%5E%2860%29Co-γ辐射对北美红花七叶树的诱变效应.pdf
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1、2023 年 6 月第 3 期145152甘肃农业大学学报 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY第5 8卷双 月 刊60Co-辐射对北美红花七叶树的诱变效应李玉岭1,张元帅2,毛秀红1,董元夫2,刘翠兰1,闫少波3,高铖铖1,王婉朝1,郭慧1(1.山东省林业科学研究院,山东 济南 250014;2.费县国有大青山林场,山东 费县 273400;3.鲁担(山东)城乡冷链产融有限公司,山东 济南 250000)摘要:【目的】为探讨60Co-射线对北美红花七叶树种子的诱变效应并确定其辐射半致死剂量。【方法】以北美红花七叶树种子为试材,采用不同辐照剂量(0、
2、100、200、300、400 Gy)60Co-进行辐射处理,分析辐射对北美红花七叶树种子出苗及幼苗生长的影响。【结果】辐照剂量与种子相对出苗率为极显著负相关,种子辐射半致死剂量为217.76 Gy。辐射后幼苗出现叶型改变、叶面扭曲、叶边缘变异等,300 Gy剂量下叶型和叶边缘变异比例最高。辐射处理的北美红花七叶树生长性状与对照差异不显著。随着60Co-射线辐照剂量的增加,抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性,叶绿素及类胡萝卜素含量均呈现先升高后下降的趋势,抗氧化酶活性在300 Gy最高。相关性分析得出,辐照剂量与复叶宽、小叶宽、可溶性蛋白、相对电导率存在显著相关性。【结论】综合种子半致死剂
3、量和生长、生理指标,确定北美红花七叶树种子适宜的辐照剂量为200300 Gy。可为七叶树属植物辐射育种提供科学参考。关键词:60Co-射线;北美红花七叶树;辐射诱变;半致死剂量;抗氧化酶中图分类号:S722.3+5 文献标志码:A 开放科学(资源服务)标识码(OSID):文章编号:1003-4315(2023)03-0145-08The mutation induction effect of 60Co-ray radiation on Aesculus paviaLI Yuling1,ZHANG Yuanshuai2,MAO Xiuhong1,DONG Yuanfu2,LIU Cuilan1
4、,YAN Shaobo3,GAO Chengcheng1,WANG Wanchao1,GUO Hui1(1.Shandong Academy of Forestry,Jinan 250014,China;2.Feixian Stateowned Daqingshan Forest Farm,Feixian 273400,China;3.Ludan(Shandong)Urban and rural Cold Chain Industry and Finance Co.,LTD,Jinan 250000,China)Abstract:【Objective】The study aimed to in
5、vestigate mutagenic effect of 60Co-radiation on seeds of Aesculus pavia and to determine the semi-lethal dose of radiation.【Method】Seeds of A.pavia were treated with different doses of 60Co-rays(i.e.,0,100,200,300,400 Gy)to assess the effects of radiation on emergence rate and seedling growth.【Resul
6、t】The results showed that there was a significant negative correlation between radiation dose and relative seeding emergence rate,with the seed radiation semi-lethal dose(LD50)being 217.76 Gy.After radiation,the leaves of the plant exhibited leaf shape changes,twisted leaf DOI:10.13432/ki.jgsau.2023
7、.03.019第一作者:李玉岭,在读博士生,工程师,研究方向为林木遗传育种。E-mail:通信作者:毛秀红,正高级工程师,博士,研究方向为林木遗传育种。E-mail:闫少波,工程师,本科,研究方向为观赏植物栽培。E-mail:基金项目:山东省农业良种工程项目(2020LZGC011-3)。收稿日期:2023-03-16;修回日期:2023-05-23甘肃农业大学学报2023 年blades,and variable leaf margins,with the highest variation proportion for leaf shape and leaf margins observe
8、d at 300 Gy.However,there were no significant differences in growth traits of A.pavia between the radiation treatment and the control.Furthermore,the antioxidant enzyme activities(SOD,POD,CAT),chlorophyll and carotenoid contents showed a trend of increasing and then decreasing with increasing doses
9、of 60Co-radiation,with the highest antioxidant enzyme activities observed at 300 Gy.Correlation analysis showed significant correlations between irradiation dose and compound leaf width,leaflet width,soluble protein,and relative electric conductivity(REC).【Conclusion】Based on the semi-lethal dose of
10、 seeds and physiological indexes of seedlings,the study suggests that the suitable radiation dose for A.pavia is 200300 Gy,which can provide scientific reference for radiation mutation breeding of Aesculus.Key words:60Co-radiation;Aesculus pavia;radiation induced;semi-lethal dose;antioxidant enzyme七
11、叶树属(Aesculus)为无患子目七叶树科植被(Hippocastanaceae),世界约有30个种,主要分布在欧洲、美洲及亚洲1。北美红花七叶树(Aesculus pavia)为七叶树属落叶小乔木或灌木,原产于北美洲,树皮呈灰褐色,掌状复叶,小叶57枚,花序为红色圆锥形,小花4瓣(2个长柄勺状花瓣和2个宽的侧面花瓣),果实近圆形。该树种生长速度中等,耐阴,适宜在温暖、湿润的环境生长,在中国黄河流域及东部各地都有引种栽培,具有重要的观赏及药用价值。辐射育种是利用物理因素(如射线、电子束)诱导植物遗传物质发生突变而产生新种质的方法,具有诱变成功率高、突变谱广、育种周期短等特点2-3,被广泛应用
12、于农作物4、果树5-6、观赏植物7-9、药用植物10及林木11上。辐射常用的诱变源包括可电离辐射源(、X、等射线源和中子、电子束)和非电离辐射源(重离子束、激光和紫外线),据统计利用和X射线成功诱变的品种占注册品种总数的 70%以上12-13,射线又以60Co-应用最为普遍。研究表明,射线能刺激植物细胞组织生长,促进生理生化反应,从而影响植物生长发育14。在辐射育种中,诱变材料的选择非常关键,需要选择综合性能好,适应环境强的作为诱变材料。诱变材料非常广泛,分为植株、种子、无性繁殖器官、花粉、子房、单细胞、胚状体、愈伤组织等,以种子应用最多4,15。北美红花七叶树引种到国内栽培已有几十年,种质资
13、源相对单一,且辐射育种在北美红花七叶树上的研究未见报道,因此本研究采用60Co-对北美红花七叶树种子进行辐射处理,探索其种子半致死剂量及幼苗的变异情况,旨在为提升北美红花七叶树辐射诱变效率,丰富七叶树属种质资源及选育北美红花七叶树新品种打下坚实基础。1材料与方法1.1试验材料2021年10月在山东省潍坊市采集健康、成熟的北美红花七叶树种子,进行层积沙藏贮存。当年12月于山东泉港辐射科技发展有限公司对北美红花七叶树种子进行60Co-辐射处理,剂量率为5 Gy/min。试验设0(CK)、100、200、300、400 Gy剂量梯度,对应辐照时间为0、20、40、60、80 min,每个剂量辐射20
14、粒种子,3次重复。辐射后的种子播种在费县国有大青山林场温室育苗圃的营养钵中。育苗基质为园土 珍珠岩 草炭土 蛭石,体积比10 5 4 1,常规育苗水肥管理。1.2试验方法1.2.1出苗率统计定期观察北美红花七叶树种子出苗情况,统计90 d内出苗的种子数占比来计算出苗率。出苗率=90 d内出苗种子数辐射种子数100%相对出苗率=辐射种子出苗率对照种子出苗率100%1.2.2半致死剂量计算参考周小梅等16的方法,以辐照剂量x为自变量,不同剂量下种子相对出苗率y为因变量,利用SPSS 20.0得出直线回归方程y=a+bx,计算北美七叶树种子的半致死剂量(LD50)。1.2.3叶片形态统计观察北美红花
15、七叶树成活植株叶片形态变异情况,计算发生叶片变异的植株比例。叶片变异植株比例=发生变异叶片的植株数统计植株数量100%146第 3 期李玉岭等:60Co-辐射对北美红花七叶树的诱变效应1.2.4生长性状测定调查测量辐射诱变北美红花七叶树的株高、地径、复叶长和宽、叶柄长、小叶长和宽、小叶叶脉数等生长性状。1.2.5生理指标测定每个辐射剂量处理随机挑取北美红花七叶树幼苗3株,每株采集不同部位的3片小叶。采用NBT光还原法测定超氧化物歧化酶活力,愈创木酚比色法测定过氧化物酶活力17;采用紫外吸收法测定过氧化氢酶活,硫代巴比妥酸显色(TBA)法测定丙二醛含量,考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质量分数,乙醇萃
16、取法测定叶绿素及胡萝卜素质量分数18;电导率采用梅特勒FE30-FiveEasy电导率仪测定。1.3数据处理采用SPSS 20.0进行多重比较、相关性及回归分析,利用Microsoft Office Excel 2017进行数据统计分析。2结果与分析2.1辐射诱变对北美红花七叶树出苗的影响出苗率可体现出种子发芽并能正常破土生长的能力,是种子活力的直接表现。不同辐照剂量处理对北美红花七叶树出苗率具有不同程度的影响。从表1可以看出,随着辐照剂量的增加,种子出苗率降低,与辐照剂量成负相关,这与辐射会使种胚组织受到伤害,抑制细胞分裂和生长,影响萌发过程中的生理活动有关19。辐照剂量和种子相对出苗率相关
17、性分 析 表 明 两 者 为 显 著 负 相 关,相 关 系 数 r 为-0.957(表2)。2.2辐射半致死剂量通过辐照剂量与北美红花七叶树种子相对出苗率线性回归方程可得出(表3),回归系数b=-0.273,截距(常量)a=109.450,其直线回归方程为:y=109.450-0.273x(y 为种子相对出苗率,x 为辐照剂量)。从直线回归方程可以计算出,当y=50时,x=217.76,即北美红花七叶树种子的半致死剂量LD50=217.76 Gy。另外,表3中回归系数b的检验统计量t值为-5.713,P=0.011,也说明辐照剂量和种子相对出苗率存在显著的线性关系。表1不同辐照剂量对北美红花
18、七叶树种子出苗率的影响Table 1Effect of different irradiation doses on seedling emergence of Aesculus pavia辐照剂量/GyIrradiation dosesCK100200300400种子数Number of seeds6060606060出苗率/%Seedling emergence rate91.672.88 a90.005.00 a53.332.89 b10.000.00 c6.672.88 c相对出苗率/%Relative seedling emergence rate1000.00 a98.153.20
19、 a58.192.78 b10.920.33 c7.313.29 c同列数据后不同小写字母表示差异显著(P0.05)。Different lowercase letters in the same column represented significant differences(P0.05).表2北美红花七叶树辐照剂量和相对出苗率的相关性Table 2Correlation between irradiation dose and relative seedling emergence of Aesculus pavia辐照剂量 Irradiation doses相对出苗率 Relativ
20、e seedling emergence rate辐照剂量Irradiation doses1-0.957*0.011相对出苗率Relative seedling emergence rate-0.957*0.0111*在 0.05 水平(双侧)上显著相关。*There was a significant correlation at the level of 0.05(bilateral).147甘肃农业大学学报2023 年2.3辐射诱变对北美红花七叶树叶片形态的影响经过60Co-射线辐射,北美红花七叶树幼苗叶片变化最直观,图1选取了不同剂量辐射后部分植株叶片,和对照相比,出现叶型变化(图1
21、-A、C、F、G、H、I、K)、叶边缘变化(图1-B、D、E)、叶片扭曲褶皱(图1-E)、叶裂(图1-F、L)4种叶片变异情况(表4)。叶型变异和叶边缘变异的比例都随着辐照剂量增加,出现先增大后减小,在300 Gy时达到峰值。2.4辐射诱变对北美红花七叶树生长的影响辐射处理对北美红花七叶树的生长性状影响不明显,辐射处理和对照无显著性差异(表5)。株高、复叶长、复叶宽在不同辐照剂量间有部分差异,株高在100 Gy和300 Gy时有显著性差异,且100 Gy株高 最 大,300 Gy 株 高 最 小。复 叶 长 在 100 Gy(300 Gy)和400 Gy有显著性差异,复叶宽在100 Gy和40
22、0 Gy呈现显著性差异。总体看,北美红花七叶树在100 Gy处理下生长指标值均大于对照,400 Gy生长指标均小于对照。表明低剂量辐射能促进北美红花七叶树生长,高剂量辐射对生长起到一定抑制作用。2.5辐射诱变对北美红花七叶树生理生化指标的影响随着辐照剂量逐渐增加,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均呈现先升高后下降的趋势,均在300 Gy时达到峰值(表6)。可推断出低剂量辐射能增强抗氧化酶表3一元一次方程回归系数及检验结果(相对出苗率)Table 3Regression coefficients and test results of the quadra
23、tic equation(relative seedling emergence)模型Model(常量)Constant辐照剂量 Irradiation doses非标准化系数Non-standard coefficientb109.450-0.273标准误差Standard error11.6920.048标准系数Standard coefficient-0.957t9.361-5.713显著性Sig.0.0030.011 AC:100 Gy;DF:200 Gy;GI:300 Gy;J:CK;KL:400 Gy图1部分北美红花七叶树辐射诱变后植株叶片Figure 1Leaves of som
24、e Aesculus pavia plants after radiation mutagenesis表4辐射诱变后北美红花七叶树叶片变异率Table 4Leaf variability in Aesculus pavia after radiation mutagenesis辐照剂量(Gy)Irradiation dosesCK100200300400叶片形状变异比例/%Proportion of variation in leaf shape0.0042.5946.8850.0025.00叶边缘变异比例/%Proportion of variation in leaf margins0.0
25、011.1125.0033.3325.00叶片扭曲褶皱比例/%Proportion of leaf blade twisted and folded0.0014.8115.630.0025.00叶裂比例/%Proportion of leaf lobes0.009.263.130.0025.00148第 3 期李玉岭等:60Co-辐射对北美红花七叶树的诱变效应活性,高剂量辐射对抗氧化酶有较强的抑制作用。和对照相比,辐射处理的丙二醛含量略有增加,但差异不显著。辐射处理的可溶性蛋白含量均小于对照,200 Gy最小。相较于对照,辐射处理的相对电导率均显著性增加,400 Gy最大。光合色素(叶绿素a、
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