电针对阿片类药物耐受大鼠海马G蛋白偶联受体及cAMP、CREB表达的影响.pdf
《电针对阿片类药物耐受大鼠海马G蛋白偶联受体及cAMP、CREB表达的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《电针对阿片类药物耐受大鼠海马G蛋白偶联受体及cAMP、CREB表达的影响.pdf(7页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,实验研究 :基金项目:辽宁省教育厅科学技术研究项目()作者单位:辽宁中医药大学附属医院麻醉科,辽宁 沈阳 通信作者:王铁东,:电针对阿片类药物耐受大鼠海马 蛋白偶联受体及 、表达的影响刘春于波王铁东【摘要】目的观察电针对阿片类药物耐受大鼠机械刺激缩足反应阈值(,)、海马组织 蛋白偶联受体(,)及环磷酸腺苷(,)、反应元件结合蛋白(,)表达的影响,探索 蛋白 谷氨酸受体 通路是否为电针治疗阿片类药物耐受的可能机制。方法选取 只 级 大鼠,雌雄各半,按随机数字表法分为生理盐水对照组、药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组及电针 谷氨酸受体
2、抑制剂 药物耐受组,每组各 只。通过对药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组及电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组正常大鼠连续腹腔注射吗啡 ,次 ,制备吗啡耐受(,)模型,建模成功后,组继续给予连续 腹腔注射吗啡,谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组在予腹腔吗啡注射前 ,予腹腔注射谷氨酸受体抑制剂;电针 药物耐受组在予腹腔吗啡注射后 ,予双侧“合谷”“内关”“三阴交”及“足三里”穴位电针干预,断续波,频率 ,次 ,每次干预时间为 ,连续 ;电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组给予谷氨酸受体抑制剂和吗啡后,再进行同电针 药物耐受组相同的电针干预。各组分别于造模前、造模第天、天、天、天和建
3、模成功后第 天、天、天、天检测左足 ;采用蛋白质免疫印迹(,)法检测大鼠海马组织 、蛋白表达,采用酶联免疫吸附测定法()检测血浆 内啡肽()含量。结果与生理盐水对照组比较,药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组及电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组大鼠注射吗啡后第 天、天、天 明显升高,差异有统计学意义(),但注射吗啡 后降低至基础水平,与生理盐水对照组比较,差异无统计学意义(),说明 模型造模成功;与药物耐受组比较,谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组、电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组大鼠在第 天、天、天的 升高,差异有统计学意义();与电针 谷氨酸受体抑制剂
4、药物耐受组比较,电针 药物耐受组大鼠在第 天、天、天的 明显升高,差异有统计学意义()。与生理盐水对照组比较,药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组大鼠海马组织中 、的相对表达均升高,的表达相对下降,差异有统计学意义();与药物耐受组比较,谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组和电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组大鼠海马组织中 、的相对表达均有所下降,差异有统计学意义(),电针 药物耐受组大鼠海马组织中 的表达相对升高,差异有统计学意义();与电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组比较,电针 药物耐受组大鼠海马组织中 、的相对表达均降低,的表达相对升高
5、,差异有统计学意义()。结论电针可明显改善 模型大鼠阿片类药物耐受效应,其机制可能与下调大鼠海马组织中 、蛋白表达,促进 表达,进而减弱 蛋白 谷氨酸受体 通路上调有关。【关键词】阿片类药物耐受;电针;机械性痛阈;蛋白;环 磷酸腺苷;反应元件结合蛋白【中图分类号】【文献标识码】,(,)世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,【】(),(),()(),(),(),(),()(),(),(),()(),(),(),(),(),()(),(),(),【】;阿片类药物在临床中广泛应用于中、重度疼痛治疗,包括阿片生物碱类(如吗啡、可待因)及人工合成阿片类(如哌替啶、芬太尼等)。阿片类药物耐受是一种慢性、渐
6、进加重性、复发率高的脑疾病,主要表现为两个方面:一是镇痛效果降低,即持续给予阿片类药物后镇痛效果逐渐减弱甚至消失,需要增加阿片类药物剂量才能获得同等的镇痛效果;二是除了便秘之外的阿片药物相关的不良反应,如恶心、呕吐、嗜睡、头晕、皮肤瘙痒等一般会随着耐受的产生而逐渐减弱甚至消失,对个人身心健康、生活工作、社会稳定和经济开发有着难以估量的危害。截至目前,阿片类药物耐受的分子机制仍不十分清楚,对其相关机制的研究及寻找高效的治疗方法是目前研究的重点和热点。有研究表明,反应元件结合蛋白(,)是首先发现的与药物耐受密切相关的转录因子,而它的活化意味着环磷酸腺苷(,)途径的上调,而 系统的上调与阿片依赖成瘾
7、机制的关系目前已得到充分认识,蛋白 是阿片依赖形成过程中重要的受体后信号转导通路之一 。本研究通过建立 模型,观察电针“合谷”“内关”“三阴交”及“足三里”穴对吗啡耐受(,)大鼠机械刺激缩足反应阈值(,)及对大鼠海马组织中海马组织 蛋白偶联受体(,)、蛋白表达的影响,探讨 蛋白 谷氨酸受体 通 世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,路是否是电针治疗阿片类药物耐受的可能机制。材料与方法 材料 动物 级清洁级 大鼠 只,雌雄各半,体质量 ,购于辽宁长生生物技术股份有限公司 生产许可证号:(辽)。为使大鼠适应实验环境,正式开始实验前于辽宁中医药大学动物实验中心分笼饲养 实验单位使用许可证编号:(辽)
8、进行适应性喂养 ,饲养环境有良好的通风和空气过滤系统,明暗循环,恒定湿度,室温(),给予充足的啮齿类动物标准颗粒饲料,自由饮食饮水。通过随机数字表法将大鼠分为 组,分别为生理盐水对照组、药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组、电针 药物耐受组及电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组。实验过程中对动物的处置严格遵照中华人民共和国科学技术部 年发布的 关于善待实验动物的指导性意见,并通过辽宁中医药大学动物实验研究中心医学伦理委员会审核(审批号:)。试剂与仪器盐酸吗啡注射液(东北制药集团沈阳第一制药有限公司,生产批号:);水合氯醛(天津市福晨化学试剂厂,生产批号:);谷氨酸受体抑制剂(上海皓元生物医药
9、科技有限公司,生产批号:);多聚甲醛固定液(碧云天生物技术研究所,生产批号:);重组 蛋白抗体、重组 抗体、重组 抗体(美国 公司,生产批号:、)。韩式穴位神经刺激仪(联创科技南京济生医疗科技有限公司,型号:);华佗牌一次性针灸针(苏州医疗用品厂有限公司,);纤毛机械刺激针(美国 ,触觉纤维丝测量套件);蛋白定量试剂盒、试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司);图像分析系统(美国 公司)。方法 模型制备与分组 模型制备大鼠称重,将其俯卧位固定,常规擦拭消毒,分别于实验每天 和 在大鼠腹腔部注射盐酸吗啡注射液,剂量为 ,持续给药 ,制备 模型,以 降低来证实 模型的建立,造模组大鼠 一开始迅速升高,
10、然后逐渐降低,至吗啡注射 后 降低与 组无差异,证明 模型建立成功。药物耐受组(组)、谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组(组)、电针 药物耐受组(组)及电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组(组)均进行 造模 。干预方法生理盐水对照组(组):不采用任何干预措施,为减少干扰影响,实验开始后分别于每天 和 在小鼠腹腔部注射 等同比例的生理盐水,注射后 将大鼠固定在固定装置中 ,并模拟针刺行为,次 ,连续 。药物耐受组(组):自实验开始后,于每天相同时间在小鼠腹腔部注射 盐酸吗啡注射液,注 射 后 将 大 鼠 固 定 在 固 定 装 置 中 ,模拟针刺行为,次 ,连续 。谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组(组):采
11、用谷氨酸受体抑制剂干预。自实验开始后,分别于腹腔吗啡注射前 (即每天 和 )腹腔注射谷氨酸受体抑制,再于每天相同时间在小鼠腹腔部注射 盐酸吗啡注射液,注射后 在固定装置中固定 ,模拟针刺行为,次 ,连续 。电针 药物耐受组(组):采用电针干预。电针 药物耐受组同药物耐受组注射吗啡,实验开始后,在予腹腔吗啡注射后 将大鼠固定在固定装置中,针刺定位、操作方法参照 实验针灸学 和 大鼠穴位图谱的研制 选取双侧“合谷”“内关”“三阴交”及“足三里”穴,消毒针刺,采用 针灸针刺入穴位,“合谷”直刺 ,“内关”直刺 ,“足三里”直刺 ,“三阴交”直刺 ,施以平补平泻法得气后,同侧两针柄分别连接 韩氏穴位神
12、经刺激仪的输出端。治疗参数:疏密波频率 ,强度 (开始 ,增加 ),每次干预时间为 ,次 ,共 。电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组(组):采用谷氨酸受体抑制剂和电针干预。电针 谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组同谷氨酸受体抑制剂 药物耐受组一样给予谷氨酸受体抑制剂和吗啡后,再进行同电针 药物耐受组相同的电针干预。取材及指标检测世界中西医结合杂志 年第 卷第 期 ,行为学测定行为学观察:吗啡注射期间密切观察大鼠生命体征及活动:是否出现便秘、腹胀、易怒、攻击、自残等行为;留意大鼠饮水、摄食、体质量、毛发变化;以及运动障碍、抽搐或死亡等情况的发生。检测:采用触觉纤维丝检测大鼠造模前、开始造模第 天、天、
13、天、天及造模成功后第天、天、天、天共 个时间点 作为痛阈指标,以观察造模成功率和治疗效应。测量时,将大鼠放在金属丝网眼垫上,用透明有机玻璃箱()约束大鼠,在安静的环境中经过一段适应时间后,将动态足底测痛仪上的 丝对准大鼠左侧后肢足底(避开足垫),启动仪器使 丝上升,以恒定速率 连续递增的压力触压大鼠左足的皮肤,当大鼠出现后足抬起、迅速回缩、快速甩足、甩足后舔足甚至嘶叫等反应时,即停止加压,仪器自动记录大鼠缩足时 丝所施的压力(单位:),以此数值作为机械刺激缩足阂值。测量时间固定在 ,环境温度:()。酶联免疫吸附测定()法检测行为学检测完成后立即取材。用 水合氯醛 腹腔注射麻醉 大鼠,从左心室至
14、主动脉插管,取血收集于 空白采血管中,经抗凝处理,静置 后,以离心半径 ,转速 离心 ,取血浆,冰箱保存。按 试剂盒使用说明进行操作,将稀释好的标准品及待测样品加入反应孔内,反复振荡、温育、洗涤、振荡、拍干,取出酶标板,迅速加入终止液,加入终止液后应立即于波长 的酶标仪上读取各孔的 值,以吸光度 值为纵坐标(),相应的 标准品浓度为横坐标(),做得相应的曲线,样品的 含量可根据其 值由标准曲线换算出相应的浓度。检测用 水合氯醛 腹腔注射麻醉 大鼠,预温的 溶液 以及预冷的 多聚甲醛固定液灌注后,立即取出 大鼠脑部海马组织,加 裂解液超声波冰浴匀浆,以离心半径 ,转速 离心 ,收集上清液,保存,
15、采用 法进行蛋白含量的测定。加入 浓度的 凝胶上样、电泳、转膜,用含 脱脂奶粉的 (封闭液)浸泡 膜,室温()摇床封闭 ,用其稀释相应的一抗和 抗体,孵育过夜,充分洗涤 膜 次,次。再用稀释一抗体系相同的稀释液稀释 标记的二抗,室温孵育,充分洗涤 膜 次,次。按照试剂盒说明配置显色剂,将吸干水分的 放置在成像仪上,进行显色曝光,试剂盒显色后以 凝胶图像分析系统拍出条带,以 为内参,用 软件对目的蛋白和内参蛋白条带的灰度值进行分析,按相对灰度值 目的蛋白灰度值 内参蛋白灰度值,计算大鼠海马组织 、蛋白的相对表达量。统计学方法采用 统计学软件进行各项实验数据的统计分析,软件对实验图片进行分析,软件
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 电针 阿片 类药物 耐受 大鼠 海马 蛋白 受体 cAMP CREB 表达 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。