DB15∕T 3359-2024 绵羊体外胚胎生产技术规程(内蒙古自治区).pdf
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1、 ICS 65.020.30 CCS B 44 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 33592024 绵羊体外胚胎生产技术规程 Technical code on in vitro embryo production in sheep 2024-02-23 发布 2024-03-23 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 33592024 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC 19)归口。本文件起草单位:内蒙古农业大学、内蒙古赛诺种羊科技有限公
2、司。本文件主要起草人:张家新、陈大勇、程磊、张楠、仇春娟、宋宇琨、范利宏、包梅荣、龚璐、朱怡静。DB15/T 33592024 1 绵羊体外胚胎生产技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊体外胚胎生产过程中的卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养等内容。本文件适用于绵羊体外胚胎生产程序。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T 1571 羊胚胎移植技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。体外成熟 in vit
3、ro maturation(IVM)卵母细胞在体外恢复减数分裂并发育到第二次减数分裂中期(MII)这一过程,经历细胞核成熟和细胞质成熟。体外受精 in vitro fertilization(IVF)哺乳动物的精子和卵子置于适宜的培养条件下使之完成受精的一种技术。体外培养 in vitro culture(IVC)将受精卵置于适宜的培养条件下使其发育至囊胚期。4 体外胚胎生产培养液配制 采卵液、体外成熟培养液(IVM液)、受精液(IVF液)和胚胎发育液(IVC液)配方见附录A。5 操作前准备 DB15/T 33592024 2 打开实验室和超净工作台紫外灯,照射 20 min 后用酒精擦拭消毒
4、;关闭实验室紫外灯 30 min后,操作人员将双手清洗干净后,穿戴工作服、口罩、手套、帽子等,更换拖鞋进入实验室,并随手关闭实验室门;用 75%酒精喷洒消毒双手;实验室工作台、显微镜以及加热台面用酒精擦拭消毒,并且将加热台打开预热。6 卵母细胞体外成熟 准备工作 6.1.1 拣卵针 用酒精灯将采卵用玻璃管拉制成口径适宜的捡卵针,管口在火焰上烧圆钝。6.1.2 制作成熟液滴 实验开始前使用 35 mm 培养皿制作卵母细胞成熟液滴(100 L 成熟液滴,覆盖 3.5 mL 矿物油),并放入 5%二氧化碳培养箱内平衡 2 h 以上。检卵 采卵液于 37 恒温板上提前预热。将含有卵母细胞的采卵液置入
5、60 mm 的培养皿。在体式显微镜下从左到右、从上到下的顺序仔细挑选,将捡出的卵母细胞放置于盛有采卵液的 35 mm 培养皿中,用成熟液洗涤 3 次。7 体外成熟 将洗涤好的卵母细胞按 15 枚/100 L20 枚/100 L 液滴的密度,移入成熟液滴中,后放入二氧化碳培养箱培养 22 h24 h。培养条件:5%CO2、95%空气、38.6、饱和湿度。8 卵母细胞体外受精 准备工作 体外受精实验开始前,在 5%二氧化碳培养箱内,平衡受精液(IVF 液)2 h3 h;38.6 预热0.2%的透明质酸酶工作液。体外受精 8.2.1 精液选择 选择体外受精效果好的精液,并根据体外成熟卵母细胞的数量计
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