HPLC校正因子法测定尼可地尔片的有关物质.pdf
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1、808月第37 卷第7 期中国药事2023年HPLC校正因子法测定尼可地尔片的有关物质朱莉娜-2,吴兆伟”,吴斌”,王琳,杜凯,孙毅,张喆,胡琴,高晓燕(1.北京中医药大学中药学院,北京10 2 48 8;2.北京市药品检验研究院,国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室,中药成分分析与生物评价北京市重点实验室,北京10 2 2 0 6)摘要目的:建立HPLC校正因子法测定尼可地尔片的有关物质。方法:采用HPLC方法,色谱柱:Atlantis T3C1s(2 50 m m 4.6 m m,5m);流动相:以三氟乙酸-三乙胺-四氢呋喃-水(3:5:3:9 8 9)为流动相A,三氟乙酸三乙胺四
2、氢呋喃水(3:5:2 0:9 7 2)为流动相B梯度洗脱;流速:1.2 mLmin-l;柱温:2 5;检测波长:2 6 2 nm。结果:各杂质分离良好,且在2 50gmL-1浓度范围内,r=1.0000,线性良好。测定了杂质AF的校正因子分别为0.6 7、0.7 6、1.40、1.45、0.8 2、1.2 6。高、中、低3个浓度的平均回收率为9 7.5%10 3.0%,回收率相对标准偏差(RSD)小于3.3%。结论:本方法简便快速准确,可用于尼可地尔片的质量控制。关键词:尼可地尔;有关物质;校正因子;高效液相色谱法;质量控制中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:10 0 2-7 7 7
3、7(2 0 2 3)0 7-0 8 0 8-0 9doi:10.16153/j.1002-7777.2023.07.010Determination of Related Substances in Nicorandil Tablets by HPLC CalibrationFactor MethodZhu Lina2,Wu Zhaowei?,Wu Bin,Wang Lin,Du Kai?,Sun Yi?,Zhang Zhe,Hu Qin,Gao Xiaoyan(1.School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese M
4、edicine,Beijing 102488,China;2.BeijingInstitute for Drug Control,NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs,Beijing KeyLaboratory of Analysis and Evaluation on Chinese Medicine,Beijing 102206,China)Abstract Objective:To establish HPLC calibration factor method for the determina
5、tion of related substances inNicorandil tablets.Methods:HPLC method was used with chromatographic column of Atlantis T3 Cis(250 mm 4.6 mm,5 m).Trifluoroacetic acid-triethylamine-tetrahydrofuran-water(3:5:3:989)was used as mobilephase A,and trifluoroacetic acid-triethylamine-tetrahydrofuran-water(3:5
6、:20:972)was used as mobilephase B for gradient elution.The flow rate was 1.2 mL-min with column temperature at 25 C.The detectionwavelength was 262 nm.Results:Nicorandil and its impurities were well separated by the method.Good linearitywas obtained with correlation coefficients of 1.0000 for all th
7、e impurities in the range of 2-50 g:mL-l.Thecalibration factors of nicorandil related substances A,B,C,D,E and F were 0.67,0.76,1.40,1.45,0.82 and 1.26,respectively.The average recoveries among the low,middle and high concentrations were from 97.5%to 103.0%and the relative standard deviations(RSD)we
8、re lower than 3.3%.Conclusion:The method is simple,rapid andaccurate,and can be used for the quality control of nicorandil tablets.Keywords:nicorandil;related substances;calibration factor;HPLC;quality control作者简介:朱莉娜Tel:(0 10)52 7 7 9 6 2 2;E-ma i l:z h u l i n a 159 12 6.c o m通信作者:高晓燕Tel:(0 10)8 4
9、7 38 6 18;E-ma i l:g a o x i a o y a n b u c m.e d u.c nzhgyshCHINESEPHARMACEUTICALAFFAIRS中国药事809月第3 7 卷第7 期中国药事2023年尼可地尔(Nicorandil),化学名为N-(2-羟乙基)-烟酰胺硝酸脂,属硝酸酯类化合物,是一种ATP敏感性钾通道开放剂,临床上主要用于冠心病、心绞痛的治疗1-3。国内尼可地尔片现行标准为地标升国标WS-10001-(H D-0 151)-2 0 0 2 4,未收载有关物质检查项,且其含量测定方法为紫外E值法,专属性较差,造成国内长期对尼可地尔片的有关物质情况
10、了解不深入。英国药典收载的尼可地尔片质量标准中,采用HPLC法测定有关物质,采用此方法测定进口的尼可地尔片样品,发现尼可地尔与相关杂质峰分离度均大于1.5,分离度良好。但采用该方法对国内的尼可地尔片样品进行检测后发现,样品溶液中尼可地尔与杂质峰的分离度以及未知杂质峰之间的分离度均小于1.5,证明英国药典的方法无法有效分离国内尼可地尔片的有关物质5-9 。为有效控制尼可地尔片质量,本文建立了一个能够对国内样品中杂质进行有效分离并准确定量的有关物质检查方法。1仪器与试药1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪(岛津公司);12 0 0高效液相色谱仪(Agilent公司);2 6 9 0 高效液相色谱仪
11、(Waters公司);Milli-Q纯水机(MerckMillipore公司);电子天平(MettlerToledo公司,XA205);Se v e n Co m p a c t 型pH计。1.2试药三氟乙酸、三乙胺、四氢呋喃均为色谱纯,水为自制纯化水,尼可地尔对照品(中国食品药品检定研究院,批号:10 10 7 9-2 0 10 0 1),杂质A对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100434-201603),杂质B对照品(ChugaiPharmManufacturingCo.Ltd,批号:S2014K1),杂质C对照品(Chugai Pharm Manufacturing Co.Ltd,
12、批号:S2013G1),杂质D对照品(ChugaiPharmManufacturingCo.Ltd,批号:S201101),杂质E对照品(Chugai Pharm Manufacturing Co.Ltd,批号:S2014K1),杂质F对照品(TLC公司,批号:1934-052A1),尼可地尔片样品(2 家生产企业共88批次,规格均为5mg)均来源于国家评价性抽验及辅料(企业提供,批号:2 0 16 10 0 8 7)2方法与结果2.1溶液制备2.1.1对照品溶液取尼可地尔对照品2 0 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,用稀释液用三乙胺调节pH至5.0 的三氟乙酸-三乙胺-四氢呋喃-水(3:
13、5:3:9 8 9)溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1mL,置10 0 mL量瓶中,用稀释液稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。2.1.2供试品溶液取本品细粉适量(约相当于尼可地尔2 0mg),精密称定,置10 mL量瓶中,用稀释液振摇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。2.2色谱条件与测定方法采用AtlantisT3Ci:色谱柱(2 50 mm4.6mm,5m),以三氟乙酸-三乙胺-四氢喃-水(3:5:3:9 8 9)为流动相A,以三氟乙酸-三乙胺-四氢呋喃-水(3:5:2 0:9 7 2)为流动相B,按表1进行梯度洗脱,流速1.2 mLmin,柱温2 5,检测波长2 6 2
14、 nm。精密量取供试品溶液、对照品溶液各10 L,分别注人液相色谱仪,记录色谱图(尼可地尔与杂质典型分离色谱图见图1)。供试品溶液色谱图中如有已知杂质峰,以对照品溶液中尼可地尔峰面积为对照,杂质峰面积乘以相应校正因子后按外标法计算。表1尼可地尔片有关物质测定梯度洗脱条件时间/min流动相A/%流动相B/%0.01000221000540100650100661000751000zhgysh中国药事CHINESEPHARMACEUTICALAFFAIRS810月第3 7 卷卷第7 期中国药事2023年1009018070nvu/V60235034030205610140-1010255075 t
15、/min1.杂质A;2.杂质B;3.杂质C;4.杂质D;5.杂质E;6.尼可地尔;7.杂质F。图1尼可地尔与杂质典型分离色谱图2.3方法学验证2.3.1专属性考察取尼可地尔片细粉适量6 份(各约相当于尼可地尔2 0 mg),置10 mL量瓶中,分别进行酸破坏(加1molL-盐酸溶液2 mL,室温放置2 h,用1molL-氢氧化钠溶液调节pH至中性,加稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过),碱破坏(加0.1molL-氢氧化钠溶液2 mL,室温放置15min,用0.1molL-盐酸溶液调节pH至中性,加稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过),氧化破坏(加30%过氧化氢溶液2 mL,室温放置2 h,加稀释液稀释至刻
16、度,摇匀,滤过),高温破坏(6 0 加热3h,加稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过),高湿破坏(置相对湿度9 2.5%的恒湿密闭容器中,放置5d,加稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过),光照破坏(置45001x的光照强度下光照5d,加稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过)。另取稀释液作为空白溶液。分别取上述溶液,按“2.2”项下色谱条件进样。结果显示,尼可地尔片经酸、碱、氧化、高温、高湿、光照破坏后,均有降解产物峰,但降解产物均能和主峰良好分离,不影响测定,空白溶剂对检测无干扰,说明系统具有良好的专属性。2.3.2校正因子测定及线性取尼可地尔和杂质A杂质F对照品,加稀释液分别配制成2 50 gmL-l(相当于供试
17、品溶液浓度的0.1%2.5%)7 个浓度的标准曲线溶液。各取10 L,注人液相色谱仪,在2 6 2 nm波长下,分别对尼可地尔和杂质A杂质F以浓度对峰面积进行线性回归,以尼可地尔线性斜率与各杂质线性斜率的比值计算杂质的校正因子,取不同批号的3根AtlantisT3(2 50 m m 4.6 m m,5m)色谱柱的平均值,详见表2。表2杂质校正因子结果杂质名称尼可地尔线性方程杂质线性方程校正因子平均值杂质Ay=11314x-2858.7y=16619x+1499.90.681r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y=16265x+1629.20.6770.67 0.007
18、r=1.0000r=1.0000y=10911x+2842.4y=16354x+785.400.667r=1.0000r=1.0000杂质By=11314x-2858.7y=14860 x+1327.50.761r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y=14580 x+1136.30.7550.76 0.004r=1.0000r=1.0000y=10911x+2842.4y=14480 x+522.330.754r=1.0000r=1.0000zhgyshCHINESEPHARMACEUTICALAFFAIRS中国药事811月第37 卷第7 期中国药事2023年续表2杂
19、质名称尼可地尔线性方程杂质线性方程校正因子平均值杂质Cy=11314x-2858.7y=8087.1x+440.761.399r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y=7837.0 x+345.261.4041.40 0.011r=1.0000r=1.0000y=10911x+2842.4y=7884.7x+6.93001.384r=1.0000r=1.0000杂质Dy=11314x-2858.7y=7657.2x-1177.81.478r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y=7680.7x-1463.11.4331.45 0.022r=1.0
20、000r=1.0000y=10911x+2842.4y=7517.8x-1352.41.451r=1.0000r=1.0000杂质Ey=11314x-2858.7y=13767x-1977.40.822r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y=13411x-1644.80.8210.82 0.001r=1.0000r=1.0000y=10911x+2842.4y=13293x-1889.50.821r=1.0000r=1.0000杂质Fy=11314x-2858.7y=8938.7x-593.101.266r=1.0000r=1.0000y=11006x-116.92y
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