分子诊断技术在结核分枝杆菌检测中的应用.pdf
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1、【通讯作者简介】刘小娟博士主任技师硕士研究生导师四川省卫健委学术技术带头人后备人选中华医学会儿科分会临床检验学组青年委员会副组长四川省性学会生殖检验专业委员会副主任委员四川省医师协会检验医师分会青年委员会副主任委员四川省医促会妇幼精准诊断医学专委会常务委员四川省医学会第十二届检验专业委员会委员 研究方向:感染性疾病的分子诊断标志物及胚胎发育影响因素与分子机制分分子子诊诊断断技技术术在在结结核核分分枝枝杆杆菌菌检检测测中中的的应应用用刘 芳刘小娟(四川大学华西第二医院检验科出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川 成都)【摘要】结核病是全球最关注的公共卫生问题之一 结核分枝杆菌的实验室检测及早
2、筛查出潜伏性结核感染者和活动性结核病已成为当前控制结核菌感染的重中之重 随着分子诊断技术的发展其在结核分枝杆菌病原学检测中的应用已不简单的局限于实时荧光聚合酶链反应技术出现了更多灵敏度高、特异性好、样本类型应用广的新型技术 极大地提高了结核分枝杆菌的实验室检出率 应用先进的分子诊断技术提高实验室对活动性结核病的早期诊断及潜伏性结核的诊断能力帮助临床根据患者的个体化病情选择与之相对应的实验室检测技术制定合理的诊疗方案仍是分子诊断领域未来需全力解决的问题【关键词】结核分枝杆菌分子诊断技术潜伏性结核【中图分类号】【文献标志码】【文章编号】()()【】【】.().().【】结核病()是严重危害人民群众
3、健康的呼吸道传染病是我国重点防控的法定重大传染病之一它是威胁人类身体健康和生命安全的重要杀手 年世界卫生组织估计全球新发结核病患者约 万死亡 万全国第五次结核病流行病学调查结果显示我国活动性、涂阳和菌阳肺结核的患病率分别为/万、/万和/万地区、人群分布差异明显西部传染性肺结核患病率约为中部的 倍东部的 倍农村患病 率 为 城 市 的 倍 结 核 分 枝 杆 菌()于 年由 首次提出并认定为结核病的病因早诊断、早隔离、早治疗是减少肺结核发病和死亡的关键 但目前大部分结核病临床表现不典型病原标本采集困难大部分患者无法通过传统实验室检查获得病原学确诊 加强结核感染的实验室诊断及早筛查出潜伏性结核感染
4、者和活动性结核病已成为当前控制结核菌感染的重中之重 近年来分子生物学诊断技术的迅速发展让更多的 分子诊断技术应用于临床极大提高了 的检出率 本文就分子诊断技术应用于 的应用作一综述 实时荧光 技术.传统荧光 技术传统 技术以只存在于 复合群(包括、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌等)种的特异序列 为检测靶点目前可用 于 鉴 别 诊 断 与 非 结 核 分 枝 杆 菌()等研究显示常规实时荧光定量 在不同来源标本中的灵敏度均显著高于涂片及培养即使在涂片阴性的情况下其灵敏度及特异度仍较高分子诊断技术用于 诊断的早期此方法曾普遍应用于医学实验室一方面其具有灵敏度高速度快的特点另 实用医院临床杂志 年 月第
5、卷第 期一方面由于 并非存在于所有 中部分样本中 载量较低甚至缺失可能导致检出率低假阴性等情况./是以结核分枝杆菌的 聚合酶活性位点编码区(核心序列)为靶标采用半巢式实时半定量 进行 及利福平耐药基因检测的方法 无需单独的核酸提取步骤检测试剂集成了提取和扩增过程通过扩增判读样本中是否含有 并对检出的 序列中 基因进行检测来判断有无利福平耐药因为 的利福平耐药菌株同时对异烟肼耐药因此 试剂对 基因的检测结果又可在一定程度上判断是否为耐多药结核菌株 推荐 可作为检测疑似结核、疑似耐多药结核或 感染的首选方法 研究显示对于结核性脑膜炎()检测的灵敏度为 对于结核病并发 感染者的脑脊液 检测的灵敏度为
6、 特异度为 也可以通过脑脊液样本进行离心富集或提高样本量至 以上还可再提高检测的灵敏度 对于有 症状的患者脑脊液 建议优先使用 检测 基因芯片技术基因芯片技术是将特定设计的 探针规律地固化于芯片表面形成 探针阵列与荧光标记的靶分子进行 杂交 通过荧光扫描仪自动检测杂交荧光信号能够在同一时间内对 进行检测并分型 其具有灵敏度高、通量大、可分型等优势但也存在芯片制备复杂、样品标记繁琐、检测成本高、容易出现非特异性扩增等缺点 值得一提的是该方法可以检测耐药一线抗结核药物相关耐药基因据 等研究显示基因芯片法对利福平耐药的灵敏度和特异度分别为 和 对异烟肼耐药的灵敏度和特异度分别为 和.等对基因芯片、和
7、 三种方法检测培养阳性痰标本 及耐药情况检出率分别为、提示基因芯片法是一种既能检测出结核菌也可判断多重耐药结核菌感染的方法 恒温扩增技术恒温扩增技术是在恒定的温度下完成扩增的一类分子生物学技术其特征为基因扩增过程不需要温度梯度的循环 恒温扩增技术对仪器的要求不高检测成本相对低一些 近年来以该项技术为基本原理发展起来的分子诊断技术主要有环介导等温扩增技术()、交叉引物法检测技术()、实时荧光核酸恒温扩增检测技术()等 年 发布的 在肺结核诊断中的应用中对来自全球的感染数据进行了总结分析建议在诊断疑似肺结核患者时使用 技术作为补充方法尤其是痰涂片镜检阴性时有必要使用此技术进行实验室检测 等曾报道与
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