视黄醇结合蛋白7调控Akt_mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响.pdf
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1、论 著视黄醇结合蛋白 调控 信号通路对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响 上海 复旦大学附属华东医院乳腺外科秦朝晖,李蔚萍,胡天华,程爱群,洪丽霞【摘 要】目的 探讨视黄醇结合蛋白()调控蛋白激酶()哺乳动物雷帕霉素靶蛋白()信号通路对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法 网站用于分析乳腺癌组织的 表达,实时定量()用于检测乳腺癌细胞(、和)的 表达。将 细胞分为 组(阴性对照)、组(上调 表达)和 组(上调 表达且增强 活性)。和 用于检测磷酸化()、磷酸化()和 的表达。法、划痕愈合实验和 小室实验检测 细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果 在乳腺癌组织和细胞中低表达()。生物信息学分析显示 低表
2、达乳腺癌患者的预后较差。组、和 的表达低于 组();而 组、和 的表达高于 组()。此外,组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均弱于 组(),而 组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均强于 组()。结论 通过调控 通路抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能为乳腺癌患者提供一种新的治疗干预手段。【关键词】乳腺癌;视黄醇结合蛋白;蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号;侵袭迁移中图分类号:文献标识码:文章编号:(),【】(),()(),(,)(),()(),(),()(),()(),(),(),【】;临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤类型,在高人类发展指数和低人类发展指数地区其年
3、龄标准化发生率分别为每年 和 万女性,据统计数据预测,全球每年新增病例数为,例,呈迅速增长趋势。因此,了解乳腺癌发病机理、鉴别新的诊疗标志物对于减少乳腺癌造成的社会经济负担以及改善患者预后至关重要。视黄醇结合蛋白(,)包含 个氨基酸,是细胞视黄醇结合蛋白(,)家族成员之一,由 基因编码,该基因位于人类染色体 。据报道,参与调节某些疾病的发生发展过程。例如,调控视黄醇代谢相关基因 表达,与脂肪细胞分化相关;在血管内皮细胞中,作为过氧化物酶体增殖物激活受体 的靶基因,通过与其形成正反馈回路,拮抗肾素血管紧张素系统,维持血管完整性,发挥一定心脏保护作用。还被发现在结直肠组织中表达缺失,可能作为肿瘤微
4、环境调节因子来诱导 耐药。近期有研究显示 对 型乳腺癌的他莫西芬治疗反应有显著预测价值。蛋白激酶()哺乳动物雷帕霉素靶蛋白()信号通路是调控基本细胞功能的最关键信号通路之一,参与细胞增殖、存活、侵袭、迁移、凋亡、葡萄糖代谢和 修复等过程。信号通路的突变常在癌症中被发现,在乳腺癌中尤其常见。然而,是否通过 信号通路影响乳腺癌进展尚不清楚。因此,本研究旨在探究乳腺癌中 的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和 信号通路的影响,进一步揭示 调控乳腺癌的潜在机制,现将研究结果报道如下。材料与方法 生 物 信 息 学 分 析 通 过 数 据 库(:)分 析 平 台,模块 中点击 ,进入 ,栏中输入,选择
5、 分析,样本来源选择 ,选择疾病名称乳腺浸润性癌(,),点击,分析 在 例 肿瘤组织和 例正常组织中的表达情况。模块 中点击 ,栏中输入,选择分析,值选择,样本来源选择 ,选择疾 病 名 称,点 击,分析 表达与 患者预后的关系。细胞和主要试剂 乳腺癌细胞(、)和人正常乳腺上皮细胞 购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所(上述细胞均由本院实验中心冻存),实时定量()引物、和 过表达重组载体质粒 购自通用生物(安徽)股份有限公司,信号通路激动剂 购自美国 公司,培养基、胎牛血清、检测试剂盒和脂质体 购自美国 公司,逆转录试剂盒 和 试剂盒 购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司,试剂和 购自北
6、京索莱宝公司,兔源多克隆磷酸化()、磷酸化()、和 一抗以及 标记的二抗购自武汉博士德生物工程有限公司。细胞培养和分组 将细胞加入含有 胎牛血清及 青霉素链霉素的 培养基,在 、恒温湿润细胞培养箱中进行培养。利用转染试剂分别将 、和 转染至 细胞,根据处理情况分组如下:组(阴性对照)、组(过表达)、组(过表达 同时激活 通路)。总 提取和 利用 试剂提取细胞总,通过试剂盒逆转录为 并以上述 为模板行 检测。基因扩增条件:变性 ;个循环的 延伸 、退火 。扩增体系:()、上下游引物()各 、。作为内参,法计算各基因的相对表达量。上游引物:,下游引物:;上游引物:,下游引物:;上游 引 物:,下游
7、引物:。实验转染处理后、收 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,集 细胞置于 培养基,每孔加入 的 溶液,培养箱孵育 ,加入 二甲基亚砜溶液震荡反应。酶标仪读取 波长下各孔细胞的光密度值()。划痕愈合实验 将 细胞按照 的密度接种至 孔板,待细胞贴壁生长至融合度 时进行划痕操作,即使用灭菌枪头垂直于孔板底部划一条直线,显微镜下拍照记录;冲洗,加入无血清 培养基培养 ,冲洗,显微镜下再次拍照记录。根据伤口划痕宽度计算细胞愈合率。小室实验 用不含胎牛血清的 培养基重悬 细胞,取 个细胞接种到小室上室,下室加入 含 胎牛血清的 培养基,培养箱培养 。冲洗小室,浸于多聚甲醛溶液固定 ,弃去上室废液,
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