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白花蛇舌草对人舌鳞癌细胞Tca83的作用机制研究.pdf
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1、现代实用医学2 0 2 3年10 月第35卷第10 期白花蛇舌草对人舌鳞癌细胞Tca83 的作用机制研究.1283戚路晗,杜英南,陈靖怡,崔臻,常怀广,张蕾【摘要】目的通过体外实验研究不同浓度白花蛇舌草提取液作用不同时间后对人口腔舌鳞癌细胞株Tca83调亡的影响。方法配制0、10 0、30 0、6 0 0 和9 0 0 g/ml5种浓度的白花蛇舌草提取物,分别作用2 4、48 和72h后,通过免疫组化法、MTT法及流式细胞仪检测Tca83细胞的存活率、Bcl-2蛋白表达及凋亡情况。结果各浓度组的白花蛇舌草提取物均可促进Tca83细胞不同程度调亡,并观察到抗调亡的Bcl-2蛋白减少或消失;随着白
2、花蛇舌草提取液浓度的增加和作用时间的延长,细胞调亡率随之增加;低浓度白花蛇舌草提取液在短时间作用后,将Tca83细胞抑制在G0/G1期;所有浓度组白花蛇舌草提取液经过长时间作用于Tca83细胞后,将其抑制在G2/M期。结论白花蛇舌草在体外实验中可显著促进Tca83细胞调亡,并且在一定作用时间及药物浓度范围内,细胞调亡程度与药物作用时间和药物浓度成正比。【关键词】白花蛇舌草;舌癌:凋亡doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2023.10.006【中图分类号】R739.8Mechanical study of Hedyotis diffusa on tongue squamou
3、s cell carcinoma celline Tca83 in vitroQI Luhan,DU Yingnan,CHEN Jingyi,CUI Zhen,CHANG Huaiguang,ZHANG Lei(Ningbo College of HealthSciences,Ningbo 315100,Zhejiang,China)Corresponding author:ZHANG Lei,Email:AbstractjObjective To explore the effect of different concentrations of Hedyotis diffusa on ton
4、gue squamous cellcarcinoma cell line Tca83 about apoptosis in vitro.MethodsTca83 cells were treated by Hedyotis diffusa with differentconcentrations(0,100,300,600 and 900 g/ml)and different time(24 h,48 h,72 h)in vitro.The induction of apoptosisof Tca83 cells was observed with immunohistochemical st
5、aining,MTT assay and flow cytometry.Results Variousconcentrations of Hedyotis diffusa could promote Tca83 cells apoptosis,and the expression of anti-apoptotic proteinBcl-2 was downregulated or disappeared.The apoptosis rate increased with the increase of concentration and the pro-longation of treatm
6、ent time.Obviously,Tca83 cells showed GO/Gl arrest in low concentration of Hedyotis diffusa,and they showed G2/M arrest after drug action for a long time.Conclusions Hedyotis diffusa can significantly pro-mote the apoptosis of Tca83 cells.Within a certain range of treating time and dose,the degree o
7、f apoptosis is propor-tional to the time and concentration of the drug.Key words】H e d y o t i s d i f f u s a;T o n g u e s q u a mo u s c e l l c a r c i n o ma;A p o p t o s i s舌癌是人类最常见的口腔癌之一,大部分恶性程度较高,浸润性强,生长快。因舌体的运动频繁和血运丰富,舌癌经常在早期就发生颈淋巴结转移,而且转移率比较高,亦可发生远处转移。对于舌癌的临床治疗,目前国内和国外学者普遍认为,以手术为主,辅以放化疗的综
8、合治疗是降低患者死亡率,减少术后复发,提高人生存率的最有效途径。基金项目:浙江省大学生科技创新活动计划(2 0 2 2 R464A002)作者单位:31510 0 宁波,宁波卫生职业技术学院通信作者:张蕾,Email:156 2 4142 q q.c o m【文献标志码】A【文章编号】16 7 1-0 8 0 0(2 0 2 3)10-12 8 3-0 3Modern Practical Medicine,2023,35(10):1283-1285于肿瘤术后。白花蛇舌草是茜草科的草本植物,是目前国内研究较多的抗癌中草药,从白花蛇舌草中已经提取分离出环葱醌类、烯醚类、多糖类和黄酮类等数十种化合物
9、,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎以及增强机体的非特异性免疫功能作用。有研究报道白花蛇舌草能够诱导多种肿瘤细胞的凋亡。因此,在胃癌、肝癌、直肠癌及子宫颈癌等治疗中被广泛应用。目前,白花蛇舌草对于口腔鳞癌,尤其是舌鳞癌的研究很少,本实验通过测定细胞存活率、调亡率及抗凋为了减少化疗副作用,中草药越来越多的应用:1284亡蛋白Bcl-2表达来研究白花蛇舌草提取物能否促进人口腔舌鳞癌细胞Tca83的凋亡,现报道如下。1资料与方法1.1细胞株及药品品人舌鳞癌Tca83细胞株购于北京大学口腔医院科研中心。白花蛇舌草购于同仁堂大药房,制备方法:取白花蛇舌草干品10 0 g,研磨成粉末状,用10 0 0 ml水浸泡1
10、h,加热沸腾2 h,过滤后离心2 次,取上清液浓缩至10 0 ml,过滤除菌后获1.0g/ml白花蛇舌草提取液。1.2主要试剂和仪器RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)、PI、RNA 酶等购于生工生物工程公司;台盼蓝、Bcl-2免疫组化试剂盒和DEPC等购于新正好生物工程有限公司。罗氏CedexHiRes高清图像细胞分析系统:艾力特生命科学有限公司;流式细胞仪:贝克曼库尔特公司产科研型。1.3Tca83细胞株的传代培养及实验分组取汇集成片、良好状态呈对数生长期的Tca83细胞,经胰蛋白酶(0.5%)和EDTA(0.2%)混合消化,形成细胞悬液。以1x10/ml的浓度接
11、种在培养瓶中,放置在37、5%CO2的培育箱中培养。本实验分为5组,对照组是等量标准培养基,每天更换。实验组为白花蛇舌草提取液配制成10 0 30 0.6 0 0 和9 0 0 g/ml4个浓度组。接种2 4h后,在进入对数生长期的Tca83细胞中开始加药,并且每隔2 4小时换液以维持药物浓度。每个浓度组的药物分别作用Tca83细胞2 4、48 和7 2 h后,测定白花蛇舌草提取液对细胞作用的时效关系。1.4光学显微镜下观察Tca83细胞形态学变化用胰蛋白酶消化Tca83细胞,接种于9 6 孔培养板中,每孔浓度均为110 4/ml,在2 4h细胞完全贴壁后,分别加入各浓度药物,在倒置显微镜下观
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