形状 同时委托上海生工公司对其进行序列
8、测定 将测序结果提交至 核酸序列数据库中进行 分析对比使用 软件构建系统发育树表 反应体系以及反应条件 反应体系物理量/反应条件 ()()个循环模板(/)合计 保存 结果和讨论.分离纯化结果通过分离纯化获得 株霉菌 依次编号为、(图).形态观察结果菌株:生长速度缓慢 培养 菌落直径约 菌落呈绒毛状初期呈白色后变为绿褐色但边缘呈白色 培养基中未见菌丝但在液体 培养基中有菌丝且呈白色 反面观呈淡黄色 显微结果发现菌丝较长分生孢子梗在顶端分枝产生小梗如帚状偶有单论生或不规则者孢子多数呈双胞呈球形或卵圆形壁光滑分生孢子第 期曾祥鹤:棉类纺织品文物霉变菌株的分离与鉴定 链疏松不规则菌株:生长速度比较缓慢
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