miR-150靶向调控IGF2BP2对肝癌恶性表型的影响机制.pdf
《miR-150靶向调控IGF2BP2对肝癌恶性表型的影响机制.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《miR-150靶向调控IGF2BP2对肝癌恶性表型的影响机制.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、2023 年10 月 第 44 卷 第 5 期 首 都 医 科 大 学 学 报Journal of Capital Medical University Oct.2023Vol.44 No.5基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金青年项目(2021D01C351),新疆医科大学大学生创新创业基金项目(CX2021010),省部重点中亚高发病成因与防治国家重点实验室青年项目(SKL-HIDCA-2019-33),省部重点中亚高发病成因与防治国家重点实验室面上项目(SKL-HIDCA-2020-SC5)。This study was supported by Xinjiang Natural Sc
2、ience Foundation Youth Project(2021D01C351),Xinjiang Medical University Student Innovation Venture Fund Project(CX2021010),Young Project of State Key Laboratory of Pathgenesis,Prevention and Treatment of High Incidence Diseases in Central Asia(SKL-HIDCA-2019-33),Project of State Key Laboratory of Pa
3、thgenesis,Prevention and Treatment of High Incidence Diseases in Central Asia(SKL-HIDCA-2020-SC5).Corresponding author,E-mail:sasa870716 网络出版时间:2023-10-19 1538 网络出版地址:https:/ 靶向调控 IGF2BP2 对肝癌恶性表型的影响机制谭宇博 苏卜伊努尔吐尔洪 黄 静 张婷婷 刘俊杰 沙娅玛哈提(新疆医科大学第一附属医院肿瘤中心,省部重点中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐 830054)【摘要】目的 本研究旨在阐明 miR
4、-150 在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用和靶点。方法 采用热图分析方法,从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas)数据库下载的 6 组 HCC 组织与邻近肝组织之间差异表达的 miRNA。采用实时定量聚合酶链反应检测 miR-150 在 HCC 组织和细胞系中的表达;采用侵袭小室试验评估 HCC 细胞的增殖、侵袭和迁移潜能。此外,利用 TargetScan 软件用于预测 miR-150 的潜在靶标,并通过蛋白印迹(Western blotting)和荧光素酶法测定 miR-150 与其靶基因的关系。结果 通过热图分析法,发
5、现在 HCC 组织中有 31 个 miRNA 表达异常,其中 miR-150 表达差异最为显著,且与患者预后密切相关。细胞实验上,高表达 miR-150 可通过调节胰岛素样生长因子 2-mRNA 结合蛋白 2(recombinant insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达显著降低人肝癌细胞株 SMMC-7721 和 HepG2 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-150 通过调控 IGF2BP2 抑制 HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,为 HCC 提供了新的治疗靶点。【关键词】肝癌;miR-150;IG
6、F2BP2;侵袭转移【中图分类号】R735.7 【文献标识码】AThe mechanism of miR-150 targeted regulation of IGF2BP2 on the malignant phenotype of liver cancerTan Yubo,Suboyinuer Tuerhong,Huang Jing,Zhang Tingting,Liu Junjie,Shaya Mahati(Department of Tumor Center,First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,State K
7、ey Laboratory of Pathgenesis,Prevention and Treatment of High Incidence Diseases in Central Asia,Urumqi 830054,China)【Abstract】Objective To elucidate the impacts and targets of miR-150 in hepatocellular carcinoma(HCC).MethodsHeatmap analysis was utilized for screening the differentially expressed mi
8、RNAs between six sets of HCC tissues and adjacent liver tissues downloaded from The Cancer Genome Atlas database.Quantitative real-time polymerase chain reaction was employed for assessing miR-150 expression in HCC tissues and cell lines.Then,cell counting Kit-8 assay and Transwell assay separately
9、were conducted to evaluate the proliferation,invasion and migration potential of HCC cells.Besides,TargetScan software was utilized for predicting the potential targets of miR-150.Moreover,the relationship between miR-150 and its target genes were determined by Western blotting and luciferase report
10、er assay.ResultsWe identified 31 deregulated miRNAs(including the most significantly down-regulated miR-150)in HCC tissues.MiR-150 expression was significantly reduced in HCC tissues and cell lines.Highly expressed miR-150 significantly increased the 5-year survival rate of HCC patients.Meanwhile,mi
11、R-150 induced a significant reduction of the cell proliferation,migration,and invasion potentials of human hepatocarcinoma cells(SMMC-7721and HepG2).We found miR-150 directly target recombinant insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2(IGF2BP2)and decrease human phosphorylation phosphotyli
12、nosital 3-kinase and protein kinase B signal(p-PI3K/Akt)pathway.ConclusionsThese results suggested that miR-150 restrained proliferation,migration,and invasion of HCC cells by regulating IGF2BP2,providing a new therapeutic target for HCC.【Key words】hepatocellular carcinoma;miR-150;IGF2BP2;migration
13、and invasion 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一1,只有 10%20%的患者可通过手术治愈,其他患者就诊时多为晚期。我国是肝癌大国,全世界每年约有一半的肝癌死亡病例发生在中国2,寻找有效的分子靶点对开发有效的治疗策略至关重要。第 5 期谭宇博等:miR-150 靶向调控 IGF2BP2 对肝癌恶性表型的影响机制miRNA 是一组长度为18 22 个核苷酸的非编码RNA,通过直接与肿瘤相关基因的 3-非翻译区(3-UTR)相互作用并调控其表达,对肿瘤转化起着至关重要的作用3。有研究4报道,miRNA 如 miR-124、mi
14、R-331、miR-29 等可作为癌基因或抑癌基因在 HCC 细胞分化、增殖、转移和凋亡中发挥重要作用。然而,miR-NA 调节 HCC 生物学行为的分子机制仍不清楚。研究5表明,miR-150 在不同类型的人类癌症中异常表达,包括结直肠癌、鳞状细胞癌和 HCC,但 miR-150 在HCC 中的功能和分子机制有待进一步研究。为了识别 HCC 中表达异常的 miRNA,本文研究对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库获得的 HCC 标本的 miR-Seq 数据进行分析,发现miR-150 表达下降最为显著,继而研究 miR-150 在 HCC组织和细胞
15、系中的表达及其与 HCC 患者 5 年生存率的相关性,并进一步确定 miR-150 的分子功能和机制。1 材料与方法1.1 TCGA 数据集 TCGA(http:/cancergenome.nih.gov)是本文中miR-Seq 数据主要来源。通过 TCGA 数据库共获得 282例标本,其中 50 例正常标本及 148 例早期肝癌标本和84 例晚期肝癌标本。通过 R 包对6 个配对的 HCC 样本的 miR-Seq 数据分析,获得热图,进一步分析232 例肝癌标本中 miR-150 表达水平与患者预后相关性。1.2 病例资料 37 例肝癌组织及邻近组织来源于新疆医科大学第一附属医院,患者标本于
16、术后 30 min 内取出,所有组织于术后立即保存于液氮中。所有样本由临床病理学家根据肿瘤大小、周围淋巴结受累情况以及远处转移情况,即 TNM 分期情况(T:tumor,N:node,M:metastasis)进行细胞培养和转染。与样本相关的患者临床信息经新疆医科大学第一附属医院审查委员会批准(伦理审批号:230306-109),所有参与者同意并签署知情同意书。1.3 细胞培养 人肝癌细胞系(LO2、HepG2 和 SMMC-7721)来源于中国科学院生化细胞所。在含有 10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(Gibco 公司,美国)的 DMEM(dulbe
17、ccos modified eagle medium)培养基中(Gibco 公司,美国),于 37 的 5%(体积分数)CO2培养箱(Thermo 公司,美国)中培养。用miR-150 模拟物(50 nmol/L)及其阴性对照(RiboBio公司,广州)处理 HepG2 和 SMMC-7721 细胞,并将细胞接种于 24 孔板(1104个细胞/孔)中培养。1.4 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quanti-tative polymerase chain reaction,RT-qPCR)使用 Trizol Reagent(Invitrogen 公司,Carlsbad,美国)提取
18、总 RNA,纯化 RNA,并采用分光光度计测定纯度。miR-150 的引物为 5-GCT CTC CCA ACC CTT GT-3(正向)和 5-TGC GTG TCG TGG AGT C-3(反向)。U6 的引物为 5-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3(正向)和5-ACG CTT CAC GAA TTT GCG T-3(反向),反应程序条件为:95 ,15 min、94 ,15 s、58 ,30 s、72 ,40 s;40 个循环。1.5 荧光素酶活性检测 通过 TargetScan 软件分析 miR-150 启动子区转录因子结合位点,推测调节胰岛素样生长因子 2-mR-NA
19、 结合蛋白 2(recombinant insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)结合位点为:5-UUG GAG-3,突变体结合位点为 5-CCA AUC G-3。1.6 蛋白印迹(Western blotting)采用 Western blotting 法检测 IGF2BP2 及磷脂酰肌醇激酶(human phosphorylation phosphotylinosital 3 kinase,p-PI3K)、蛋白激酶 B(protein kinase B,p-Akt)、外源性调节蛋白(extracellular r
20、egulated protein kinases,p-ERK)的蛋白表达水平,抗体均来自美国Cell Signaling Technology,Inc(CST)公司。用放射免疫沉淀试验缓冲液(radio immunoprecipitation assay buffer,RIPA)裂解细胞,并用二喹啉甲酸法(Bicin-choninic acid,BCA 法)测定各蛋白浓度。1.7 统计学方法 采用 SPSS 软件进行数据分析处理。正态分布的计量资料以均数标准差(xs)表示,两组均数比较采用 t检验。双侧检验,以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 TCGA 数据库分析结果 为了明确
21、表达异常的 miRNA,对 TCGA 数据结果进行分析。在 HCC 组织中发现 31 个表达异常的miRNA,其中 14 个下调 miRNA,17 个上调 miRNA,其中 miR-150 表达下降最为显著(图 1)。2.2 miR-150 在肝癌中的表达水平 早期肝癌及晚期肝癌组织中 miR-150 表达显著低于正常肝组织(P0.05)(图 2A)。进一步分析肝367首 都 医 科 大 学 学 报第 44 卷图 1 聚类分析热图Fig.1 The heatmap of hierarchical clustering analysisRed and green represent high v
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- miR 150 靶向 调控 IGF2BP2 肝癌 恶性 表型 影响 机制
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。