富含羟基酪醇橄榄油对衰老小鼠的影响.pdf
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1、2023 年 6 月第 3 期1522甘肃农业大学学报 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY第5 8卷双 月 刊富含羟基酪醇橄榄油对衰老小鼠的影响陈文东1,叶文斌1,朱秀娟1,王昱1,黄新异2,邸多隆2(1.陇南师范高等专科学校农林技术学院,甘肃 成县 742500;2.中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室和甘肃省天然药物重点实验室,甘肃 兰州 730000)摘要:【目的】为研究富含羟基酪醇橄榄油(Olive oil rich in hydroxyl tyrosol,OHT)对衰老小鼠的影响。【方法】利用小鼠颈部皮下注射5
2、00 mg/kg的D-半乳糖(D-galactose)溶液构建亚急性衰老模型,建模成功后,将小鼠随机分成7组,分别为空白对照组(CK0)、模型组(Model group)、维生素E阳性对照组(VE positive control group)、普通橄榄油组(Cormal olive oil group)和OHT高、中、低剂量(200、100、50 mg/kg)处理组(OHT high,medium,low-dose group),连续灌胃 28 d,检测小鼠体质量变化及脏器指数、血清中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超 氧 化 物 歧 化 酶
3、(superoxide dismutase,SOD)、过 氧 化 氢 酶(catalase,CAT)活 性 及 丙 二 醛(malondialdehyde,MDA)含量的变化,观察肝组织形态学变化。【结果】OHT使衰老小鼠的体质量和脏器指数显著升高(P0.05,P0.01),肝脏病理变化得到改善,血清 CAT、GSH-Px 和 SOD 活性显著升高(P0.05,P0.01),MDA含量显著降低(P0.05,P0.01),以上指标变化在OHT高剂量组尤为明显,且OHT干预效果强于普通橄榄油。【结论】OHT能提高机体抗氧化能力,进而发挥抗衰老的作用。关键词:羟基酪醇;橄榄油;衰老小鼠;抗氧化;抗衰
4、老中图分类号:TS225.19 文献标志码:A 开放科学(资源服务)标识码(OSID):文章编号:1003-4315(2023)03-0015-08Effect of olive oil containing hydroxyl tyrosol on aging miceCHEN Wendong1,YE Wenbin1,ZHU Xiujuan1,WANG Yu1,HUANG Xinyi2,DI Duolong2(1.School of Agriculture and Forestry Technology,Longnan Teachers College,Chengxian 742500,Chi
5、na;2.Key Laboratory of Chemistry of North Western Plant ResourcesKey Laboratory for Natural Medicine of Gansu Province,Lanzhou Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences,Lanzhou 730000,China)Abstract:【Objective】To study the effects of olive oil containing hydroxyl tyrosol(OHT)on aging
6、 mice.【Method】An aging animal model was established by subcutaneous injection of 500 mg/kg D-galactose in the neck,and after successful modeling,the mice were randomly divided into 7 groups:blank control group,model group,VE positive control group,common olive oil group,OHT high,medium and low dose
7、treated groups(200 mg/kg,100 mg/kg,50 mg/kg),the OHT was administered to the mice by intragastric administration for 28 consecutive days.The weight and viscera indexes of each group were calculated,and the activities of glutathione peroxidase(GSH-Px),superoxide dismutase(SOD),catalase(CAT)and malond
8、ialdehyde(MDA)in the serum were determined,and the morphology changes of the DOI:10.13432/ki.jgsau.2023.03.003第一作者:陈文东,硕士,讲师,研究方向为动物药理与临床。E-mail:基金项目:2021年甘肃省科技重大专项(21ZD4NK045);2022年甘肃省重点研发计划项目(22YF7FK220);2021年甘肃省自然科学基金项目(21JR7RK912);2023年甘肃省高校教师创新基金项目(2023B-412);陇南市科技计划项目(2021-11)。收稿日期:2023-01-13;
9、修回日期:2023-03-13甘肃农业大学学报2023 年liver tissue were observed.【Result】OHT could significantly improve the body weight and organ index in aging mice(P0.05,P0.01),ameliorate the pathological changes of the liver,significantly increase the activity of serum CAT,GSH-Px and SOD(P0.05,P0.01),and significantly r
10、educed MDA content(P0.05,P0.01).The changes in the above indexes were particularly evident in the high-dose OHT group,and the intervention effect of OHT was stronger than that of normal olive oil.【Conclusion】OHT could improve the body s antioxidant capacity to play an anti-aging role.Key words:hydro
11、xytyrosol;olive oil;aubacute senescence mice;antioxidant;anti-aging橄榄油属木本植物油,是新鲜的油橄榄果实经直接冷榨而获取的果汁油,因其不经加热和化学处理,保留了油橄榄果中的天然营养成分1。橄榄油中富含甾醇类、类胡萝卜素、三萜类、角鲨烯、脂溶性维生素、多酚类、不饱和脂肪酸、酚类化合物和其它色素等多种活性成分,被誉为“飘香的软黄金”2-3,是地中海膳食结构的重要饮食结构之一,因其具有众多健康益处和独特的风味而收到消费者的青睐。研究发现,橄榄油具有保持肠道菌群健康、养肤护肤、降低血脂、预防心血管疾病、阿尔茨海默病、肝病、癌症、糖尿病
12、和骨质疏松症等保健和疾病预防功效4-7,是理想的高级食用油。羟基酪醇(3,4-二羟基苯基乙醇)广泛存在于新鲜橄榄叶、橄榄油废水、橄榄果渣以及橄榄油中,是一种天然的酚类化合物,其生物利用度和安全性高、无毒性且不易引起过敏反应8。羟基酪醇可有效去除外源性和内源性自由基和氧化物,是一种自由基清道夫,具有良好的抗氧化作用9-11。目前,国内外学者的研究主要集中在橄榄油的保健和药用功效上,而对富含羟基酪醇橄榄油的相关研究较少,本实验以衰老小鼠模型研究富含羟基酪醇橄榄油对衰老小鼠的影响,以期为开发无毒无副作用的抗衰老油橄榄保健食品,为开发富含羟基酪醇橄榄油保健产品及其功效研究,同时为国内外橄榄油保健食品研
13、发、产业延伸和产品推广的研究提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料橄榄油由甘肃时光油橄榄科技有限公司提供;SPFKM小鼠,雌雄各半,体质量2228 g,购自中国农业科学院兰州兽医研究所,许可证号:SCXK(甘)2020-0002。1.2试验试剂及仪器1.2.1主要试剂谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量检测试剂盒,均购自北京索莱宝科技有限公司;D-半乳糖,购自江苏鹏翔生物医药有限公司;维生素E,购自成都乐美天医药科技有限公司。1.2.2主要仪器R35组织切片机,购自德国徕卡仪器有限公司;BZ-X一体化显微成像系统,购自基
14、恩士(中国)有限公司;HWS-28电热恒温水浴锅,购自上海一恒仪器有限公司;Sorvall ST8台式离心机,购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;UV759紫外-可见分光光度计,购自上海精密科学仪器有限公司;FA1204万分之一电子分析天平,购自上海力辰仪器科技有限公司。1.3试验方法1.3.1富含羟基酪醇橄榄油制备取清洗洁净的新鲜去核油橄榄果,粉碎,过80目筛,将粉碎后的油橄榄果置于重量为其6倍的45 纯净水中,混合均匀,然后用转速为 16 000 r/min 的高速剪切,破碎10 min,每破碎2 min,中间间隔0.5 min。破碎后的匀浆液在45 恒温条件下搅拌至形成果浆。然后将果浆在
15、常温下压榨处理,用20 000 r/min高速离心机离心5 min,弃掉果渣,将上清液(油水混合液)过400目滤膜。在过滤液内加入重量为其10%的硫酸钠,混合均匀后静置25 min,再进行油水分离,得到富含羟基酪醇橄榄毛油和果水。富含高含量羟基酪醇橄榄毛油静置24 h后,得富含羟基酪醇功能特级初榨橄榄油,用高效液相测定橄榄油中羟基酪醇的含量为 20 mg/100g,检测含量的色谱柱:SinoChrom ODS-BP(4.6 mm 250 mm,5 m),流动相:0.1%甲酸-水乙腈(86 14,v/v),流速:1.0 mL/min,柱温:30,检测器和检测条件:DAD,280 nm,进样体16
16、第 3 期陈文东等:富含羟基酪醇橄榄油对衰老小鼠的影响积:20 L3。普通橄榄油中羟基酪醇的含量约为2.5 mg/kg。1.3.2动物模型建立与给药根据参考文献10-11的方法,购买回来的70只KM小鼠适应性饲喂7 d后,将小鼠随机分成7组,每组10只,统一饲喂基础日粮。先取6组小鼠按体质量500 mg/kg分别颈部皮下注射5%的D-半乳糖,连续注射42 d后,检测各组小鼠体质量和血清中 GSH-Px、SOD、CAT 和MDA含量,数据经SPSS 18.0分析,若CK0组与建模组存在显著性差异,即为亚急性衰老小鼠建模成功;剩余1组小鼠颈部皮下注射相同体积的生理盐水为空白对照组CK0。将建模成功
17、的6组小鼠分为设为衰老模型组、VE阳性对照组、普通橄榄油组和富含羟基酪醇橄榄油高、中、低剂量组。VE阳性对照组和普通橄榄油组分别按170 mg/kg和200 mg/kg剂量灌胃维生素E和普通橄榄油,富含羟基酪醇橄榄油高、中、低剂量组分别按200、100和50 mg/kg3剂量灌胃富含羟基酪醇橄榄油,灌胃相同体积的生理盐水为空白对照组CK0,以上7组小鼠在相同饲养条件下连续灌胃28 d,分别在灌胃0、7、14、21、28 d称量小鼠质量,末次灌胃禁食不禁水12 h后,小鼠眼眶静脉丛采血,置于不加抗凝剂的红头采血管内,4 低温4 000 r/min离心10 min,吸取上清液,按检测试剂盒说明书操
18、作步骤测定GSH-Px、SOD、CAT活性和MDA含量,解剖各组小鼠分离脏器(心、肝、脾、肾、脑和胸腺)并称质量,计算脏器指数(脏器指数=脏器质量/小鼠质量)100%。1.4石蜡切片制作与HE染色将采血后小鼠断颈处死,剖检死亡小鼠取出肝脏,迅速放在装有4%多聚甲醛溶液的广口瓶内固定,固定好的组织块经过修块、不同浓度CH3CH2OH脱水、苯蜡透明、包埋,石蜡切片机切片(厚度6 m),37 烘箱内过夜,HE染色,中性树胶封片后,置于光学显微镜下观察并拍照。1.5数据统计实验数据经SPSS 18.0统计分析,结果均以平均值标准误(x s)表示,采用单因子方差分析(One-way ANOVA,LSD)
19、法检验比较各组数据差异性,P0.05为差异显著,P0.01为差异极显著。2结果与分析2.1OHT对衰老小鼠体质量与脏器指数的影响OHT对衰老小鼠体质量的影响见表1。OHT灌胃第 7天,与空白对照组相比,普通橄榄油组和OHT低剂量组小鼠体质量下降,存在显著性差异(P0.05)。OHT灌胃第14天,与空白对照组相比,普通橄榄油组、OHT低剂量组和模型组小鼠体质量显著下降(P0.05)。OHT灌胃第21 天,与对照组相比,普通橄榄油组和模 型 组 小 鼠 体 质 量 下 降,存 在 极 显 著 性 差 异(P0.01),OHT 低剂量组小鼠体质量显著下降(P0.05);与模型组相比,VE阳性对照组和
20、OHT高剂量组小鼠体质量极显著增高(P0.01),普通橄榄油组和 OHT 中剂量组小鼠体质量显著增高(P0.05);与普通橄榄油组相比,OHT高、中、低剂量和VE组小鼠体质量均明显增加,存在极显著性差异(P0.01)。OHT灌胃第28天,与空白对照组相比,模型组、普通橄榄油和OHT低剂量组小鼠体质量明显下降,存在极显著性差异(P0.01);与模型组和普通橄榄油组相比,OHT高剂量和OHT中剂量组小鼠体质量增速明显,存在极显著性差异(P0.01);与VE阳性对照组相比,OHT中剂量和低剂量组小鼠体质量下降,存在极显著性差异(P0.05),至第21天和28天时,OHT中剂量组可明显增加衰老小鼠体质
21、量,增重效果明显好于普通橄榄油。OHT 对衰老小鼠脏器指数的影响见表 2。OHT灌胃28 d后,与空白对照组相比,模型组、普通橄榄油组、OHT中剂量和低剂量组小鼠心脏指数明显下降,存在极显著差异(P0.01),VE阳性对照组小鼠心脏指数升高,存在显著差异(P0.05);与模型组相比,VE阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠心脏指数升高,差异性极显著(P0.01);与普通橄榄油组相比,OHT高、中剂量组小鼠心脏指数增加,差异性极显著(P0.01);与VE阳性对照组相比,普通橄榄油组、OHT高、中、低组 小 鼠 心 脏 指 数 下 降,存 在 极 显 著 性 差 异17甘肃农业大学
22、学报2023 年(P0.01)。与对照组相比,模型组、阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠肝脏指数下降,差异性极显著(P0.01);与模型组相比,阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠肝脏指数升高,差异性极显著(P0.01);OHT高、中、低剂量组小鼠肝脏指数明显高于普通橄榄油组,低于VE阳性对照组,存在极显著性差异(P0.01)。与空白对照组相比,模型组、普通橄榄油组和OHT中、低剂量组小鼠脾脏指数明显下降,差异性极显著(P0.01),OHT高剂量组小鼠脾脏指数下降,存在显著性差异(P0.05),与模型组相比,VE阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组
23、小鼠脾脏指数增加,差异性极显著(P0.01);与普通橄榄油组相比,OHT高剂量组小鼠脾脏指数明显升高,差异性极显著(P0.05)。与空白对照组相比,模型组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠肾脏指数明显下降,差异性极显著(P0.01);与模型相比,阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中剂量组小鼠肾脏指数升高,差异性极显著(P0.01);与普通橄榄油组相比,OHT高剂量组小鼠肾脏指数显著升高,差异性极显著(P0.01),OHT低剂量组小鼠肾脏指数下降,差异性显著(P0.05);与VE阳性对照组相比,OHT高、中剂量组小鼠肾脏指数下降,差异性极显著(P0.05)。与空白对照组相比,模型组、普
24、通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠脑指数降低,差异性极显著(P0.01);与模型组相比,阳性对照组、普通橄榄油组和OHT高、中、低剂量组小鼠脑指数明显升高,差异性极显著(P0.01);与普通橄榄油组相比,OHT高、中、低剂量组小鼠脑指数明显升高,差异性极显著(P0.01);与阳性对照组相比,OHT高、中、低剂量组小鼠脑指数明显下降,差异性极显著(P0.01)。与空白对照组相比,模型组、普通橄榄表1OHT对衰老小鼠体质量的影响Table 1Effect of OHT on weight of aging mice组别Group空白对照组 CK0模型组 Model group阳性对照组Posi
25、tive control group普通橄榄油组Common olive oil groupOHT高剂量组OHT high-dose groupOHT中剂量组OHT medium-dose groupOHT低剂量组OHT low-dose group剂量/(mg kg-1)Dose-17020020010050灌胃时间/d Time033.131.6831.120.6431.121.4531.141.1231.110.8531.081.2031.090.74734.300.9033.131.2233.190.9933.051.02*33.250.4133.170.8633.061.08*143
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