黄芪多糖通过TLR4_NF-κB通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞.pdf

微循环学杂 志():./.微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验 黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞 徐 曼 沈 月 米妍妍 王春双 周海岩 中图分类号.文献标识码 文章编号 ()【摘要】目的:观察黄芪多糖()对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞的保护作用并探讨可能机制 方法:采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型将建模成功的 只大鼠随机分为脓毒症组、组、脂多糖()组每组各 只 另外 只大鼠设为对照组 术后、组灌胃(/)组灌胃(/)腹腔注射(/)对照组、脓毒症组分别灌胃、腹腔注射等量生理盐水 检测血清白细胞介素()、肿瘤坏死因子()水平检测肺组织含水量、法检测肺组织中热休克蛋白()、内皮细胞特异性分子()蛋白 样受体()、髓样细胞分化因子()、核转录因子()、蛋白表达量 结果:与脓毒症组比较 组血清、水平肺组织含水量 蛋白表达量肺组织、蛋白表达量/均降低(.)蛋白表达量升高(.)与 组比较 组血清、水平肺组织含水量 蛋白表达量肺组织、蛋白表达量/均升高(.)蛋白表达量降低(.)结论:可能通过抑制/通路减轻脓毒症大鼠炎症反应及肺损伤保护肺血管内皮细胞【关键词】黄芪多糖脓毒症肺血管内皮细胞肺损伤 /【】:().:.().(/)(/)(/).()().()()()()基金项目 保定市科技计划项目()作者单位 河北省保定市第一中心医院重症医学三科保定 本文 收到 修回 ().:/(.)(.)./(.).(武汉吉业升化工有限公司(批号:)样受体()/核转录因子()通路激活剂脂多糖()美 国 公 司(批 号:)大鼠血清白细胞介素()、肿瘤坏死因子()酶联免疫吸附实验()试剂盒上海康朗生物科技有限公司(批号:)兔抗大鼠热休克蛋白()、内皮细胞特异性分子()、髓样细胞分化因子()、一抗 美 国 公 司(批 号:)流式细胞仪美国 公司 全功能酶标仪美国 公司 光学显微镜日本 公司 化学发光成像分析系统美国 公司.方法.建立脓毒症模型:参考文献采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型 腹腔注射 戊巴比妥钠(/)麻醉大鼠使其仰卧于操作台无菌条件下中下腹部正中切口暴露盲肠结扎回盲瓣至盲肠游离端外/针穿透结扎线远端阑尾根部两侧的盲肠壁挤出少量粪便将粪便涂满腹腔盲肠归位逐层关腹 建模成功标准:大鼠发热、呼吸频率加快、嗜睡、精神萎靡、饮水量减少眼角出现黑色分泌物甚者死亡死亡大鼠剔除 同时结合解剖学结果(盲肠发生坏死和发黑)即为模型制备成功.分组及干预:只大鼠建立脓毒症模型将建模成功的 只大鼠随机分为脓毒症组、组、组每组各 只 另外 只大鼠仅剖腹不结扎盲肠及穿孔设为对照组 组灌胃(/)组灌胃(/)腹腔注射(/)对照组、脓毒症组分别灌胃、腹腔注射等量生理盐水 于术后、分别干预 次.血清、水平检测:末次干预后麻醉大鼠取腹主动脉血 离心后取上清于冰箱冷藏保存 采用 法测定血清、水平根据试剂盒说明书要求进行实验于酶 黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞标仪检测波长 处吸光度值应用标准曲线计算样本浓度微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验.肺组织含水量检测:腹主动脉取血后从每组大鼠中随机抽取 只颈椎脱臼法处死开胸取全肺锡箔纸盛放称取肺湿重()烘箱中 烤再次测定重量即肺干重计算肺组织含水量()(湿重干重)/湿重.肺组织中、蛋白表达量检测:采用 法检测 取部分肺组织于 管中剪碎裂解液裂解注入离心管中低温离心机离心取上清 法提取蛋白并定量 取 样本蛋白加入 倍体积上样缓冲液沸水加热变性离心取上清凝胶电泳转膜脱脂奶粉室温封闭加入工作浓度为 的兔抗大鼠、一抗 冰箱冷藏过夜 洗膜加入工作浓度为 的二抗室温孵育 洗膜发光液发光暗室内显色凝胶成像分析仪分析以目的蛋白与内参 灰度值比值代表目标蛋白相对表达量.肺组织病理学变化观察:取右侧肺组织多聚甲醛固定 梯度乙醇脱水、透明融化石蜡包埋切为 切片 取切片常规脱蜡、水化常规 染色光镜下观察肺组织病理改变.肺组织、蛋白表达量检测:采用 法检测取冷冻保存的左侧肺组织 眼科剪充分剪碎、研磨 匀浆 裂解细胞离心、变性、变性、电泳、转膜、封闭等方式同.加入工作浓度为 的兔抗大鼠、一抗冰箱冷藏过夜 洗膜加入工作浓度为 的二抗室温孵育 洗膜发光液发光暗室内显色凝胶成像分析仪分析以目的蛋白与内参 灰度值比值代表目标蛋白相对表达量.统计学处理采用 .软件处理、分析数据计量资料以均数 标准差()表示多样本计量资料以单因素方差分析以 检验进行两两样本分析 .表示差异有统计学意义 结 果.各组血清、水平各组间血清 和 水平比较差异有统计学意义(.)与 组比较 组血清、水平均升高(.、.)见表 表 各组血清、水平比较(/)组 别对照组.脓毒症组.).)组.).)组.).)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组比较).各组肺组织含水量比较各组间肺组织含水量比较差异有统计学意义(.)与 组比较 组肺组织含水量升高(.)见表 表 各组肺组织含水量比较()组 别肺组织含水量对照组.脓毒症组.)组.)组.)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组比较).各组肺组织中、蛋白表达量各组间肺组织中、蛋白表达量比较差异有统计学意义(.)见表、图润脓毒症组大鼠肺泡结构严重破坏肺泡壁增厚 徐 曼沈 月米妍妍等表 各组肺组织、蛋白表达量()组 别对照组.脓毒症组.).)组.).)组.).)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组比较).图 各组肺组织、蛋白表达().各组肺组织病理学变化对照组肺组织结构完整可见少量炎性细胞浸肺间质水肿肺泡腔、肺泡间隔以及肺间质可见少量出血、渗出以及大量中性粒细胞浸润支气管管壁增厚 组、组肺组织结构相对模型组大鼠完整肺泡壁增厚不明显肺间质水肿减轻中性粒细胞浸润减少 见图.各组肺组织、蛋白表达量以及 /比值各组间肺组织、蛋白表达量以及/比值比较差异有统计学意义(.)见表、图 图 染色观察各组肺组织病理变化微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验 表 各组肺组织、蛋白表达量/比较()组 别/对照组.脓毒症组.).).)组.).).)组.).).)值.注:与对照组比较).与脓毒症组比较).与 组比较).讨 论脓毒症是外科大手术后、休克、创伤、烧伤以及各种损伤后常见并发症其病理过程复杂与“瀑布样”炎性介质、细胞因子及凝血系统活性增强均密切相关其中有学者证实血管内皮细胞广泛参与血细胞黏附性、血管紧张度、血管通透性的调控并在维持抗凝促凝平衡间起到重要作用 在脓毒症肺损伤中肺微血管通透性增强肺部炎症反应失控中性粒细胞活性增强释放大量炎性介质对内皮细胞造成直接损伤促进其凋亡毛细血管通透性图 各组肺组织、发现其可减轻哮喘大鼠气道炎症降低肺组织血管 黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞 蛋白表达()增强大量液体渗入肺组织间隙导致氧气弥散障碍加剧组织细胞缺氧且炎性细胞聚集在局部组织进一步导致肺组织细胞损伤 因此内皮细胞在脓毒症发生、发展以及靶器官损伤中发挥不可忽视的作用 是一种表达于内皮细胞中的可提高机体应激耐受能力的蛋白 是其中最为保守的一种在细胞遭受应激刺激后明显升高从而发挥细胞保护作用可在一定程度上作为脓毒症预后的预测指标 同样表达于内皮细胞在调节内皮依赖性病理过程中具有重要作用并参与炎症紊乱、细胞黏附及肿瘤形成当血管内皮细胞损伤时其表达水平可反映内皮功能状态及损伤程度 中药黄芪性温、味甘可补血养气、固本止汗、益气通淤、补肾脾 是其主要成分之一具有抗炎、抗病毒、调节免疫力、抗氧化、抗衰老及抗肿瘤等多种药理活性 王旭东等在观察 对脓毒症急性肾损伤大鼠的影响时发现其可减轻氧化应激、改善肾上皮细胞能量代谢提示其对脓毒症器官损伤的保护作用 在研究 对肺部的保护作用时有学者内皮生长因子表达抑制气道血管重塑 本研究结果显示经 干预后脓毒症大鼠血清、水平、肺组织含水量、肺组织中 蛋白表达量降低 蛋白表达量升高提示 可减轻脓毒症大鼠炎症反应及肺损伤 在炎症上调及炎性细胞因子释放中具有重要作用其识别外源性配体或内源分子后将识别信号传递给 诱导 转入细胞核并发生磷酸化从而调控下游相关基因转录过程激活巨噬细胞、单核细胞等释放、等炎性介质引发一系列炎症反应 等研究发现激活/通路将通过加剧炎症反应加重脓毒症相关的急性肾损伤为脓毒症急性肾损伤的治疗提供了潜在的策略 下调/通路可有效减轻盲肠结扎和穿刺手术后脓毒症引起的急性肾损伤该点被 等证实 本研究显示脓毒症组肺组织、蛋白表达量/较对照组升高经 干预后有所降低且在 的基础上增用/通路的激活剂 后 的治疗作用降低提示该通路在脓毒症中异常激活 可能通过抑制该通路发挥治疗作用综上所述 可减轻脓毒症大鼠急性炎症反应及肺损伤保护肺血管内皮细胞其作用机制可能与抑制/通路有关本文第一作者简介:徐 曼()女汉族硕士副主任医师研究方向:脓毒症基础研究微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验 参考文献 .():.:.():.陈铭铭 马晓春.脓毒症与内皮细胞损伤:多糖包被的作用值得关注.中华内科杂志 ():.李莉.黄芪多糖对深度烧伤大鼠免疫功能及创面巨噬细胞炎症蛋白 和单核细胞趋化蛋白 表达的影响.中国临床药理学杂志 ():.肖剑伟 周唯践 蔡 旭 等.黄芪多糖抑制氧化应激致大鼠软骨细胞损伤及凋亡的作用机制分析.临床和实验医学杂志():.夏 杨 吴海根 许娟秀.黄芪多糖对术后放化疗子宫颈癌患者免疫功能的影响.中国医学创新 ():.曹 征 谢连娣 范宗静 等.黄芪多糖联合 沉默对缺血再灌注人心脏微血管内皮细胞凋亡的影响.世界中医药 ():.黎李俊 杨国辉.一种改良盲肠结扎穿刺致大鼠脓毒症模型的方法.中国医学科学院学报 ():.沈钦华 李素娟 董苏一.黄芪多糖对流感病毒性肺炎大鼠肺组织 信号通路的影响.山西医科大学学报 ():.():.():.徐 曼沈 月米妍妍等 .():.赵 倩 曹 静 李明霞.热休克蛋白 调控/对缺氧性肺高压新生大鼠肺血管内皮细胞凋亡及肺动脉压力的作用.新疆医科大学学报 ():.姜 朕 钮明杨 汪浩森 等.血清内皮细胞特异性分子表面活性蛋白 及转化生长因子 对脓毒症患儿继发急性肺损伤的预测价值.中国临床医生杂志 ():.王旭东 赵玉良 史为涛 等.黄芪多糖对脓毒症急性肾损伤大鼠/信号通路介导的肾上皮细胞能量代谢的影响.中国医院药学杂志 ():.闫伟华 常静侠.黄芪多糖对哮喘大鼠气道炎症及肺组织血管内皮生长因子表达的影响.中国临床药理学杂志 ():./.():./.():.():.():.微循环学杂 志 年第 卷第 期基础与实验(上接第 页)./.():./.():./.():./.():.李亚琦 李晓曦 缪长虹 等.瑞马唑仑与丙泊酚对乳腺癌根治术患者围术期细胞免疫功能的影响比较.中国药房():.:.():./.():./.():.黄芪多糖通过/通路保护脓毒症大鼠肺血管内皮细胞