畅脉乐通过调控PPAR信号通路对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性相关蛋白影响.pdf
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1、Advances in Clinical Medicine 临床医学进展临床医学进展,2023,13(10),16670-16677 Published Online October 2023 in Hans.https:/www.hanspub.org/journal/acm https:/doi.org/10.12677/acm.2023.13102333 文章引用文章引用:黄松雄,张玉琴,刘巧婷,李志,吴帮发,何洪金.畅脉乐通过调控 PPAR 信号通路对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性相关蛋白影响J.临床医学进展,2023,13(10):16670-16677.
2、DOI:10.12677/acm.2023.13102333 畅脉乐通过调控畅脉乐通过调控PPAR信号通路对动脉粥样硬信号通路对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性相关蛋白影响块稳定性相关蛋白影响 黄松雄黄松雄1*,张玉琴,张玉琴2#,刘巧婷,刘巧婷1,李,李 志志1,吴帮发,吴帮发1,何洪金,何洪金1 1福建中医药大学附属第二人民医院健康管理中心,福建 福州 2福建中医药大学附属第二人民医院影像科,福建 福州 收稿日期:2023年9月23日;录用日期:2023年10月17日;发布日期:2023年10月23日 摘摘 要要 目的:通过
3、观察畅脉乐对过氧化物酶体增殖物激活受体目的:通过观察畅脉乐对过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路的调控,研究畅脉乐对动脉粥信号通路的调控,研究畅脉乐对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性相关蛋白的影响。方法样硬化大鼠巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性相关蛋白的影响。方法:将将30只大鼠随机只大鼠随机分为对照组分为对照组(n=10)、模型组、模型组(n=10)及畅脉乐组及畅脉乐组(n=10);除对照组外,模型组及畅脉乐组大鼠均以;除对照组外,模型组及畅脉乐组大鼠均以高脂饮食为诱变剂建立动脉粥样硬化模型。畅脉乐组按高脂饮食为诱变剂建立动脉粥样硬化模型。畅脉乐
4、组按5 mg/(kgd)剂量服用畅脉乐胶囊,对照组和模剂量服用畅脉乐胶囊,对照组和模型组予以相应饲料喂养,干预周期均为型组予以相应饲料喂养,干预周期均为8周。周。8周后采血和采集血管组织,采用透射电镜观察巨噬细胞周后采血和采集血管组织,采用透射电镜观察巨噬细胞中自噬小体数量,蛋白免疫印迹法检测巨噬细胞中酶联相关轻链蛋白中自噬小体数量,蛋白免疫印迹法检测巨噬细胞中酶联相关轻链蛋白3(LC3)、选择性自噬接头蛋白、选择性自噬接头蛋白p62(p62)的表达水平,免疫荧光吸附法检测大鼠血清血管性血友病因子的表达水平,免疫荧光吸附法检测大鼠血清血管性血友病因子(vWF)、一氧化氮、一氧化氮(NO)、内皮
5、素、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮合酶、一氧化氮合酶(eNOS)含量,含量,Western blot法检测动脉斑块稳定性相关蛋白法检测动脉斑块稳定性相关蛋白基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP抑制剂抑制剂(TIMP)-1及及PPAR信号通路信号通路PPAR/肝脏肝脏X受体受体/ATP结合盒转运体结合盒转运体G1(PPAR/LXR/ABCG1)相关蛋白表达水平,相关蛋白表达水平,RT-PCR测定细胞内测定细胞内PPAR、LXR、ABCG1的的mRNA水平。结果水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠自噬小体数量有所减少,与对照组比较,模型组大鼠自噬小体数量有所减少,LC3
6、II/I表达水平明显下降,表达水平明显下降,p62表表达水平明显上升达水平明显上升(P 0.05);MMP-2、MMP-9表达水平明显上升,表达水平明显上升,TIMP-1表达水平明显下降表达水平明显下降(P 0.05);PPAR、LXR、ABCG1蛋白及蛋白及mRNA表达水平明显下降表达水平明显下降(P 0.05)。与模型组比较,畅脉乐组大。与模型组比较,畅脉乐组大鼠自鼠自噬小体数量增加,噬小体数量增加,LC3II/I表达水平明显上升,表达水平明显上升,p62表达水平明显下降表达水平明显下降(P 0.05);MMP-2、MMP-9表表达水平明显下降,达水平明显下降,TIMP-1表达水平明显上升
7、表达水平明显上升(P 0.05);PPAR、LXR、ABCG1蛋白及蛋白及mRNA表达水表达水平明显上升平明显上升(P 0.05)。结论。结论:畅脉乐能够通过调控畅脉乐能够通过调控PPAR信号通路,上调动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞信号通路,上调动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞自噬水平,改善血管内皮功能,提高动脉斑块的稳定性,进而起到抗脉粥样硬化的作用。自噬水平,改善血管内皮功能,提高动脉斑块的稳定性,进而起到抗脉粥样硬化的作用。关键词关键词 畅脉乐,动脉粥样硬化,过氧化物酶体增殖物激活受体,细胞自噬,血管内皮,斑块稳定性畅脉乐,动脉粥样硬化,过氧化物酶体增殖物激活受体,细胞自噬,血管内皮,斑块稳定性 *第
8、一作者。#通讯作者。黄松雄 等 DOI:10.12677/acm.2023.13102333 16671 临床医学进展 Changmaile Affects Macrophage Autophagy,Vascular Endothelial Function and Arterial Plaque Stability-Related Proteins in Atherosclerotic Rats by Regulating the PPAR Signaling Pathway Songxiong Huang1*,Yuqin Zhang2#,Qiaoting Liu1,Zhi Li1,Bang
9、fa Wu1,Hongjin He1 1Health Management Center,Second Peoples Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou Fujian 2Department of Imaging,Second Peoples Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou Fujian Received:Sep.23rd,2023;accep
10、ted:Oct.17th,2023;published:Oct.23rd,2023 Abstract Purpose:By observing the regulation of Changmaile on the peroxisome proliferator-activated re-ceptor(PPAR)signaling pathway,study the effect of Changmaile on macrophage autophagy,vas-cular endothelial function and arterial plaque stability-related p
11、roteins in atherosclerotic rats.Methods:30 rats were randomly divided into control group(n=10),model group(n=10)and Changmaile group(n=10);except for the control group,rats in the model group and Changmaile group Atherosclerosis models were established using high-fat diet as mutagen.The Changmaile g
12、roup took Changmaile capsules at a dose of 5 mg/(kgd),and the control group and model group were fed corresponding feeds.The intervention period was 8 weeks.After 8 weeks,blood and vascular tissues were collected.Transmission electron microscopy was used to observe the num-ber of autophagosomes in m
13、acrophages.Western blotting was used to detect enzyme-linked light chain protein 3(LC3)and selective autophagy adapter protein p62 expression level in macro-phages.Immunofluorescence adsorption method was used to detect rat serum von Willebrand factor(vWF),nitric oxide(NO),endothelin-1(ET-1),nitric
14、oxide synthase(eNOS)content,Western blot method was used to detect arterial plaque stability-related proteins matrix metalloprotei-nase(MMP)-2,MMP-9,MMP inhibitor(TIMP)-1 and PPAR signaling pathway PPAR/liver X re-ceptor/ATP Binding cassette transporter G1(PPAR/LXR/ABCG1)related protein expression l
15、evels,and RT-PCR measured the intracellular mRNA levels of PPAR,LXR,and ABCG1.Results:Compared with the control group,the number of autophagosomes in the model group decreased,the expression level of LC3II/I decreased significantly,and the expression level of p62 increased significantly(P 0.05);the
16、expression levels of MMP-2 and MMP-9 increased significantly.The expression level of TIMP-1 decreased significantly(P 0.05);the expression levels of PPAR,LXR,ABCG1 protein and mRNA decreased significantly(P 0.05).Compared with the model group,the number of autophagosomes in the Changmaile group incr
17、eased,the expression level of LC3II/I increased significantly,and the expression level of p62 decreased significantly(P 0.05);the expression levels of MMP-2 and MMP-9 decreased significantly,and the expression level of TIMP-1 expression level increased significantly(P 0.05);PPAR,LXR,ABCG1 protein an
18、d mRNA expression levels increased significantly(P 0.05).Conclusion:Changmaile can upregulate the autophagy level of macrophages in atherosclerotic rats,improve vascular endothelial function,increase the stability of arterial plaques,and play an anti-atherosclerotic role by regulating the PPAR signa
19、ling pathway.黄松雄 等 DOI:10.12677/acm.2023.13102333 16672 临床医学进展 Keywords Changmaile,Atherosclerosis,Peroxisome Proliferator-Activated Receptor,Autophagy,Vascular Endothelium,Plaque Stability Copyright 2023 by author(s)and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attributio
20、n International License(CC BY 4.0).http:/creativecommons.org/licenses/by/4.0/1.引言引言 相关研究报道称,目前我国现存的冠心病患者有 1139 万例,缺血性脑卒中患者有 1300 万例,心脑血管疾病已发展成我国致残和致死的最主要原因,给患者家庭和社会均带来了沉重的负担1。而作为诸多心脑血管疾病的病理基础,动脉粥样硬化主要累及机体血管内膜及中膜,是一种慢性血管性疾病。探索动脉粥样硬化的发病机制及积极有效的治疗方案对预防心脑血管疾病产生、减少其进一步引发的致残及致死情况具有重要意义。过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR
21、)/肝脏 X 受体 (LXR)/ATP 结合盒转运体 G1(ABCG1)作为 PPAR 经典信号通路,已被证实参与调控脂质代谢、免疫应答、细胞自噬等维持机体内环境稳态的重要生物学行为,在动脉粥样硬化的发生和发展过程中扮演重要角色2 3。畅脉乐胶囊是陈美华教授通过经年累计的临床经验所研制出的中药制剂,具有祛风通络和滋肾活血的功效,已被证实在动脉粥样硬化患者中的临床疗效确切4。但明确有关畅脉乐治疗动脉粥样硬化的基础研究较少,相关作用机制尚不明确。因此,本研究将从 PPAR/LXR/ABCG1 信号通路调控巨噬细胞自噬、血管内皮功能及动脉斑块稳定性入手,探讨畅脉乐治疗动脉粥样硬化大鼠的作用机制。2.
22、材料与方法材料与方法 2.1.实验动物与细胞实验动物与细胞 购于上海斯莱克实验动物有限公司的 SPF 级健康 SD 雄性大鼠 30 只,周龄 67 周,体质量 200220 g,许可证号为 SCXK(沪)20170016。巨噬细胞系 RAW264.7 细胞购置 ATCC 细胞库(中国科学院)。2.2.主要试剂与仪器主要试剂与仪器 畅脉乐胶囊(规格 0.5 g/粒,批号 20211224)由福建中医药大学附属第二人民医院制剂室提供,血管性血友病因子(vWF)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮合酶(eNOS)测定试剂盒(上海酶联生物科技有限公司),酶联相关轻链蛋白 3(LC3)、
23、选择性自噬接头蛋白 p62(p62)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP 抑制剂(TIMP)-1、PPAR/肝脏 X 受体/ATP 结合盒转运体 G1(PPAR/LXR/ABCG1)抗体(英国 Abcam 公司),全自动荧光定量 PCR 仪(美国 ABI 公司)。2.3.动物实验动物实验 2.3.1.模型制备、分组及给药模型制备、分组及给药 30 只大鼠适应性喂养 1 周后,随机选取 20 只大鼠用 30 g/kg/d 剂量的高脂饲料(Van Heek)持续喂养12 周以制备动脉粥样硬化模型,模型制备完成后分为模型组和畅脉乐组,每组各 10 只;剩余 10 只大鼠用相同剂量的普通
24、饲料持续喂养 12 周,归为对照组。取 15 g 畅脉乐胶囊内容物加蒸馏水溶解后定容至250 mL,得到药物浓度为 60 mg/mL 的药液。畅脉乐组大鼠以 10 mL/kg/d 的药液剂量灌胃,连续灌胃 4Open AccessOpen Access黄松雄 等 DOI:10.12677/acm.2023.13102333 16673 临床医学进展 周;对照组和模型组大鼠均以等剂量生理盐水灌胃,连续灌胃 4 周。2.3.2.动物血清和标本提取动物血清和标本提取 采取摘除大鼠眼球取血法收集外周血,并以离心半径 9 cm、转速 3500 r/min 高速离心 10 min 后,提取上层血清低温保存
25、待测。3 组大鼠采血后的进行解剖,对主动脉组织和心脏进行剥离,沿主动脉根部稍上方处剪开,将适量主动脉组织进行低温下保存待用,并将余下主动脉组织保存在装有固定液(Gluta)的离心管内,用于巨噬细胞自噬体观察自噬体的数量及。2.3.3.免疫荧光吸附法检测血清免疫荧光吸附法检测血清 vWF、NO、ET-1、eNOS 水平水平 将提前备好的各组大鼠血清解冻后,于室温下采用免疫荧光吸附法检测 vWF、NO、ET-1 及 eNOS含量,操作严格按照试剂盒说明书进行。2.3.4.蛋白免疫印迹法检测蛋白免疫印迹法检测 MMP-2、MMP-9、TIMP-1、PPAR、LXR、ABCG1 蛋白表达水平蛋白表达水
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