特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-23b-3p水平检测及意义.pdf
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1、2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l基金项目:河北省医学科学研究课题(2 0 2 1 1 7 8 8)特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-2 3 b-3 p水平检测及意义刘 岩1,凌琬茗1,赵瑞雪1,王 浩1,程 毅2(1.河北省儿童医院皮肤科,河北 石家庄0 5 0 0 3 0;2.河北医科大学第四医院皮肤科,河北 石家庄0 5 0 0 0 0)摘 要 目的:探讨特应性皮炎(A D)患儿血清长链非编码R NA母系
2、表达基因3(l n c R NA ME G 3)和微小R NA-2 3 b-3 p(m i R-2 3 b-3 p)水平检测及意义。方法:选取A D患儿1 6 5例(A D组)和体检健康儿童1 6 0例(对照组)为研究对象。采用荧光定量P C R法检测两组血清l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平。采用A D积分指数(S C OR A D)对A D患儿疾病严重程度进行评估,并将A D组患儿分为A D轻度组(6 5例)、A D中度组(6 8例)和A D重度组(3 2例)。比较对照组和A D组以及不同严重程度A D患儿血清l n c R NA ME G 3、m i
3、R-2 3 b-3 p水平。采用P e a r s o n法分析A D组血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p水平和S C O R A D评分三者间的相关性。采用受试者工作特征(R O C)曲线分析血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p水平检测对中、重度A D的诊断价值。结果:与对照组比较,A D组血清l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平显著降低(均P0.0 5)。与A D轻度组比较,A D中度组和A D重度组血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p水平依次降低,S
4、C O R A D评分依次升高(均P0.0 5)。A D组血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p水平呈正相关(r=0.4 0 4,P0.0 5)。血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p水平与S C OR A D评分均呈负相关(r=-0.3 8 3、-0.3 6 6,均P0.0 5)。血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p单项及联合检测诊断中度A D的曲线下面积(AU C)分别为0.8 1 8、0.7 5 3、0.8 8 3。与血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p单独
5、检测比较,两者联合检测诊断中度A D的AU C更高(Z=2.1 7 7、3.5 9 5,均P0.0 5)。血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p单项及联合检测诊断重度A D的AU C分别为0.7 9 4、0.7 7 8、0.8 9 5。与血清l n c R NA ME G 3、m i R-2 3 b-3 p单独检测比较,两者联合检测诊断重度A D的AU C更高(Z=2.1 0 4、2.2 9 3,均P0.0 5)。结论:A D患儿血清l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平呈低表达,与病情严重程度有关,有望成为评估儿童A D病情程度
6、的生物标志物。关键词 特应性皮炎;长链非编码R NA母系表达基因3;微小R NA-2 3 b-3 p;儿童;病情严重程度;诊断价值中图分类号:R7 5 8 文献标志码:A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 0-7 3 7 7.2 0 2 3.0 9.0 3 1D e t e c t i o na n ds i g n i f i c a n c eo f s e r u ml o n gn o n-c o d i n gR N Am a t e r n a l e x p r e s s i o ng e n e3a n dm i c r o R N A-2
7、3 b-3 p i nc h i l d r e nw i t ha t o p i cd e r m a t i t i sL I UY a n,L I NG W a n m i n g,Z HAOR u i x u e,WANG H a o,CHE NGY i(D e p a r t m e n to fD e r m a t o l o g y,H e b e iC h i l d r e nsH o s p i t a l,S h i j i a z h u a n g0 5 0 0 3 0,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e:T o
8、e x p l o r e t h ed e t e c t i o na n ds i g n i f i c a n c eo fs e r u ml o n gn o n-c o d i n gR NA(l n c R NA)m a-t e r n a l e x p r e s s i o ng e n e3(ME G 3)a n dm i c r o R NA-2 3 b-3 p(m i R-2 3 b-3 p)i nc h i l d r e nw i t ha t o p i cd e r m a t i t i s(A D).M e t h o d s:At o t a l o
9、 f 1 6 5c h i l d r e nw i t hA D(A Dg r o u p)a n d1 6 0h e a l t h yc h i l d r e nw h ou n d e r w e n tp h y s i c a l e x a m i n a t i o n(c o n t r o l g r o u p)w e r e e n r o l l e da s s t u d ys u b j e c t s.S e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p l e v e l sw e r ed e t e c t e
10、db y f l u o-r e s c e n c eq u a n t i t a t i v eP C R.T h es e v e r i t yo fA Dw a se v a l u a t e db yu s i n gA DI n t e g r a l I n d e x(S C OR A D)s c o r e,a n dA Dc h i l d r e nw e r ed i v i d e d i n t om i l dA Dg r o u p(6 5c a s e s),m o d e r a t eA Dg r o u p(6 8c a s e s)a n ds
11、e v e r eA Dg r o u p(3 2c a-s e s).T h es e r u ml e v e l so f l n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 pw e r e c o m p a r e db e t w e e nt h ec o n t r o l g r o u pa n dA Dg r o u p,a n da m o n gc h i l d r e nw i t hd i f f e r e n t s e v e r i t yo fA D.P e a r s o nm e t h o dw a su s e d t o
12、a n a l y z e t h e c o r r e l a t i o nb e t w e e ns e r u ml e v e l so f l n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 pa n dS C OR A Ds c o r e i nA Dg r o u p.T h ed i a g n o s t i cv a l u eo fs e r u ml n c R NAME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p l e v e l s i nm o d e r a t ea n ds e v e r eA Dw a sa n a l
13、y z e db ys u b j e c to p e r a t i n gc h a r a c t e r i s t i cc u r v e.R e-s u l t s:C o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p,s e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p l e v e l s i nA Dg r o u pw e r e s i g n i f i c a n t l yd e-c r e a s e d(a l lP0.0 5).S e r u ml n c R NA ME G
14、3a n dm i R-2 3 b-3 p l e v e l s i nm i l dA Dg r o u p,m o d e r a t eA Dg r o u pa n ds e-v e r eA Dg r o u pw e r ed e c r e a s e ds u c c e s s i v e l y,w h i l eS C O R A Ds c o r ew a s i n c r e a s e ds u c c e s s i v e l y(a l lP0.0 5).S e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p l e
15、v e l s i nA Dg r o u pw e r ep o s i t i v e l yc o r r e l a t e d(r=0.4 0 4,P0.0 5),a n ds e r u ml n-c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 pl e v e l sw e r en e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hS C O R A Ds c o r e(r=-0.3 8 3,-0.3 6 6,a l lP0.0 5).T h eAU Co f s e r u ml n c R NA ME G 3a n dm
16、 i R-2 3 b-3 ps i n g l ea n dc o m b i n e dd e t e c t i o n i nt h ed i a g n o s i so fm o d e r-a t eA Dw e r e0.8 1 8,0.7 5 3a n d0.8 8 3,r e s p e c t i v e l y.C o m p a r e dw i t ht h es i n g l ed e t e c t i o no f s e r u ml n c R NA ME G 3a n d5421陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l
17、J o u r n a l2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9m i R-2 3 b-3 p,t h eAU Co f t h e c o m b i n e dd e t e c t i o no f s e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p i n t h ed i a g n o s i so fm o d e r-a t eA Dw a sh i g h e r(Z=2.1 7 7,3.5 9 5,a l lP0.0 5).T h eAU Co f s e r u ml n c R
18、 NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 ps i n g l ea n dc o m b i n e dd e t e c t i o n i nt h ed i a g n o s i so f s e v e r eA Dw e r e0.7 9 4,0.7 7 8a n d0.8 9 5,r e s p e c t i v e l y.C o m p a r e dw i t ht h es i n-g l ed e t e c t i o no f s e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p,t h eAU Co f
19、c o m b i n e dd e t e c t i o no f s e r u ml n c R NA ME G 3a n dm i R-2 3 b-3 p i nt h ed i a g n o s i so f s e v e r eA Dw a sh i g h e r(Z=2.1 0 4,2.2 9 3,a l lP0.0 5)。本研究经医院伦理委员会批准。1.2 主要试剂与仪器 T R I z o l试剂(批号:QY 4 8 5-0 5)、反转录试剂盒(批号:QY 2 7 5-9 9)、P C R试剂盒(批号:QY 5 8 2-9 4)购自保定盛谷生物科技有限公司;荧光定量P
20、 C R仪(型号:E s a n-G e n e6 9 6)购自济南思科生物科技有限公司。1.3 研究方法1.3.1 血清l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平检测:采集A D组 入 院2 4h内 和 对 照 组 空 腹 静 脉 血5m l,静置1 1m i n,4下3 8 0 0r/m i n离心1 3m i n,收集血清。采用T R I z o l试剂提取各血清样本总R NA,反转录为c D NA后,以此为模板使用荧光定量P C R法检测血清中l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平。其中,l n c R NA ME G 3以G
21、A P DH为内参,m i R-2 3 b-3 p以U 6为内参,引物(由扬州芙莱瑞生物技术有限公司设计合 成)序 列 见 表1。反 应 体 系 共3 0l:c D NA2l、缓冲液5l、d NT P4l、上下游引物 各1l、D NA聚合酶1l、d d H2O1 6l。反应程序:9 3 预变性6m i n;9 31 0s,5 52 9s,7 21 9s,进行3 6个循 环;7 2 延 伸4 m i n。使 用 相 对 基 因 定 量 法(2-C t法)计算l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平。表表11 各基因引物序列基 因正向引物序列反向引物序列l n c R
22、 NA ME G 35-C T G C C C A T C T A C A C C T C A C G-35-G C C G T C T G C G C T AG G G G C T A-3G A P DH5-A GA G G C A G G G A T G A T G T T C T G-35-GA C T C A T GA C C A C A G T C C A G C-3m i R-2 3 b-3 p5-C A C AAA G G C A T C T C TA C G C C C A-35-T G T AG C T G C C T C G C C A G AG G G G-3U 65-C
23、 T C G C T T C G G C AG C A C A TA T A C T-35-C G C T T C A C G AA T T T G C G T G T G G C-31.3.2 A D患儿疾病严重程度评估及分组:根据A D积分指数(A DI n t e g r a l I n d e x,S C O R A D)9对A D患儿疾病严重程度进行评估。评估内容包括:皮损面积记为A,根据不同年龄段皮损面积评判标准进行皮64212 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c
24、a l J o u r n a l损面积判定,以1%面积为1分;皮肤损伤严重程度记为B,共包括6项体征,评分标准(皮损程度由轻到重)为03四级评分法;瘙痒、睡眠障碍程度记为C,按最近3昼夜来评分(平均分),每项均01 0分。S C O R A D总分01 0 3分。根据S C O R A D评分(计算公式为A/5+7 B/2+C)将1 6 5例A D患儿分为A D轻度组(评分5 0分,3 2例)。1.4 统计学方法 采用S P S S2 5.0统计学软件分析数据。计数资料以 例(%)表示,行2检验;计量资料以(xs)表示,行t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较行S N K-q检
25、验;采用P e a r s o n法分析A D组血清l n c R N A M E G 3、m i R-2 3 b-3 p水平和S C O R A D评分三者间的相关性;采用受试者工作特征(R O C)曲线分析血清l n c R N A M E G 3和m i R-2 3 b-3 p水平对中重度A D的诊断价值,曲线下面积(AU C)比较行Z检验;P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 两组患儿血清l n c R NA ME G 3和m i R-2 3 b-3 p水平 比 较 见 表2。与 对 照 组 比 较,A D组 血 清l n c R NA M E G 3和m i R-2 3
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