Circ_DOCK1调节miR-122-5p_PPIB轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.pdf
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1、论著C i r c_D O C K 1调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响*金美 巴桑 次仁(日喀则市人民医院,西藏 日喀则 8 5 7 0 0 0)【摘要】目的 探讨环状核糖核苷酸_胞质分裂作用因子1(C i r c_D O C K 1)通过调节微小核糖核苷酸-1 2 2-5 p(m i R-1 2 2-5 p)/肽酰脯氨基顺反异构酶B(P P I B)轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量P C R检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织中的c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达
2、水平。取人结直肠细胞SW 4 8 0,脂质体转染法转染c i r c_D O C K 1干扰质粒(s h-c i r c_D O C K 1)、m i R-1 2 2-5 p抑制物(a n t i-m i R-1 2 2-5 p)和模拟物(m i R-1 2 2-5 p m i m i c s),以C C K-8法、划痕试验和T r a n s w e l l实验检测结直肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡情况。以生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析c i r c_D O C K 1与m i R-1 2 2-5 p的靶向关系。结果 结直肠癌组织的c i r c_D O C K 1、P P I B mR
3、NA表达水平高于癌旁组织,m i R-1 2 2-5 p表达水平低于癌旁组织。与挽救组和N C-c i r c_D O C K 1组比较,s h-c i r c_D O C K 1组的c i r c_D O C K 1和P P I B mR NA表达量下降,m i R-1 2 2-5 p表达量升高,且细胞转染4 8 h和7 2 h的A值及细胞迁移率和穿膜细胞数均降低(P0.0 5)。生物信息学软件预测c i r c_D O C K 1含有与m i R-1 2 2-5 p互补的核苷酸序列。转染m i R-1 2 2-5 p m i m i c s后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光
4、素酶报告质粒相对活性降低,转染a n t i-m i R-1 2 2-5 p后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加(P0.0 5)。结论 c i r c_D O C K 1在结肠癌组织中的表达上调,且能通过调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴影响结直肠癌的增殖、迁移和侵袭,可考虑经c i r c_D O C K 1作为结直肠癌的分子靶向治疗研究方向。【关键词】环状核糖核苷酸_D O C K 1;微小核糖核苷酸-1 2 2-5 p;结直肠癌;增殖;迁移;侵袭【中图分类号】R 7 3 5.3 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6
5、9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.0 9.0 1 0 基金项目:西藏自治区自然科学基金组团式医学援藏项目X Z 2 0 2 0 Z R-Z Y 3 4(Z)引用本文:金美,巴桑,次仁.C i r c_D O C K 1调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(9):1 2 9 8-1 3 0 3.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.0 9.0 1 0E f f e c t s o f c i r c_D O
6、 C K 1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s b y r e g u l a t i n g t h e m i R-1 2 2-5 p/P P I B a x i sJ i n m e i,B a s a n g,C i r e n(S h i g a t s e P e o p l e s H o s p i t a l,S h i g a t s e 8 5 7 0 0 0,T
7、i b e t,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f C i r c_D O C K 1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s b y r e g u l a t i n g m i c r o r i b o n u c l e o t i
8、 d e-1 2 2-5 p(m i R-1 2 2-5 p)/p e p t i d y l p r o a m i n o c i s-t r a n s i s o m e r a s e B(P P I B)a x i s.M e t h o d s T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c i r c_D O C K 1,m i R-1 2 2-5 p a n d P P I B i n c a n c e r t i s s u e s a n d a d j a c e n t t i s-s u e s o f c o l o r
9、e c t a l c a n c e r p a t i e n t s w e r e d e t e c t e d b y r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C R.H u m a n c o l o r e c t a l c e l l s S W 4 8 0 w e r e t r a n s f e c t e d w i t h c i r c_D O C K 1 i n t e r f e r i n g p l a s m i d(s h-c i r c_D O C K 1)
10、,m i R-1 2 2-5 p i n h i b i t o r(a n t i-m i R-1 2 2-5 p)a n d m i R-1 2 2-5 p m i m i c s(m i R-1 2 2-5 p m i m i c s).T h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d a p o p t o s i s o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s w e r e d e t e c t e d b y C C K-8 m e t h o d,s c r a t
11、c h t e s t a n d T r a n s w e l l t e s t.T h e t a r g e t i n g r e l a t i o n s h i p b e t w e e n c i r c_D O C K 1 a n d m i R-1 2 2-5 p w a s a n a l y z e d b y b i o i n f o r m a t i c s a n d l u c i f e r a s e r e p o r t e r g e n e e x p e r i m e n t s.R e s u l t s T h e e x p r
12、e s s i o n l e v e l s o f c i r c_D O C K 1 a n d P P I B mR NA i n c o l o r e c t a l c a n c e r t i s s u e s w e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n a d j a c e n t t i s s u e s,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f m i R-1 2 2-5 p w a s l o w e r t h a n t h a t i n a d j a c e n
13、t t i s s u e s.C o m p a r e d w i t h t h e r e s c u e g r o u p a n d N C-c i r c_D O C K 1 g r o u p,t h e e x p r e s s i o n o f c i r c_D O C K 1 a n d P P I B mR NA i n s h-c i r c_D O C K 1 g r o u p d e c r e a s e d,e x p r e s s i o n o f m i R-1 2 2-5 p 8921西部医学 2 0 2 3年9月 第3 5卷第9期 M e
14、 d J W e s t C h i n a,S e p t e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.9i n c r e a s e d,a n d t h e A v a l u e,c e l l m i g r a t i o n r a t e a n d n u m b e r o f t r a n s m e m b r a n e c e l l s a t 4 8 h a n d 7 2 h a f t e r t r a n s f e c t i o n d e-c r e a s e d(P0.0 5).B i o i n f o r m a
15、t i c s s o f t w a r e p r e d i c t e d t h a t c i r c_D O C K 1 c o n t a i n e d a n u c l e o t i d e s e q u e n c e c o m p l e m e n t a r y t o m i R-1 2 2-5 p.T h e d u a l l u c i f e r a s e r e p o r t e r g e n e e x p e r i m e n t s h o w e d t h a t t h e r e l a t i v e a c t i v
16、i t y o f t h e w i l d-t y p e l u c i f e r a s e r e p o r t e r p l a s m i d o f c i r c_D O C K 1 d e c r e a s e d a f t e r t r a n s f e c t i o n o f m i R-1 2 2-5 p m i m i c s,a n d t h e w i l d-t y p e l u c i f e r a s e o f c i r c_D O C K 1 a f t e r t r a n s-f e c t i o n o f a n
17、t i-m i R-1 2 2-5 p T h e r e l a t i v e t r a n s c r i p t i o n a l a c t i v i t y o f t h e r e p o r t e r p l a s m i d i n c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e e x p r e s s i o n o f c i r c_D O C K 1 i s u p-r e g u l a t e d i n c o l o n c a n c e r t i s s u e,a n d i t c a
18、n a f f e c t t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r b y r e g u l a t i n g t h e m i R-1 2 2-5 p/P P I B a x i s.C i r c_D O C K 1 c a n b e c o n s i d e r e d a s t h e r e s e a r c h d i-r e c t i o n o f m o l e c u l a r t
19、a r g e t e d t h e r a p y f o r c o l o r e c t a l c a n c e r.【K e y w o r d s】C y c l i c r i b o n u c l e o t i d e_d e d i c a t o r o f c y t o k i n e s i s 1;M i c r o r i b o n u c l e o t i d e-1 2 2-5 p;C o l o r e c t a l c a n c e r;P r o-l i f e r a t i o n;M i g r a t i o n;I n v a
20、 s i o n 结直肠癌是全球第三大常见恶性肿瘤,是导致癌因性死亡的第二大原因1,对人类健康造成了极大的影响,我国近年来的结直肠癌发病率和死亡率均持续升高,造成了严重的癌症负担2-3。因恶性肿瘤发生早期无特异性的症状,且受健康检查意识薄弱、漏诊及结肠镜检查覆盖不全等综合因素影响,多数结直肠癌患者就诊时已失去最佳手术时机,预后不佳。因此探索结直肠癌的发病机制,寻找新的治疗靶点对于结直肠癌的防治有重要意义。多项研究证实,非编码R NA参与癌症表型,关于非编码R NA的干预研究为结直肠癌的治疗提供了新的前景4-6。环状核糖核苷酸(c i r c R NA)作为非 编码R NA,能够调 节 微 小R
21、 NA(m i R NA)和信使R NA(mR NA),并充当m i R NA s的分子海绵和转录调节因子,与R NA结合蛋白质结合翻译蛋白,影响细胞的生命活动7。研究发现c i r c_胞质分裂作用因子1(D e d i c a t o r o f c y t o k i n e s i s 1,c i r c_D O C K 1)在结直肠癌中表达异常,且能影响人脑血管平滑肌细胞的增殖和凋亡8-9。m i R-1 2 2-5 p作为小型非编 码R NA已 经 被 证 实 参 与 多 种 癌 症 的 发 生 发展1 0-1 1。肽酰脯氨基顺反异构酶B(P e p t i d y l-p r o
22、 l y l c i s-t r a n s i s o m e r a s e,P P I B)有肽酰脯氨基顺反异构催化活性,在m i R NA调控下能发挥转录因子的作用,促进细胞的生长和增殖1 2。故本研究探讨c i r c_D O C K 1通过调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以期为结直肠癌的靶向治疗提供新的研究方向。1 材料与方法1.1 临床样本 选取2 0 2 0年5月2 0 2 1年5月收治的经病理诊断证实且术前未接受化疗的3 0例结直肠癌患者癌组织与癌旁组织标本(距离癌组织5 c m),患者年龄3 68 0岁,男性1 8例
23、,女性1 2例,平均(6 4.6 91 0.5 8)岁;分化程度:高分化4例,中分化1 5例,低分化1 1例;T NM分期:I/I I期1 2例,I I I/I V期1 8例。研究项目经医院伦理委员会批准,且患者均签署知情同意书。1.2 实验材料 人结直肠癌细胞SW 4 8 0株(中国科学院上海细胞库),1 0%胎牛血清、1%双抗(链霉素+青霉素)(南京科佰生物科技有限公司)DMEM培养基,于3 7、5%C O2密 闭 式 孵 箱 内 培 养。T r i z o l R NA抽提试剂、荧光素酶检测试剂盒、L i p o f e c t a m i-n e TM 3 0 0 0阳离子脂质体(美国
24、I n v i t r o g e n公司),c i r c_D O C K 1干扰质粒(s h-c i r c_D O C K 1),m i R-1 7-5 p反义寡核苷酸重组质粒(a n t i-m i R-1 7-5 p)和m i R-1 7-5 p模拟物(m i R-1 7-5 p m i m i c s)(苏州吉玛基因股份有限公司);3 5 5 0 UV酶标仪、7 5 0 0实时荧光定量P C R仪、电泳仪、C h e n i D o c X R S化学发光成像分析系统(B i o-r a d公司),徕卡生物倒置显微镜(德国L e i c a公司)。1.3 实时荧光定量P C R检测
25、c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达水平 结肠癌组织和癌旁组织加入液氮中研磨,以T r i z o l试剂盒提取总R NA,逆转录试剂盒将R NA逆转为c D NA,分别扩增c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B和内参U 6及-a c t i n基因,引物序列设计由上海生工生物工程有限公司合成,制备P C R反应体系,2S y b g r e e n预混合物1 0 L,c D NA模板8.8 L,上下游引物各0.6 L,总体积2 0 L,严格按照试剂盒说明书操作,在P C R结束后直接获取目的基因相对
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