凋亡蛋白Caspase-9_Caspase-3在慢性间歇性低氧模型小鼠肝损伤中的作用.pdf
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1、凋亡蛋白/在慢性间歇性低氧模型小鼠肝损伤中的作用余孝海 刘国莹 钟明奎基金项目:安徽高校科学研究项目(编号:)安徽省研究生教育质量工程项目(编号:)安徽城市管理 职业学院校科研基金(编号:)收稿日期:通讯作者:余孝海 (安徽医科大学基础医学院 安徽合肥)摘要:目目的的 探索凋亡蛋白/在慢性间歇性低氧模型小鼠肝损伤中的作用 方方法法 将雄性 小鼠随机分为正常氧对照组()、慢性间歇性低氧组()组小鼠放入低氧仓进行间歇性低氧处理(/连续)周后 染色显微镜下观察肝部病理形态学改变 比较两组小鼠血清指标白介素()、白介素()、谷丙转氨酶()、谷草转氨酶()水平 用 检测小鼠肝组织中凋亡蛋白 和 的水平
2、结结果果 与 组相比 组肝组织形态学病理改变受损严重 白介素()、白介素()、谷丙转氨酶()、谷草转氨酶()水平显著升高 凋亡蛋白 和 的表达上调 结结论论 慢性间歇性低氧引起肝损伤 机制可能与凋亡蛋白上调相关 关键词:慢性间歇性低氧 肝损伤 凋亡蛋白 中图分类号:文献标识码:文章编号:()():/间歇性低氧()是阻塞性睡眠呼吸暂停综合征()最为典型的病理生理特征 可以引起代谢综合征损伤多种器官 氧化应激是指体内活性氧()与抗氧化剂和活性氮之间的一种动态平衡被打破 缺血再灌注模型可以模拟 患者睡眠中反复出现的缺氧复氧损伤 缺氧复氧破坏了患者体内抗氧化剂和促氧化剂平衡系统体内过量产生 从而导致过
3、氧化损伤 缺氧还可以造成引起慢性炎症 慢性炎症也是 重要的病理生理学特征 引起的 在体内可过量产生 的过度激活主要是两方面参与机体调节 一方面参与体内氧化应激反应另一方面可以作为第二信使 可以激活低氧诱导因子 和核因子 ()等核转录因子 通路是比较常见的炎症信号通路 同时可以使白介素 ()和肿瘤坏死因子 ()活 化 引 发 炎 症 反应 同时有研究显示 可以促进非酒精性肝病()患者的病情变化 从脂肪肝不断进展为肝硬化、甚至是肝癌 即使是没有伴随 大鼠 也可通过促进一系列炎症反应 从而调控炎症因子活性 一定程度造成肝损伤 氧化损伤与细胞凋亡有很大关系 氧化损伤是导致肝损伤的原因之一 该研究目的是
4、建立慢性间歇性低氧模型观察慢性间歇性低氧时凋亡蛋白在肝脏损伤中的作用 探讨慢性间歇性低氧模型()小鼠对肝损伤机制 材料 动物 实验动物清洁级雄性 小鼠(体重)由安徽长临河医药科技有限(总第 期)(.)年第 期 九江学院学报(自然科学版)()公司 按照安徽医科大学实验动物保护条例执行并严格遵守 合格证号 (皖)实验小鼠被养在标准笼中 每笼不超过 只 暗光循环保证昼夜节律 饲养期间不干预小鼠进食和饮水 动物房环境保持良好的通风和温湿度条件 自由进水和实物充分 室内温度保持 小鼠的使用严格执行 中华人民共和国实验动物管理条例 仪器测氧仪(型 购自南京新飞分析仪器公司)液氮罐(医用 成都金凤液氮容器有
5、限公司)酶标仪(南京德铁实验公司)试剂 压缩氧气(浓度大于 )、压缩氮气(浓度大于 高纯氮气)都是由合肥市医用氧气厂提供 谷丙转氨酶()(长春汇力公司)、谷草转氨酶()(长春汇力公司)、(博奥森生物技术有限公司)白介素()白介素()(北方生物公司)方法 慢性间歇性低氧模型的制备和分组 小鼠在饲养一周后进行实验 随机分成 组、组 每组均为 只 该实验的原理是利用氮气稀释原理 对照该实验室先前的造模方法 将实验组小鼠轻轻放入含有测氧仪探头的低氧舱内 实时显示数据 通过测氧仪探头监测氧浓度 通过两个旋钮调节氧气和氮气气体流量 氧浓度始终控制在 范围内 氧气和氮气由两个旋钮阀门控制 一个循环时间为 先
6、充入氮气 使低氧舱内的氧浓度下降到约 保持约 随即充入氧气 氧浓度恢复至最高约 保持约 循环往复周期 每天 ()共 造模第 之后 将小鼠处死 进行下一步实验 体重的测定 低氧模型制备完成之后 首先进行小鼠体重测量 组织学观察小鼠的肝脏 小鼠的肝组织被清水洗涤之后 用滤纸包裹吸干 多聚甲醛对其进行冲洗 同时准备含有多聚甲醛溶液的试管 在其中固定 实验室脱水机脱水之后 石蜡包埋技术将肝组织包埋成蜡块以备后期观察 将肝脏蜡块标本切成 薄片 随即放入温水中任其自由展开 展开后用载玻片捞出 放入 烘烤箱中约 后进行脱蜡 准备染色并封片 用光学显微镜下放大 倍观察肝脏部病理改变 同时截图留存 血清指标的检
7、测 实验结束后 采用眼球取血 提前加入抗凝剂 离心后提取血清 和 水平采用化学法测定 放射免疫分析法检测测定、水平 具体操作参照相应试剂盒说明 小鼠肝脏凋亡蛋白的测定 小鼠处死后 在冰盘上取出肝脏 取适量肝脏组织与对应剂量的 裂解液在研钵器中充分研磨 裂解液的成分为:/、/、/、充分研磨成匀浆后 放在 冰箱里 离心 用枪头提取上清液 分别装于准备好的 管中 临时保存于冰箱中 统计学处理实验结果 表示 用 软件对数据做统计分析两组之间的比较采用配对 检验 多组之间的比较选用单因素方差分析()为差异有统计学意义 结果 慢性间歇性低氧对小鼠肝细胞结构的影响 正常组在显微镜下肝脏组织细胞形态正常 排列
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