基于Sirt1_p53信号通路探究NK4基因对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的机制研究.pdf
《基于Sirt1_p53信号通路探究NK4基因对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的机制研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基于Sirt1_p53信号通路探究NK4基因对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的机制研究.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、【文章编号】1006-6233(2023)08-1263-05基于 Sirt1/p53 信号通路探究 NK4 基因对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的机制研究贲海祥,徐娟(江苏省如皋市人民医院血液科,江苏如皋 226500)【摘要】目的:本研究旨在探究 NK4 基因对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响机制。方法:通过 qRT-PCR 检测 NHL 细胞系(Jurkat 和 Raji)及正常 B 细胞(normal)中 NK4 mRNA 表达水平,采取pcDNA3.1-NK4 转染至 Raji 细胞中由此提高 NK4 表达水平。通过 CCK-8 检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,transwel
2、l 迁移实验检测细胞迁移、侵袭能力以此评估细胞生长进展。采取 western blot 检测 Sirt1/p53 信号通路相关蛋白。结果:NK4 基因在 NHL 细胞低表达,在 NHL 细胞株 Raji 细胞中上调NK4 表达水平后,Raji 细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降,而细胞凋亡率上升。此外,上调 NK4 表达水平使得 Sirt1 蛋白表达水平显著下降,p53 水平显著上升。额外添加 Sirt1 激活剂 SRT1720 后细胞生长进展受到部分抑制。结论:NK4 基因介导 Sirt1/p53 信号通路抑制非霍奇金淋巴瘤细胞增殖,促进其凋亡。【关键词】非霍奇金淋巴瘤;细胞增殖;细胞凋亡【文
3、献标识码】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2023.08.06The Mechanism of NK4 Gene on Proliferation and Apoptosis in Non-Hodgkin Lymphoma Cells Based on Sirt1/p53 Signaling PathwayBEN Haixiang,XU Juan(Rugao Peoples Hospital,Jiangsu Nantong 226500,China)【Abstract】Objective:To investigate the effect of NK4 gene
4、 on the proliferation and apoptosis of non-Hodgkins lymphoma cells.Methods:The expression levels of NK4 mRNA in NHL cell lines(Jurkat and Ra-ji cells)and normal B cells(normal)were detected by qRT-PCR.pcDNA3.1-NK4 was transfected into Raji cells to increase the expression level of NK4.Cell prolifera
5、tion was detected by CCK-8,apoptosis was detec-ted by flow cytometry,and cell migration and invasion were detected by transwell assay to evaluate cell growth progress.Western blot was used to detect Sirt1/p53 signaling pathway-related proteins.Results:NK4 gene was lowly expressed in NHL cells.After
6、up-regulating NK4 expression in NHL cell line Raji cells,the prolif-eration,migration and invasion ability of Raji cells decreased significantly,while the apoptosis rate increased.In addition,up-regulation of NK4 expression significantly decreased Sirt1 protein expression and increased p53 level.Add
7、ition of Sirt1 activator SRT1720 partially inhibited cell growth.Conclusion:NK4 gene media-ted Sirt1/p53 signaling pathway inhibited proliferation and promoted apoptosis of non-Hodgkin lymphoma cells.【Key words】Non-Hodgkins lymphoma;Cell proliferation;Apoptosis 恶性淋巴瘤(Malignant lymphoma,ML)是一种血液恶性肿瘤,
8、发生在淋巴结或淋巴结外的淋巴组织1。非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkins lymphoma,NHL)是一类起源于淋巴系统的癌症,由恶性 B 细胞的过度增殖引起,是美国第七大常见恶性肿瘤,通常被认为是预后良好的恶性肿瘤,5 年生存率约为 70%2。但淋巴瘤的发病率在全球范围内持续增加,对人类健康造成严重危害3。NHL 最常见的类型为弥漫大 B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)和套细胞淋3621 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 【基金项目】江苏省优势学科建设工程项目,(编号:YSHL
9、0814-812)【通讯作者】徐 娟巴瘤(MCL)4。NK4 是一种特异性肝细胞生长因子(HGF)拮抗剂,由 HGF 的 N 端发夹结构和 链的四个 Kringle 结构域组成。NK4 蛋白给药或 NK4 基因治疗抑制了各种肿瘤类型中的肿瘤生长、侵袭、转移和血管生成,所述肿瘤类型包括乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、间皮瘤、前列腺癌、胃癌和脑癌57。另外,去乙酰化酶 sirtuin-1(Sirt1)是一种 NAD+依赖性类组蛋白去乙酰化酶,其功能上与细胞代谢相关,并被视为代谢传感器8,可调节干细胞、细胞增殖、凋亡、DNA 修复、自噬和肿瘤发生,Sirt1 在许多癌症中上调,包括前列腺癌、白血病和皮
10、肤 T 细胞淋巴瘤肿瘤细胞9。沉默或抑制 Sirt1 的表达水平会激活下游 p53 蛋白,并随后加速或推动细胞衰老10。目前,NK4 对 NHL 疾病的调控机制尚鲜有研究,尤其是 NK4 是否通过介导Sirt1/p53 信号通路调控肿瘤细胞的生物学行为仍未可知。因此,在这项研究中,我们旨在探究 NK4 基因对 NHL 细胞增殖、凋亡的调节机制。1 材料与方法1.1 细胞培养:人类非霍奇金淋巴瘤细胞株(Jurkat和 Raji)及正常 B 细胞系均购自美国典型培养物保藏中心(ATCC,Rockville,MD,USA)。Jurkat 和 Raji 细胞在补充有 10%FBS 的 RPMI 164
11、0 培养基中生长,B 细胞维持在添加 10%人血清、100U/mL 青霉素、100g/mL 链霉素、2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)的 Iscove s 改良培养基中(NABI Biopharma-ceuticals,Boca Raton,FL,USA)。所有细胞系都在37,5%CO2条件下培养。1.2 细胞转染:pcDNA3.1-NK4、pcDNA3.1-NC 均购自 Invitrogen(Carlsbad,CA,USA),Sirt1 激 动 剂SRT1720 购自碧云天生物科技有限公司(上海,中国)。oe-NK4/NC 组细胞处理步骤如下:将细胞
12、以 1106细胞/mL 的密度置于 6 孔板上,按照操作说明书,使用 LiPofectamine 2000(11668-019,Invitrogen,Carls-bad,CA,USA)将 50 nM pcDNA3.1-NK4/NC 转染到Raji 细胞(培养至融合度 80%以上)中,转染 48h。oe-Sirt1+SA/DMSO 组处理步骤如下:在培养基中加入给定浓度的 SIRT1 激动剂 SRT1720(1moL/L)或者等量的 DMSO,再转染 pcDNA3.1-NK4 48h 后进行后续实验。1.3 qRT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应):从人淋巴瘤细胞系或正常外周淋巴细胞中提取总
13、RNA TRIzol 试剂(Invitrogen),并使用反转录第一链 cDNA合成试剂盒(K1622;Thermo Fisher Scientific)进行反转录。根据制造商的说明,使用 Maxima SYBR Green/ROX qPCR master mix(K0223;Thermo Fisher Scientif-ic)进行 qRT-PCR 检测 NK4 mRNA 水平,-actin 用于归一化。用于 qRT-PCR 的引物如下,NK4 F:5-GTGAATACTGCAGACCAATGTGCTA-3和 NK4 R:5-GGTCAAATTCATGGCCAAATTC-3;-actin F:
14、5-TG-GCACCCAGCACAATGAA-3,R:5-CTAAGTCAT-AGTCCGCCTAGAAGCA-3。使用 2-Ct比较 Ct 方法计算。1.4 CCK-8 检测细胞增殖:细胞增殖通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)分析(C0039,碧云天生物科技有限公司,北京,中国)。将不同组的细胞以 2105细胞/孔的密度接种到 96 孔板中,并在 37含 5%CO2的湿润培养箱中孵育隔夜。在第 0 小时、第 12 小时、第 24小时、第 48 小时和第 72 小时收集细胞。去除培养基并用无血清基本培养基替换后,向每个孔中加入 10L CCK 8 溶液并孵育 1h,之后将 100 L 样品上清
15、液转移到 96 孔微孔板中,并根据光密度波长为 450nm。1.5 流式细胞术检测细胞凋亡:细胞被胰蛋白酶消化并在冷 PBS 中洗涤两次。在1000g 离心5min 后,收集细胞并浓缩至每孔 1106个细胞。将 0.1mL 细胞悬浮液与 5L FITC 缀合的膜联蛋白 V 混合,在室温下避光孵育 15min,然后与 5L PI 混合并孵育 5min。然后使用流式细胞仪(FACSCanto,BD Biosciences,US)分析样品。1.6Transwell 法检测细胞迁移、侵袭:根据生产商说明,使用 24 孔 Transwell 小室(BD,Biosciences)检测细胞迁移和侵袭能力。侵
16、袭实验时,先按 1 8 的比例将50mg/L Matrigel 胶稀释后铺于小室底部;迁移实验时不铺胶。24 孔板下室加入完全培养基 600L,取各组细胞悬液 200L 加入 Transwell 小室的上室,在 37下孵育 24h 后,使用棉签去除上室中的细胞。迁移或侵袭细胞用甲醇在 4固定 30min,用 0.1%结晶紫溶液在 37 染色 20min,用倒置显微镜(Nikon Corpora-tion,Japan)进行观察。细胞实验独立重复 3 次。1.7 Western blot:用含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA 裂解缓冲液(基尔顿生物科技上海有限公司,上海,中国)获取细胞裂解液,使用
17、 BCA 蛋白质测定试剂盒(PICPI23223;Thermo Fisher Scientific)对样品蛋白浓度进行检测。进行加热和变性后,使用 10%(对于高分子量蛋白质)或 15%(对于低分子量蛋白质)十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质样品(25g/泳道),并转移到硝酸纤维膜(Millipore,Billeri-ca,MA,USA)上。在室温下用 5%脱脂牛奶封闭 1h后,将膜与一抗在 4 下单独孵育过夜。一抗信息如4621 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 下:Sirt1(ab1
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基于 Sirt1_p53 信号 通路 探究 NK4 基因 非霍奇金 淋巴瘤 细胞 增殖 机制 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。