HPLC法同时测定不同品种、产地、部位松树中莽草酸的含量.pdf
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1、China Forest Products Industry林产工业,2023,60(09):39-43HPLC法同时测定不同品种、产地、部位松树中莽草酸的含量刘东彦1 石晓峰1*王 信2 王新娣1 马趣环1 张家旭2(1.甘肃省医学科学研究院,甘肃 兰州 730050;2.甘肃中医药大学,甘肃 兰州 730000)摘 要:研究采用HPLC法同时测定不同品种、产地、部位松树中莽草酸的含量,以期为开发莽草酸资源提供参考。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm 4.6 mm,5 m),流动相为甲醇/0.1%磷酸水溶液(体积比为1090),检测波长为 217 nm,柱
2、温为30。采用直观分析结合聚类分析对不同品种、产地、部位松树中莽草酸含量的差异性进行统计分析。结果表明:莽草酸的线性关系良好(r0.999 5),平均加样回收率为100.4%(n=6),RSD为1.71%。6种松树中的莽草酸含量由高到低依次为雪松、华山松、白皮松、油松、樟子松、落叶松。其中,天水雪松松针中的莽草酸含量最高,达31.47 mg/g。通过聚类分析发现,6种松树中的莽草酸可划分为3类。关键词:松针;松枝;莽草酸;含量测定;聚类分析中图分类号:TS6;TS396 文献标识码:A 文章编号:1001-5299(2023)09-0039-05DOI:10.19531/j.issn1001-
3、5299.202309007Simultaneous Determination of the Content of Shikimic Acid in Pine Trees from Different Varieties,Origins,and Parts by HPLCLIU Dong-yan1 SHI Xiao-feng1 WANG Xin2 WANG Xin-di1 MA Qu-huan1 ZHANG Jia-xu2(1.Gansu Academy of Medical Science,Lanzhou 730050,Gansu,P.R.China;2.Gansu University
4、of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,Gansu,P.R.China)Abstract:In this study,HPLC was used to determine the content of shikimic acid in pine trees from different varieties,origins,and parts,in order to provide reference for its further development and application.HPLC test was performed on a 30 Agilent
5、 Eclipse Plus C18 column(250 mm 4.6 mm,5 m),with the mobile phase comprising of methanol/0.1%phosphoric acid solution(1090,V/V),and the detection wavelength was set at 217 nm.The differences in the content of shikimic acid were analyzed by visual analysis and cluster analysis methods.The results sho
6、wed that shikimic acid was linearly good(r0.999 5),with the average recovery rate of 100.4%(n6)and the RSD of 1.71%.The content of shikimic acid was in six pine trees from high to low was Cedrus deodara(Roxb)G.Don,Pinus armandi Franch.,Pinus bungeana Zucc.ex Endl.,Pinus tabulaeformis Carr.,Larix gme
7、linii(Rupr.)Kuzen.,and P.sylvestris var.mongolica Litv.,in which C.deodara pine needles from Tianshui had the highest content at 31.47 mg/g.The shikimic acid in six pine trees can be divided into three categories by cluster analysis.Key words:Pine needles;Pine branches;Shikimic acid;Content determin
8、ation;Cluster analysis全世界松科植物共有10个属230余种,我国松树有10个属120余种,可供药用的达13种。我国南方有丰富的马尾松(Pinus massoniana Lamb.)、油松(P.abulacformis Carr.)、刺松(Juniperus formosana Hayata)、云南松(P.yunnaenis French.)、湿地松(P.elliottii)、华山松(P.armandi Franch.)等,北方有红松(P.karaiens Sieb et Zucc.)、白皮松(Pinus bungeana Zucc.ex Endl).、黑松(P.thunb
9、ergii Purl.)、雪松(Cedrus deodara(Roxb)G.Don)、落叶松(Larix gmelinii(Rupr.)Kuzen.)、樟子松(P.sylvestris var.mongolica Litv.)等1。基金项目:甘肃省科技支撑计划项目(1204FKCA152);甘肃省中医药重点科研项目(GZKZ-2020-6);2019年甘肃省省级引导科技创新发展专项资金(17)作者简介:刘东彦,女,副研究员,研究方向为中药化学及中药质量标准E-mail:*通讯作者:石晓峰,男,教授,研究方向为中药化学及中药制剂研究E-mail:收稿日期:2023-03-13林 产 工 业40第
10、60卷松树的利用价值很高2-5。课题组前期通过对7种松柏科植物的嫩枝、松针及雪松不同采集期、不同部位中莽草酸的含量测定,发现4月和5月份采集雪松松针中莽草酸的含量较高,嫩枝次之,其他部位含量较低6-7,并针对其松针中莽草酸的开发进行了大量研究8-11,建立了水提醇沉柱层析重结晶提取法,可获得纯度达95%以上的莽草酸。而莽草酸是抗病毒药物的中间体,主要应用于磷酸奥司他韦的合成12。鉴于此,本研究收集甘肃产(兰州和天水)雪松、白皮松、油松、华山松、樟子松及落叶松6种松树45月份的松针和嫩枝,测定其中的莽草酸含量,筛选出莽草酸含量高的松树部位,用于后续制备莽草酸的原料,为莽草酸的资源开发及松树的有效
11、利用奠定基础。1 材料与方法1.1 试验材料莽草酸(批号MUST-14110807,纯度97.19%),购自成都曼斯特生物科技有限公司;甲醇为色谱纯;磷酸等其余试剂均为分析纯。考察甘肃产松树品种13-14,主要有雪松、油松、华山松、白皮松、樟子松和落叶松六大品种。参考课题组对雪松的研究,笔者选择兰州和天水两大城市,采集同一地点、同一时间6种松树。兰州雪松、白皮松、油松、华山松、樟子松及落叶松6种松树于2021年4月19日采自甘肃省兰州市植物园;天水雪松、白皮松、油松、华山松、樟子松及落叶松6种松树于2021年5月8号采自甘肃省天水市小陇山林业研究院。经甘肃省医学科学研究院鉴定其品种,阴干后分别
12、收集松针和嫩枝,粉碎后过药典二号筛。样品信息如表1所示。1.2 试验仪器高效液相色谱仪(Agilent 1260),美国安捷伦公司;超声波提取仪(SK3310LHC),上海科导超声仪器有限公司;万分之一分析天平(AE260),瑞士Mettle公司;高速多功能粉碎机(CX-100),上海市晟喜制药机械有限公司;艾科浦超纯水机(AWL-0501-M),重庆颐样企业发展有限公司。1.3 试验方法1.3.1 色谱条件色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm 4.6 mm,5 m),流动相为甲醇/0.1%磷酸水溶液(1090,体积比),检测波长为217 nm,柱温为30,流
13、速为1 mL/min,进样量为20 L,理论板数按莽草酸峰计算应不低于6 000。1.3.2 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥36 h的莽草酸对照品10.0 mg,置于50 mL的容量瓶中,加纯净水溶解并定容,配制成浓度为0.2 mg/mL的莽草酸对照品储备液。精密吸取莽草酸对照品储备液3 mL,置于10 mL的容量瓶中,加纯净水定容,配制成浓度为60 g/mL的莽草酸对照品溶液。1.3.3 供试品溶液的制备精密称取S1号(天水雪松松针)样品约0.2 g,置于25 mL的具塞锥形瓶中,精密加入纯净水20 mL,称取重量,浸泡10 min,超声处理40 min(温度为50,功率为40 W
14、)。待冷却后再次称取重量,并用纯净水补足减失的重量,摇匀过滤后,吸取续滤液1 mL,置于25 mL的容量瓶中,加纯净水定容并摇匀,使用0.45 m的滤膜进行过滤,得到样品。1.4 方法学考察1.4.1 线性关系的考察精密吸取浓度为60 g/mL的莽草酸对照品溶液,分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,置于1 mL编号品 种产地部位S1雪 松天水松针S2白 皮 松天水松针S3油 松天水松针S4华 山 松天水松针S5樟 子 松天水松针S6落 叶 松天水松针S7雪 松兰州松针S8白 皮 松兰州松针S9油 松兰州松针S10华 山 松兰州松针S11樟 子 松兰州松针S12
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