不同生长年限与采收季节对何首乌中14个成分含量的影响.pdf
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1、Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med不同生长年限与采收季节对何首乌中14个成分含量的影响李妍怡1,汪祺2a,杨建波2,王莹2,刘越1,文海若2,张玉杰1*,马双成2*1.北京中医药大学 中药学院,北京 102400;2.中国食品药品检定研究院,北京 100050摘要 目的:探究何首乌中成分含量随生长年限和采收季节的变化规律。方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS),测定德庆地区何首乌药材中 14 个成分反式-2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-D-葡萄糖苷(trans-T
2、HSG)、顺式-THSG(cis-THSG)、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-D-葡萄糖苷含量。结果:建立了准确可靠的 UPLC-QQQ-MS/MS 测定何首乌中 14 个成分含量的方法;随生长年限的增加,何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类化合物含量多降低;随采收季节的变化,二苯乙烯苷类、黄酮类、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷成分多春季含量最高、秋季含量最低,酚类化合物多夏季含量最高、春秋含量低。结论:成分的含量与何首乌药材生长年限及采
3、收季节密切相关,其中采收季节变化较为明显;以 trans-THSG、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷作为潜在肝毒性物质,cis-THSG 作为有效成分,秋季为何首乌的适宜采收期,与中华人民共和国药典2020 年版规定相符。关键词 何首乌;超高效液相色谱-三重四极杆质谱法;二苯乙烯苷类成分;黄酮类成分;酚类成分;采收季节;生长年限中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1673-4890(2023)08-1769-07 doi:10.13313/j.issn.16734890.20230315002Influences of Growth Years and Harvest Seasons
4、on Content of 14 Components in Polygoni Multiflori RadixLI Yan-yi1,WANG Qi2a,YANG Jian-bo2,WANG Ying2,LIU Yue1,WEN Hai-ruo2,ZHANG Yu-jie1*,MA Shuang-cheng2*1.School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 102400,China;2.National Institutes for Food and Drug Control,B
5、eijing 100050,ChinaAbstract Objective:To explore the change pattern of component contents of Polygoni Multiflori Radix(PM)with growth years and harvest season.Methods:Ultra-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry(UPLC-QQQ-MS/MS)was used to quantify 14 components in PM f
6、rom Deqing area,including trans-2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-D-glucoside(THSG),cis-THSG,2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-(2-O-fluoroyl)-D-glucopyranoside,polygonin,resveratrol,catechin,epicatechin,hyperoside,rutin,gallic acid,p-hydroxybenzoic acid,p-hydroxybenzaldehyde,p-coumaric acid,and cassia
7、-8-O-D-glucoside.Results:An accurate and reliable method was established for the determination of the content of 14 components in PM by UPLC-QQQ-MS/MS.The content of stilbene glycosides,flavonoids,and phenolic compounds was found decrease with the increase in growth years.Stilbene glycosides,flavono
8、ids,and cassia-8-O-D-glucoside were the highest in spring and the lowest in autumn,phenolic was the highest in summer and the lowest in spring and autumn.Conclusion:The content of components was closely related to the growth years and harvest seasons of PM,and the influence of harvest seasons was gr
9、eater.It was considered that trans-THSG and 中药农业 基金项目 国家自然科学基金项目(81973476)*通信作者 张玉杰,教授,研究方向:中药药代动力学;E-mail:马双成,研究员,研究方向:中药民族药物质基础与质量安全评价;E-mail:a 并列第一作者1769Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Medcassia-8-O-D-glucoside should be used as potential hepatotoxic substances and cis-T
10、HSG as the active component.It was suitable for harvesting PM in autumn,which was consistent with the provisions of the 2020 edition of Chinese Pharmacopoeia.Keywords Polygoni Multiflori Radix;UPLC-QQQ-MS/MS;stilbene glycosides;flavonoids;phenols;harvest season;growth years何 首 乌 为 蓼 科 植 物 何 首 乌 Poly
11、gonum multiflorum Thunb.的干燥块根,为常见的补益类中药,在临床中广泛应用,作为药物首次记载于何首乌传 中,后在历代本草中均有记载1。其性微温,味苦、甘、涩,生品解毒消痈、截疟通便;制品味滋腻,可补肝肾、化浊、调脂2-3。随着药材质量研究的深入,何首乌的规范采收季节和年限引起了人们的广泛关注。明代 本草品汇精要 记载:“春末、夏中、初秋,候晴明日取根”4。清代药物出产辨记载:“自立冬至立春为最适宜,成分亦好”5。中华人民共和国药典(以下简称中国药典)2020年版规定:“于秋、冬二季叶枯萎时采挖”2。由古法四季采收,演变为秋冬采收是否有据可依未见详细研究报道;此外,何首乌的
12、采收年限也未见明确规定。中医界历来视广东德庆为何首乌道地产区,其所产何首乌条壮、色正、粉性足、药效高。因此本研究选用广东德庆何首乌药材,对各生长年限和采收季节何首乌中质量指标的变化规律进行了探索研究。二苯乙烯苷类化合物为蓼科植物中何首乌特有的一类活性成分,在植物体内含量较高;黄酮、酚酸类化合物在植物体内广泛存在,其化学性质较为活泼,推测其随季节年限变化明显。故本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS)对何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类和酚类成分进行含量分析,监测上述3类成分随生长年限、采收季节发生的变化,为古今采收时间异同提供实验数据的支撑,并对何首乌质量评定指标的
13、确立提供理论参考。1材料1.1仪器LCMS-8050 型 UPLC-QQQ-MS/MS 系统(日本岛津公司);KQ-300DA型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);C800型凌生多功能粉碎机(永康市红太阳机电有限公司);MSA6.6S-CE型百万分之一分析天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司)。1.2试剂对照品反式-2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-D-葡萄糖苷(trans-THSG,批号:110844-201915)、虎杖苷(批号:111575-201603)、白藜芦醇(批号:111535-201703)、儿茶素(批号:110877-202005)、表儿茶素(批号:110878-201
14、703)、金丝桃苷(批号:111521-201809)、芦丁(批号:100080-201811)、没食子酸(批号:110831-201906)均购自中 国 食品药品检定研究院;对照品 2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷(批号:C25S11Y125979)、对 羟 基 苯 甲 酸(批 号:D13O8S45560)、对羟基苯甲醛(批号:Y02J7C15574)、对香豆酸(批号:Y16O8C45561)均购自上海源叶生物科技有限公司;顺式-THSG(cis-THSG,批号:18012507,成都普菲德生物技术有限公司);决明酮-8-O-D-葡萄糖苷(批号:S
15、TC23540105,上海诗丹德生物技术有限公司);所有对照品质量分数均98%;乙腈(德国 Merck 公司);甲醇(美国Fisher公司);甲酸(美国Sigma公司);超纯水(美国Millipore公司);其余试剂均为分析纯。1.3药材何首乌药材于2021年春、夏、秋3季收集自广东省肇庆市德庆县,经中国食品药品检定研究院张南平主任药师鉴定均为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.的 干 燥 块 根。样 品 来 源 信 息见表1。2方法与结果2.1色谱与质谱检测条件色谱条件:ACQUITY UPLC HSS C18色谱柱(100 mm2.1 mm,1.8 m)
16、;流动相为 0.2%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(03.5 min,90%85%A;3.57.0 min,85%A;7.010.0 min,85%74%A;10.012.0 min,74%68%A;12.015.0 min,68%64%A;15.017.0 min,64%A;17.031.5 min,64%20%A;31.536.0 min,20%A;36.036.2 min,1770Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med20%90%A;36.241.0 min,90%A);流 速 为0.4 mL m
17、in1;柱温为27;进样量为1 L。质谱条件:电喷雾离子源(ESI),正、负离子多反应检测(MRM)模式。空气作为干燥辅助气,体积流量为 10 L min1,加热模块温度为 400;氮气(N2)作为锥孔气,体积流量为3 L min1,脱溶剂管温度为300;氩气(Ar)用于碰撞诱导解离(CID)气体。检测模式为正、负离子同时扫描,离子源温度300,接口电压为3000 V;每个离子对 驻 留 时 间 为 23.8 ms。14 个 成 分 的 质 谱 参 数见表2。2.2溶液的制备2.2.1供试品溶液的制备取1.3项下药材粉碎后过四号筛(65目),得不同采收时间样品细粉。精密称取何首乌样品 1 g,
18、加入 50 倍量 70%乙醇,置 100 mL具塞锥形瓶中超声提取30 min,静置冷却后补足减失的质量,并用定量滤纸得续滤液25 mL。将续滤液置100 mL蒸发皿中,95 水浴加热挥干,用新配制备的70%乙醇溶解并定容至5 mL,澄清透明溶液经0.22 m滤膜滤过后,即得供试品溶液。2.2.2对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷类、黄酮类等对照品粉末适量,置于10 mL量瓶中加甲醇溶解定容,得到各对照品母液;混合14个成分的对照品母液,并用70%乙醇梯度稀释,最终得对照品混合储备液。2.3何首乌中14个成分的UPLC-QQQ-MS/MS分析取 2.2项下溶液适量,进样分析,得到 UPLC-Q
19、QQ-MS/MS总离子流图(图1)。2.4方法学考察2.4.1专属性试验取2.2.2项下对照品溶液,以对照品质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得到何首乌中14个化学成分的线性回归曲线,见表3。2.4.2精密度试验精密称取1年生夏季采收样品(编号1X)粉末1 g,按2.1、2.2项下条件与方法同天内连续进样6次,计算日内精密度的RSD。结果显示,样品中14个化学成分的平均日内精密度RSD表1何首乌样品来源信息编号1C2C3C4C5C1X2X3X4X5X1Q2Q3Q4Q5Q生长年限/年123451234512345收集时间/年-月-日2021-04-192021-04-192021-0
20、4-192021-04-192021-04-192021-08-182021-08-182021-08-182021-08-182021-08-182021-11-292021-11-292021-11-292021-11-292021-11-29表2何首乌中待测化合物质谱检测参数化合物trans-THSGcis-THSG2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷虎杖苷白藜芦醇儿茶素表儿茶素金丝桃苷芦丁没食子酸对羟基苯甲酸对羟基苯甲醛对香豆酸决明酮-8-O-D-葡萄糖苷分子式C20H22O9C20H22O9C30H30O12C20H22O8C14H12O3C1
21、5H14O6C15H14O6C21H20O12C27H30O16C7H6O5C7H6O3C7H6O2C9H8O3C20H24O9tR/min7.364.9512.176.6711.342.743.897.136.811.202.924.135.2612.74MRM离子对(m/z)405.15243.15405.15243.15581.20405.20389.15227.20227.05143.10289.00109.00289.00109.00463.10300.15609.00300.15168.95125.05137.2593.05121.0092.05163.20119.05407.20
22、245.15碰撞电压/V20191921242526272616152415201771Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med分别为 0.39%、0.61%、1.39%、0.76%、0.77%、1.49%、1.97%、2.86%、1.99%、2.80%、1.98%、3.26%、1.48%、1.67%,均 小 于 4.0%,精 密 度良好。2.4.3重复性试验精密称取1年生夏季采收样品(编号 1X)粉末 1 g(平行称取 6份),按 2.1、2.2项下条件与方法制备分析,分别进样3针,随行标准曲线考察重复性。得
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