黄芪多糖通过TLR4_NF-κB通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞.pdf
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1、微循环学杂 志():./.微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验 黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞 徐 曼 沈 月 米妍妍 王春双 周海岩 中图分类号.文献标识码 文章编号 ()【摘要】目的:观察黄芪多糖()对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞的保护作用并探讨可能机制 方法:采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型将建模成功的 只大鼠随机分为脓毒症组、组、脂多糖()组每组各 只 另外 只大鼠设为对照组 术后、组灌胃(/)组灌胃(/)腹腔注射(/)对照组、脓毒症组分别灌胃、腹腔注射等量生理盐水 检测血清白细胞介素()、肿瘤坏死因子()水平检测肺组织含水量、法检测肺组织中热休克蛋白()、内皮细胞
2、特异性分子()蛋白 样受体()、髓样细胞分化因子()、核转录因子()、蛋白表达量 结果:与脓毒症组比较 组血清、水平肺组织含水量 蛋白表达量肺组织、蛋白表达量/均降低(.)蛋白表达量升高(.)与 组比较 组血清、水平肺组织含水量 蛋白表达量肺组织、蛋白表达量/均升高(.)蛋白表达量降低(.)结论:可能通过抑制/通路减轻脓毒症大鼠炎症反应及肺损伤保护肺血管内皮细胞【关键词】黄芪多糖脓毒症肺血管内皮细胞肺损伤 /【】:().:.().(/)(/)(/).()().()()()()基金项目 保定市科技计划项目()作者单位 河北省保定市第一中心医院重症医学三科保定 本文 收到 修回 ().:/(.)(
3、.)./(.).(武汉吉业升化工有限公司(批号:)样受体()/核转录因子()通路激活剂脂多糖()美 国 公 司(批 号:)大鼠血清白细胞介素()、肿瘤坏死因子()酶联免疫吸附实验()试剂盒上海康朗生物科技有限公司(批号:)兔抗大鼠热休克蛋白()、内皮细胞特异性分子()、髓样细胞分化因子()、一抗 美 国 公 司(批 号:)流式细胞仪美国 公司 全功能酶标仪美国 公司 光学显微镜日本 公司 化学发光成像分析系统美国 公司.方法.建立脓毒症模型:参考文献采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型 腹腔注射 戊巴比妥钠(/)麻醉大鼠使其仰卧于操作台无菌条件下中下腹部正中切口暴露盲肠结扎回盲瓣至盲肠游离端外/针
4、穿透结扎线远端阑尾根部两侧的盲肠壁挤出少量粪便将粪便涂满腹腔盲肠归位逐层关腹 建模成功标准:大鼠发热、呼吸频率加快、嗜睡、精神萎靡、饮水量减少眼角出现黑色分泌物甚者死亡死亡大鼠剔除 同时结合解剖学结果(盲肠发生坏死和发黑)即为模型制备成功.分组及干预:只大鼠建立脓毒症模型将建模成功的 只大鼠随机分为脓毒症组、组、组每组各 只 另外 只大鼠仅剖腹不结扎盲肠及穿孔设为对照组 组灌胃(/)组灌胃(/)腹腔注射(/)对照组、脓毒症组分别灌胃、腹腔注射等量生理盐水 于术后、分别干预 次.血清、水平检测:末次干预后麻醉大鼠取腹主动脉血 离心后取上清于冰箱冷藏保存 采用 法测定血清、水平根据试剂盒说明书要求
5、进行实验于酶 黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞标仪检测波长 处吸光度值应用标准曲线计算样本浓度微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验.肺组织含水量检测:腹主动脉取血后从每组大鼠中随机抽取 只颈椎脱臼法处死开胸取全肺锡箔纸盛放称取肺湿重()烘箱中 烤再次测定重量即肺干重计算肺组织含水量()(湿重干重)/湿重.肺组织中、蛋白表达量检测:采用 法检测 取部分肺组织于 管中剪碎裂解液裂解注入离心管中低温离心机离心取上清 法提取蛋白并定量 取 样本蛋白加入 倍体积上样缓冲液沸水加热变性离心取上清凝胶电泳转膜脱脂奶粉室温封闭加入工作浓度为 的兔抗大鼠、一抗 冰箱冷藏过夜 洗膜加入工作浓度为
6、 的二抗室温孵育 洗膜发光液发光暗室内显色凝胶成像分析仪分析以目的蛋白与内参 灰度值比值代表目标蛋白相对表达量.肺组织病理学变化观察:取右侧肺组织多聚甲醛固定 梯度乙醇脱水、透明融化石蜡包埋切为 切片 取切片常规脱蜡、水化常规 染色光镜下观察肺组织病理改变.肺组织、蛋白表达量检测:采用 法检测取冷冻保存的左侧肺组织 眼科剪充分剪碎、研磨 匀浆 裂解细胞离心、变性、变性、电泳、转膜、封闭等方式同.加入工作浓度为 的兔抗大鼠、一抗冰箱冷藏过夜 洗膜加入工作浓度为 的二抗室温孵育 洗膜发光液发光暗室内显色凝胶成像分析仪分析以目的蛋白与内参 灰度值比值代表目标蛋白相对表达量.统计学处理采用 .软件处理
7、、分析数据计量资料以均数 标准差()表示多样本计量资料以单因素方差分析以 检验进行两两样本分析 .表示差异有统计学意义 结 果.各组血清、水平各组间血清 和 水平比较差异有统计学意义(.)与 组比较 组血清、水平均升高(.、.)见表 表 各组血清、水平比较(/)组 别对照组.脓毒症组.).)组.).)组.).)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组比较).各组肺组织含水量比较各组间肺组织含水量比较差异有统计学意义(.)与 组比较 组肺组织含水量升高(.)见表 表 各组肺组织含水量比较()组 别肺组织含水量对照组.脓毒症组.)组.)组.)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组
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