原发性肝癌患者血清miR-196b和miR-520f表达水平及其临床诊断价值分析.pdf
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1、47现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023原发性肝癌患者血清 miR-196b 和 miR-520f 表达水平 及其临床诊断价值分析齐锐,王何斌,李劲,杨茂辉,徐杰(攀枝花学院附属医院肝胆科,四川攀枝花 617000)摘要:目的探讨原发性肝癌(primary carcinoma of the liver)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-196b,微小核糖核酸(microRNA,miR)-520f 表达水平及其临床诊断价值。方法选择 2020 年 6 月 2022 年 6 月攀枝花学院附属
2、医院收治的 73 例原发性肝癌患者作为研究组,患者均符合原发性肝癌诊疗规范中的诊断标准;选择同期医院体检的 80 例健康人群作为对照组。抽取研究对象清晨空腹外周静脉血 5ml,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组血清 miR-196b 和miR-520f 表达水平。分析不同临床病理特征原发性肝癌患者血清 miR-196b 和 miR-520f 表达水平差异,采用 Pearson相关性分析探讨血清 miR-
3、196b 与 miR-520f 的关系,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清 miR-196b 和 miR-520f 对原发性肝癌的诊断价值。结果研究组血清 miR-196b 表达水平(2.730.56)明显高于对照组(0.990.24),miR-520f 表达水平(1.690.44)明显低于对照组(3.340.64),差异具有统学意义(t=30.578,12.690,均 P0.05)。与期、中高分化、无淋巴结转移、肿瘤直径 5cm 患者相比,期、低分化、淋巴结转移和肿瘤直径 5cm 患者血清 miR-196b 表达水平均
4、升高,miR-520f 表达水平均降低,差异具有统计学意义(tmiR-196b=6.919 13.229,tmiR-520f=3.873 7.814,均 P0.05)。Pearson 相关性分析显示,原发性肝癌患者血清miR-196b 表达水平与 miR-520f 表达水平呈负相关(r=-0.445,P=0.006)。ROC 曲线分析显示,血清 miR-196b 预测原发性肝癌的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间(95%confidence interval,95%CI)分别为0.842,2.55,91.78%,62.50%和 95%CI(0.810 0.874);miR-52
5、0f 预测原发性肝癌的的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间分别为 0.872,2.43,91.78%,67.50%和 95%CI(0.848 0.906);血清 miR-196b 联合 miR-520f 预测原发性肝癌的曲线下面积、敏感度、特异度及 95%置信区间分别为 0.923,86.30%,87.50%和 95%CI(0.891 0.955)。结论原发性肝癌患者血清 miR-196b 表达水平上调,miR-520f 表达水平下调,其表达水平变化与肿瘤直径、临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测血清 miR-196b 与 miR-520f 能有效提高原发性肝癌的诊
6、断效能。关键词:原发性肝癌;微小核糖核酸-196b;微小核糖核酸-520f中图分类号:R735.7;R730.43文献标识码:A文章编号:1671-7414(2023)05-047-06doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2023.05.009Expression and Clinical Diagnostic Value of Serum miR-196b and miR-520f in Primary Hepatocellular CarcinomaQI Rui,WANG Hebin,LI Jing,YANG Maohui,XU Jie(Department of H
7、epatology,Affiliated Hospital of Panzhihua University,Sichuan Panzhihua 617000,China)Abstract:ObjectiveTo explore the expression level and diagnostic value of serum microRNA(miR)-196b and microRNA-(miR)-520f in primary hepatocellular carcinoma.MethodsSeventy-three patients with primary hepatocellula
8、r carcinoma who met the criteria in Diagnosis,Management,and Treatment of Hepatocellular Carcinoma in the Affiliated Hospital of Panzhihua University from June 2020 to June 2022 were enrolled as study group.Meantime,another 80 healthy individuals underwent physical examination during the same period
9、 were set as control group.Milliliters(5ml)of fasting venous blood samples were obtained from all subjects.Expression levels of miR-196b and miR-520f in serum were detected by real-time fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR).The two indicators were compare
10、d among primary hepatocellular carcinoma patients with different clinicopathological characteristics.Thereafter,the Pearson correlation analysis was conducted to discuss the correlation between serum miR-196b and miR-520f expression,and receiver operating characteristic(ROC)curve was plotted to eval
11、uate the value of serum miR-196b and miR-520f in primary hepatocellular carcinoma.ResultsSerum miR-196b expression level was 2.730.56 in study group,which was higher than in control group(0.990.24),基金项目:国家重大疑难病中西医临床协作试点项目。作者简介:齐锐(1986-),男,本科,主任医师,研究肝胆胰脾疾病方面,E-mail:。通讯作者:王何斌(1972-),男,本科,主任医师,研究肝胆胰脾疾病
12、方面。48现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.2023and miR-520f expression level was 1.690.44 in study group,which was lower than in control group(3.340.64),and the differences were statistically significant(t=30.578,12.690,P0.05).Compared with patients with stage III IV,low differ
13、entiation,lymph node metastasis,and tumor diameter 5 cm detected higher serum miR-196b expression levels and lower miR-520f expression compared with those with stage I II,moderate-to-high differentiation,no lymph node metastasis,and tumor diameter 5 cm,respectively,and the differences were statistic
14、ally significant(tmiR-196b=4.868 13.229,tmiR-520f=3.873 7.814,all P0.05).Pearson correlation analysis denoted that the miR-196b expression level in serum of patients with primary hepatocellular carcinoma was negatively correlated with the miR-520f expression level(r=-0.445,P=0.006).In the prediction
15、 of primary hepatocellular carcinoma,ROC curve analysis suggested that the area under the curve,cut-off value,sensitivity,specificity and 95%confidence interval(95%CI)were 0.842,2.55,91.78%,62.50%,and 95%CI(0.8100.874)for serum miR-196b,and those were 0.872,2.43,91.78%,67.50%,and 95%CI(0.848 0.906)f
16、or serum miR-520f,while the combined detection of the two indicators showed better predictive efficacy,with area under the curve,sensitivity,specificity and 95%CI of 0.923,86.30%,87.50%,and 95%CI 95%CI(0.891 0.955),respectively.ConclusionPatients with primary hepatocellular carcinoma have up-regulat
17、ed miR-196b expression and down-regulated miR-520f in serum,and the two abnormal changes are closely correlated with the tumor diameter,clinical stage,differentiation degree,and lymph node metastasis in patients.Furthermore,the combined detection of two indicators is of great value in the diagnosis
18、of primary hepatocellular carcinoma.Keywords:primary hepatocellular carcinoma;micro RNA-196b;micro RNA-520f原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma)作为临床常见的消化系统恶性肿瘤,其高发病率和死亡率已成为国家重要的公共卫生问题1。尽管近年来随着医学技术的发展,原发性肝癌的治疗取得很快的进步,但其术后复发率、死亡率仍然较高。因此,如何降低原发性肝癌术后死亡率成为当前临床面临的重要问题。既往有研究表明,微小核糖核酸(microRNA,miRNA,miR)在
19、肝癌早期诊断、预后监测及靶向治疗中发挥重要作用2-3。miR-196b,miR-520f 均是 miRNA 家族成员之一,miR-196b 具有参与肿瘤的淋巴结转移和细胞增殖等作用,研究显示 miR-196b 与头颈部鳞状细胞癌患者预后密切相关4-5;而 miR-520f 在多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因作用,下调 miR-520f 表达水平不仅增强癌细胞的增殖作用,同时可作为诊断肺癌的生物标志物6-7。但目前关于血清 miR-196b,miR-520f对原发性肝癌诊断价值的研究尚不清楚。因此,本研究探讨原发性肝癌患者血清 miR-196b,miR-520f 水平表达及临床诊断价值研究。1材料与方
20、法1.1研究对象选择 2020 年 6 月 2022 年 6 月经攀枝花学院附属医院收治的 73 例原发性肝癌患者作为研究组,其中男性 30 例,女性 43 例,年龄35 80(52.664.24)岁。同时选择同期在医院体检的 80 例健康人群作为对照组,其中男性 32 例,女性 48 例,年龄 36 80(53.014.43)岁。纳入标准:研究组患者均符合原发性肝癌诊疗规范中的诊断标准8;所有研究对象及其家属均已签署知情同意书;所有研究组患者均为初次诊治,术前未接受过化疗、放疗等治疗者。排除标准:伴有重要脏器功能障碍者;并发严重感染性疾病、免疫系统疾病、血液系统疾病以及其他恶性肿瘤疾病者;伴
21、有酒精性肝损伤、活动性肝炎等肝脏疾病者;术前进行其他抗肿瘤治疗以及存在治疗禁忌症者;既往有精神病史或存在认知功能障碍者;临床资料不全者;无法完全配合治疗或中途退出研究者。本研究经过医院伦理委员会审核批准。1.2仪器与试剂NanoDr-ropND-1000(美国Thermo 公司),Trizol 试剂(北京索莱宝科技有限公司),TaqMan miRNA 检测相关的试剂盒(美国,赛默飞公司),miRNeasy Mini 检测相关的试剂盒(美国,通用公司),ABI7900型PCR仪(美国,ABI公司)。1.3方法样本收集:获得本研究纳入患者知情同意后,于入院后次日清晨抽取空腹外周静脉血 5 ml送检
22、,室温下以 2 500 r/min 离心 10 min,随后取上清液存放至-80 冰箱内用于后续 RNA 提取及检测。总 RNA 提取:取出血清样本后按照提取 Trizol试剂说明书提取血清中总 RNA,应用 NanoDr-ropND-1000 测定 RNA 纯度,随后将提取出的 RNA样品置于-80冰箱保存盒。实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测:采用 miScript 逆转录试剂盒将上述血清总 miRNA 合成 cDNA,每10 l 逆转录作为一个反应体系。反应条件为 95 10 s,40 个循环,90 5 s,40 个循环。并利用 CFX manager 3.0 软件对
23、 Ct 值进行分析,再通过2-Ct法(t=CtmiRNA-CtU6)计算血清 miR-196b,miR-520f 的相对表达量。1.4统计学分析运用 SPSS24.0 进行统计学数据处理量,计量资料以均数 标准差(xs)表示,采用成组设计资料的 t 检验;计数资料比较使用49现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023n(%)描述,采用 2检验;采用 Pearson 相关性分析血清 miR-196b 与 miR-520f 的关系,采用受试者工作特征(receiver operating characterist
24、ic,ROC)曲线分析血清 miR-196b,miR-520f 对原发性肝癌的诊断价值。检验水准=0.05。2结果2.1研究组、对照组血清 miR-196b,miR-520f 表达水平比较研究组血清 miR-196b 表达水平明显高 于对照组(2.730.56 vs 0.990.24),而 miR-520f 表达水平明显低于对照组(1.690.44 vs 3.34 0.64),差异具有统计学意义(t=30.578,12.690,均 P0.05)。2.2血清 miR-196b,miR-520f 表达与原发性肝癌临床病理特征的关系见表 1。原发性肝癌患者血清 miR-196b,miR-520f 表
25、达水平与肿瘤直径、临床分期、分化程度、淋巴结转移对比,差异均有统计学意义(均 P0.05)。表 1 血清 miR-196b,miR-520f 表达与原发性肝癌临床病理特征的关系(xs)类 别nmiR-196bt 值P 值miR-520ft 值P 值年龄(岁)52333.300.711.4130.1621.620.381.1980.235 52403.370.621.750.46临床分期 期483.020.616.3340.0011.750.495.8920.001 期253.950.921.570.31分化程度 中高分化453.060.536.9190.0011.730.454.5640.00
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