不同浓度谷胱甘肽对储存红细胞内氧化应激反应的影响.pdf
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1、实验研究不同浓度谷胱甘肽对储存红细胞内氧化应激反应的影响李莲莲 成问 苟大明 :基金项目:国家自然科学基金()作者单位:遵义医科大学附属医院麻醉科李莲莲(现在重庆市巴南区人民医院麻醉科);遵义医科大学第二附属医院麻醉科(成问);贵州茅台医院麻醉科(苟大明)通信作者:苟大明,:【摘要】目的 探讨不同浓度谷胱甘肽()对储存红细胞()内氧化应激反应的影响。方法 选择 份新鲜制备的 各取 ,平均分为四组:枸橼酸葡萄糖()组、组、组和 组,每组 。组中加入 保存液 ,再加入生理盐水 ,、和 三组均加入 保存液 ,再分别加入 、的 溶液 。四组均置于 冰箱密封保存。在保存的第、天,分别采用酶联免疫吸附试验
2、()测定 内 含量和 酶活性,采用黄嘌呤氧化酶法测定 内超氧化物歧化酶()活性,采用硫代巴比妥酸比色法测定 内丙二醛()含量。结果 与 组比较,第、天 组和 组的 含量和 酶活性明显升高();与 组比较,组和 组 含量和 酶活性明显升高()。与 组比较,第、天 组 酶活性明显升高(),第、天 组 酶活性明显升高();与 组比较,第 天 组和 组 酶活性明显升高()。与 组比较,第、天 和 组 含量明显降低();与 组比较,第、天 组和 组 含量明显降低()。结论 内加入 、的谷胱甘肽具有一定的抗氧化应激作用,可降低 的储存性损伤。【关键词】储存红细胞;谷胱甘肽;三磷酸腺苷;超氧化物歧化酶;丙二
3、醛;氧化应激 ,:,:【】()(),:,(),(),(),(),(),(),(),临床麻醉学杂志 年 月第 卷第 期 ,(),【】;储存红细胞(,)在储存过程中,会随着储存时间延长发生逐渐加重的储存损伤。储存损伤的变化不仅体现在代谢水平的改变,最重要的是氧化还原稳态的失衡以及细胞骨架的改变。在减轻储存损伤的研究中,本研究团队已经对增加能量供给等方面进行了较为深入的研究。谷胱甘肽(,)减少可能是导致 储存损伤的重要机制之一。可能减轻 的氧化应激反应,降低 损伤。本实验研究在 中加入不同浓度的,观察储存不同时间后 相关指标的变化,探讨 在 储存过程中的抗氧化应激作用。材料与方法实验细胞本实验研究经
4、医院伦理委员会批准()。由输血科提供从制备到临床应用的新鲜去白红细胞 份(每份 ),每份抽取 ,余下继续保存备用。实验分组及处理在无菌操作台内将 平均分为四组:枸橼酸葡萄糖(,)组、组、组和 组,每组 。本实验参照文献方法分别配置 溶液浓度梯度 、。组加入 保存液 ,再加入生理盐水 ,组、组和 组 均加入 保存液 ,再分别加入浓度为 、和 的 溶液 ,轻轻混匀,使药物均匀分布。四组 均置于 冰箱密封保存。法分别在保存的第、天取 置于无菌离心管中,轻微摇晃振荡混匀,下 离心 ,取上清,按照试剂盒说明书(批号:)操作,检测 内三磷酸腺苷(,)含量。分别在保存的第、天取 ,加入 蒸馏水稀释成 的溶血
5、液,轻微摇晃振荡混匀,放置 直至溶血液对光呈完全透明状,严格按照试剂盒说明书(批号:)操作,检测 内谷胱甘肽过氧化物酶(,)活性。所有样本只经过 次解冻,每个样本重复测量 次,取平均值。黄嘌呤氧化酶法 分别在保存的第、天取 ,加入生理盐水 ,离心 ,用微量移液器吸去上清液留沉淀的。取离心后沉淀的 加入所取 体积 倍的蒸馏水(),在涡旋混匀器上混匀 将细胞充分裂解。在 裂解产物中加入无水乙醇 置涡旋混匀器上充分混匀 ,再加入三氯甲烷 置涡旋混匀器上混匀 ,离心 ,此时液体分为 层,上层为超氧化物歧化酶(,)抽提液用于检测。检测过程按试剂盒(批号:)操作说明进行。每个样本重复测量 次,取平均值。硫
6、代巴比妥酸比色法分别在保存的第、天取 ,加入生理盐水 ,离心 ,用微量移液器吸去上清液留沉淀的。取离心后沉淀的 加入所取 体积 倍的蒸馏水(),在涡旋混匀器上混匀 将细胞充分裂解。在 裂解产物中加入无水乙醇 置涡旋混匀器上充分混匀,再加入三氯甲烷 置涡旋混匀器上混匀,离心 ,此时液体分为 层,上层为丙二醛(,)抽提液用于检测。检测过程按试剂盒(批号:)操作说明进行。每个样本重复测量 次,取平均值。统计分析采用 软件进行统计分析,采用 软件绘图。正态分布计量资料以均数标准差()表示,组间比较采用两因素重复测量方差分析。为差异有统计学意义。结 果 含量与 组比较,第、天 组和 组的 含量明显升高(
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