人参皂苷Rg1对心肌纤维化模型小鼠TLR4_MyD88通路的影响.pdf
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1、基础研究人参皂苷 对心肌纤维化模型小鼠 通路的影响陈昕,杜,高磊,阚晨静,黄项鸣,徐兴闻,朱军,杨平印,石开虎(溧阳市中医医院 介入科,江苏 溧阳 ;南京中医药大学附属中西医结合医院 心胸外科,江苏 南京 ;南京中医药大学中医学院 中西医结合学院,江苏 南京 )摘要目的观察人参皂苷 ()对心肌纤维化模型小鼠 样受体 髓样分化因子 ()信号通路的影响。方法 只雄性 小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷 干预组,造模成功后取各组小鼠心肌组织,苏木精 伊红染色法()、马松染色()染色观察心肌组织学改变,免疫印迹试验()检测各组小鼠心肌组织中 信号通路 、及 等凋亡蛋白的表达,聚合酶链式反应()检测心
2、肌组织中 、等基因表达。结果 染色和 染色结果均显示,对照组小鼠心肌细胞形态规则正常,细胞间排列顺序整齐;组中纤维化后的小鼠心肌细胞形态和心肌细胞不规则;结果表明,与对照组比较,组小鼠心肌组织中 、蛋白表达明显升高,表达降低,差异有统计学意义();与 组比较,组小鼠心肌组织中 、的表达明显降低,表达升高,差异有统计学意义();结果表明,与对照组比较,组小鼠心肌组织中 、的 明显升高,表达降低,差异有统计学意义();与 组比较,组小鼠心肌组织中 、的 明显降低,表达升高,差异有统计学意义()。结论人参皂苷 可能通过影响心肌纤维化模型小鼠心肌细胞 信号通路活化,延缓心肌纤维化进程,发挥心脏保护作用
3、。关键词人参皂苷 ;通路;细胞凋亡;心肌纤维化 中图分类号 文献标识码 文章编号 ():,(,;,;,),()()第 卷第 期 年 月贵 州 医 科 大 学 学 报 基金项目 江苏省自然科学基金项目();江苏省中医药研究院青年研究项目()通信作者 :引用本文:陈昕,杜,高磊,等 人参皂苷 对心肌纤维化模型小鼠 通路的影响 贵州医科大学学报,():,(),;,(),(),(),(),();心肌纤维化是多种心脏疾病共同的病理过程,是心脏结构重构的重要环节之一。心肌细胞凋亡增加,心肌胶原蛋白分泌增多、胶原纤维不断沉积、心肌组织发生不同程度的纤维化,久之心脏顺应性降低、结构改变,从而引发心律不齐、心力
4、衰竭等心脏疾病 。有研究指出,样受体 髓样分化因子 (,)信号通路在延缓纤维化进程中有重要作用,其主要是通过调控心肌细胞凋亡达到干预心肌纤维化进程的目的 。中药“人参”在临床上参与很多心脏疾病的治疗,而人参皂苷 (,)作为其主要效用成分,有强心、抗休克、对抗心律失常、减轻心肌缺血缺氧再灌注损伤、促进心肌血管再生等重要作用,临床多用于治疗心肌梗死、动脉粥样硬化、心律失常等多种疾病 。申文宇等 研究指出,人参皂苷 能够调控内源性线粒体凋亡途径,抑制细胞色素 (,)释放,降低凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (,)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (,)表达水平,减少大鼠心肌细胞凋亡、调节心律、保护心肌。
5、关于人参皂苷 是否通过 通路干预心肌纤维化的研究较少,本研究旨在探索人参皂苷 通过调控 通路干预心肌细胞凋亡、影响心肌纤维化的机制,以期对临床治疗提供新思路。材料与方法 材料 实验动物选用成年雄性 小鼠 只,由江苏省中西医结合医院动物实验中心提供。所有动物实验符合实验动物学习指南,无菌喂养,饮用水和饲料均经过高温消毒,环境温度约在,湿度 。本实验研究获得江苏省中西医结合医院伦理委员会批准 许可证号 (苏)。主要试剂人参皂苷 药物采购于南京草本源生物科技有限公司,(货号 )、(货号 )、(货号 )、胶原蛋白(,货号 )、平滑肌肌动 蛋 白(,货 号 )、(货号 )抗体购买于 公司,(货号 )、(
6、货号 )、辣根过氧化物酶()标记的山羊抗兔二抗(货号 )购买于 公司。研究方法 建模与给药方案 取 只成年雄性 小鼠,随机分为对照组、模型组和人参皂苷 组,对照组皮下注射 氯化钠溶液,模型组皮下注射异丙肾上腺素(,),治疗组皮下注射 、同时予以期陈昕等人参皂苷 对心肌纤维化模型小鼠 通路的影响人参皂苷 灌胃,次 ,连续干预 。给药期间所有小鼠均正常饲养,自由饮水。观察心肌组织病理学改变建模结束后,用 的戊巴比妥钠 腹腔注射,取血;后打开胸腔,游离心脏、离断主动脉,取出小鼠心脏用 的福尔马林溶液浸泡,脱水、石蜡包埋、切 薄片、烤片、脱蜡、烘干,分别马松染色()、苏木精 伊红染色法()染液染色,电
7、子显微镜下观察。免疫印迹试验()检测凋亡相关通路蛋白的表达取出冻存的心肌组织研磨,裂解液提取总蛋白,检测蛋白总量,用分离胶和浓缩胶进行分离蛋白后,将蛋白转移到 膜上,加入抗体 ()、()、()、()、()、()、(),山羊抗兔二抗()室温孵育 ,经 显影后,使用软件对 膜蛋白条带进行扫描分析,计算灰度值,为内参。聚 合 酶 链 式 反 应()检 测 、兔抗人单克隆抗体(,)、淋巴细胞瘤 基因(,)表达引物由生工生物在线引物设计(表),采用 ()提取心肌组织总 于 鉴定 纯度。取 总 为模板,参照 公司的试剂盒说明书进行逆转录聚合酶链反应()。反应体系,实时定量 扩增,以 为内参照。反应结束后确
8、认 的扩增曲线和融解曲线,进行 定量时制作标准曲线等。表 检测引物序列 基因方向序列()正向 反向 正向 反向 正向 反向 正向 反向 正向 反向 统计学分析实验结果采用 软件分析,数据结果采用均数 标准差()表示,多组间比较采用 分析,进一步两两比较采用 检验。表示差异有统计学意义。结果 心肌组织学改变 染色结果显示,对照组小鼠心肌细胞形态规则正常,细胞间排列顺序整齐;组中纤维化后的小鼠心肌细胞形态不规则,体积明显增大,组织间水肿明显,细胞排列紊乱;人参皂苷 组小鼠心肌细胞排列稍规则,细胞体积稍有增大,细胞排列恢复正常。见图 。染色结果显示,对照组中,心肌细胞形态正常、排列整齐,而 组中心肌
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