马铃薯脱毒与快繁技术.pdf
《马铃薯脱毒与快繁技术.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《马铃薯脱毒与快繁技术.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、2023.8 粮食作物马铃薯属茄科茄属的一年生草本植物袁 原产于南美秘鲁,明末清初时传入我国遥 其具有喜冷凉尧适应性广尧生育期较短尧产量高尧营养价值高尧用途广等特点,被誉为 野地下的苹果冶,是我国第四大粮食作物,也是重要的粮菜兼用和工业原料作物遥 自我国实施马铃薯主粮化战略以来,马铃薯的市场需求量越来越高袁在农业生产中的地位日益凸显1遥 马铃薯为利用块茎进行无性繁殖的作物袁 在种薯繁育和生长期间易受病毒侵染导致产量和品质下降,经继代积累造成种性退化,进而丧失利用的价值遥 利用植物组织培养技术进行茎尖脱毒生产脱毒苗尧 鉴定合格的脱毒苗继代扩繁尧温网室定植繁育原原种尧原原种繁育原种袁建立良种繁育体
2、系生产优良种薯,成为保证马铃薯高产尧优质的有效措施2遥1脱毒苗的制取1.1外植体渊脱毒材料冤的选取在马铃薯生长期间袁 田间选择具有原品种优良特性渊包括株型尧叶型尧花色尧成熟期等性状冤袁生长健壮袁无明显病毒性尧类病毒性尧真菌性尧细菌性病害症状的马铃薯植株作为目标植株袁做好标记袁加强日常观测管理袁防止病虫害侵染遥 成熟时提前单独收获并进行再次挑选袁选择结薯率尧单株产量和大薯率高尧薯块无病斑尧虫蛀和机械损伤的材料渊植株冤袁收获其块茎袁带到实验室备用遥 为了提高脱毒成功率袁马铃薯脱毒材料的选择尽可能的在原种繁育田及原原种繁育温室或网室中选择3遥 由于马铃薯纺缍块茎病是由类病毒渊PSTV冤引起的袁目前用
3、植物茎尖分生组织方法难以脱除袁 因此在进行脱毒前要对入选的块茎进行 PSTV 检测袁淘汰带有 PSTV 的块茎4遥1.2外植体处理1.2.1打破休眠种薯收获后袁 可自然通过休眠期或采取人工打破休眠期遥 若人工打破休眠袁 可将块茎放入 35益恒温培养箱中袁 每天光照 16 h袁 光照度2 000 1x袁放置 30 d 左右后袁用赤霉素溶液(浓度 10%耀20%冤浸泡20耀30 min袁做催芽处理遥1.2.2外植体灭菌马铃薯选取芽作为外植体袁由于外植体取自于田间袁 材料含微生物袁 不能直接培养袁必须表面灭菌才能培养遥渊1冤预处理院把入选的马铃薯块茎进行打破休眠和催芽处理后袁当薯块顶芽生长至 1 c
4、m 时袁转入光照培养箱内袁以每天 12 h尧光照度 3 000 lx尧37益的高温处理 6耀8 周遥渊2冤灭菌院剪取经过热处理后发芽块茎上 2耀3 cm长的芽若干个袁放入玻璃烧杯内袁先用淡淡的加酶洗衣粉浸泡 1耀2 min袁同时不停振荡袁冲刷芽上的尘土袁然后在烧杯口扎块纱布袁放在水龙头下袁采用小水流马铃薯脱毒与快繁技术基金项目院2021 年甘肃省高等学校创新基金项目 野高效低成本马铃薯种薯繁育技术集成创新研究与方法冶渊项目编号院2021B-617冤曰2022 年山丹县强科技计划项目野高效低成本马铃薯种薯繁育技术集成创新研究与示范冶山科发渊2022冤12 号遥作者简介院杨霞渊1982-冤袁女袁本
5、科袁农艺师袁从事马铃薯脱毒种薯繁育研究工作遥 E-mail:杨霞1唐伟杰1俞慧胜2王丽莉2潘子涵1吴莉1刘麟1袁玉涛1褚玉婷1渊1.培黎职业学院甘肃张掖 734100曰 2.甘肃天润薯业有限责任公司甘肃张掖 734100冤摘要院马铃薯是我国第四大粮食作物袁也是重要的粮菜兼用和工业原料作物遥 马铃薯为无性繁殖袁在种薯繁育和生长期间易受病毒侵染导致产量和品质下降,经继代积累使得种性退化,进而丧失利用的价值遥 利用植物组织培养技术进行马铃薯脱毒和快繁袁可使马铃薯种性得到恢复袁产量和品质进一步提高遥 本文作者结合多年实际生产经验袁研究总结出一套马铃薯脱毒与快繁技术袁为马铃薯脱毒快繁提供技术参考遥关键词
6、院马铃薯曰脱毒曰快繁技术210-粮食作物 2023.8冲洗袁持续冲洗 2耀3 h袁最后用滤纸吸干芽表面水分后放入超净工作台进行严格消毒遥 在超净工作台内首先用 75%酒精浸泡 30耀45 s袁并不断震动袁使 75%酒精作用到芽的每个部位袁 其次用无菌水冲洗 3耀4 遍袁然后根据不同的品种和芽尖的大小袁用 0.1%升汞渊HgCl2冤浸泡并不断晃动 5耀10 min袁或在 5%漂白粉咱Ca渊C1O冤2暂溶液中浸泡 5耀10 min袁最后用无菌水清洗 3耀4 次袁 处理完后将芽放在滤纸上吸干水分待用渊滤纸需提前用高压蒸汽锅灭菌冤遥1.3茎尖剥离及组织培养1.3.1茎尖剥离把消毒好的芽放在 40 倍的
7、解剖镜下袁剥去顶芽和腋芽上较大的幼叶袁逐层剥离直到露出圆滑的生长点袁小心切取大小 0.3耀0.5 mm尧含有1耀2 个叶原基的茎尖组织袁立即接种到带有培养基的试管中袁每支试管接种 员 个茎尖遥1.3.2茎尖培养淤培养基的选取院马铃薯茎尖培养较理想的培养基为 MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L或 MS+KT 0.4 mg/L+GA30.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L袁加入 GA3对茎尖成苗有促进作用袁 培养基 pH 5.8耀6.0遥于培养条件院白天温度 24益左右袁晚上 18益袁上下浮动不超过 1益遥 光照度 1 500耀2 000 lx袁 光照时间以14 h/d
8、 为宜遥 30耀40 d 茎尖可明显伸长袁4 个月左右发育成 3耀4 片叶的小苗遥 这时在无菌条件下进行单节切段袁 并接种于带有培养基的培养瓶中继续培养遥25 d 左右又可进行单节切段扩繁遥2脱毒苗的鉴定茎尖培养获得的试管苗袁 经严格检测后才能确认为脱毒苗遥马铃薯脱毒苗需检测的病害有马铃薯 X病毒渊PVX冤尧马铃薯 Y 病毒渊PVY冤尧马铃薯 S 病毒渊PVS冤尧 马铃薯 M 病毒 渊PVM冤尧 苜蓿花叶病毒渊AMV冤尧 马铃薯卷叶病毒 渊PLRV冤尧 马铃薯 A 病毒渊PVA冤尧马铃薯帚顶病毒渊PMTV冤尧马铃薯纺锤块茎类病毒渊PSTV冤尧细菌性青枯病尧细菌性环腐病尧细菌性软腐病和细菌性黑胫
9、病5遥 通常采用双抗体酶联免疫吸附法检测马铃薯病毒病袁 用往复聚丙烯氨酰胺凝胶电泳检测技术检测马铃薯纺锤块茎类病毒遥3马铃薯组培苗快繁3.1快繁前的准备3.1.1灭菌淤环境灭菌院 组培中心定期进行熏蒸消毒渊一般间隔时间为 15 d冤袁通常可使用高锰酸钾和甲醛以 1颐2 的比例熏蒸渊熏蒸 24 h袁然后通风换气冤遥接种室每天早晨先用 75豫酒精喷雾降尘袁 再打开室内和超净工作台的紫光灯灭菌袁30 min 后关闭紫光灯袁打开超净工作台风机至最大档通风 30 min遥 每晚室内用 84 消毒液喷洒地面袁打开室内紫光灯灭菌 1 h遥于工具灭菌:接种所用的工具在前一天用报纸包好袁放入高压蒸汽灭菌锅中 1
10、21益尧0.15Mpa尧灭菌 1耀2 h遥具体消毒灭菌流程见图 1遥3.1.2培养基制备淤培养瓶的准备院 培养瓶需先在 0.3%的高锰酸钾溶液中浸泡 10 min袁 然后用清洁热水加入适量洗衣粉袁 人工或用组培专用洗瓶机洗干净袁 最后换水冲洗干净倒置在盘中待水珠晾干后备用遥 于培养基的制备院马铃薯组培苗快繁通常采用MS 培养基遥 配制培养基是日常必做的工作之一袁各成分可以按配方要求一一加入袁但很不方便袁也很难达到准确和精确遥 为简便起见袁通常先配制成一系列母液袁 配方详见表 1遥 母液要放在 2耀4益的冰箱中保存袁存放时间不宜过长遥马铃薯快繁培养基可使用卡拉胶渊5.4 g/L冤或琼脂渊7 g/
11、L冤作为凝固剂曰用 30 g/L 白糖调节渗透压袁有些特殊的品种可增加 0.5%耀1.0%的白糖遥 培养基 pH调至 5.8袁通常偏酸的情况较多袁可用 1 mol/L NaOH溶液调节遥 制作好的培养基应在 24 h 内用高压蒸汽锅灭菌遥 配制流程详见图 2遥3.2马铃薯组培苗快繁经严格检测袁确定为不含病毒的组培苗袁即可大量繁殖遥 马铃薯快繁一般采用单节切段转接方法遥 具图 1接种前消毒灭菌流程211-2023.8 粮食作物体操作流程见图 3遥马铃薯快繁过程中袁应注意以下几点院淤接种工具每次使用前用酒精灯或高温灭菌器灭菌袁 防止交叉污染曰于消毒器尧装有 75%酒精的消毒瓶尧冷却架尧酒精棉瓶尧喷
12、壶等工具置于台面惯用手侧袁培养基尧母苗瓶等其他物品置于相对一侧袁无菌培养皿尧酒精灯放于人员正前方袁酒精灯朝内曰盂操作应在酒精灯火焰的有效范围内进行曰 榆接种工具灼烧后充分冷表 1MS 培养基配方母液成分浓度渊mg/L冤稀释倍数实际用量渊母液冤渊g/2 L冤10 L 培养基用量渊mL冤母液 1NH4NO31 65050165200KNO31 900190MgSO4窑 7H2O37037KH2PO417017母液 2MnSO4窑 H2O16.92006.7650ZnSO4窑 7H2O8.63.44H3BO46.22.48KI0.830.332NaMoO40.250.1CoC12窑 6H2O0.02
13、50.01CuSO4窑 5H2O0.0250.01母液 3盐酸硫胺素 B10.42000.0850盐酸吡哆素 B60.50.1烟酸0.50.1甘氨酸2.00.4肌醇10020母液 4FeSO4窑 7H2O27.82005.5650EDTA-2Na37.37.46母液 5CaC1233220066.4图 2培养基配置流程图 3组培苗快繁流程212-粮食作物 2023.8却袁防止烫伤组培苗曰虞接种时夹取组培苗用力要适当袁 组培苗和手指不能触及瓶口曰 愚手臂勿在培养基尧接种器上方经过曰舆无菌操作时不要讲话袁双手不要超出超净工作台边缘遥4马铃薯组培苗培养4.1温度马铃薯属喜凉作物袁 组培苗的生长温度在
14、 17耀25益之间均能生长良好遥 通常白天温度设置为 23益袁晚间温度为 17益袁日累积温度在 40益比较合适袁上下浮动不超过 1益遥 组培苗在有温差的条件下生长袁茎粗叶大袁不易倒伏袁便于继代繁殖和移栽遥4.2湿度组培室最佳湿度控制在 60%左右袁 不宜超过65%袁若湿度过高需开启除湿机除湿袁并及时排清除湿机的水遥 在阴雨季节需一天检查 2 次袁及时清理除湿机袁防止杂菌滋生遥4.3光照马铃薯组培苗的光照时间一般为 16 h袁 大部分马铃薯的组培苗需要的光照度为 3 000 lx渊需 2 支 28WT5 灯管冤袁高温季节繁苗温度过高袁无法将组培室控制在适宜的温度袁尤其夜间温度过高袁日累积温度超出
15、 40益时可以将光照时间缩短至 15 h/d袁 但不能低于 14 h/d遥5马铃薯组培苗快繁中常见问题5.1污染问题及预防措施5.1.1污染问题马铃薯组培苗生产过程中污染是最常见和首要解决的问题遥 污染是由于培养基和培养材料滋生杂菌袁造成培养材料不能生长发育袁导致培养失败的现象遥 引起马铃薯组培苗污染的污染源主要有真菌和细菌两大类袁 细菌性污染通常在接种后 1耀2 d 即表现出来袁症状是菌落呈黏液状袁颜色多为白色袁与培养基表面界限清楚曰真菌污染一般在接种 3 d 以后才表现出来袁真菌污染症状是新形成的菌落多为黑色尧绿色尧白色的绒毛状尧棉絮状袁与培养基和培养物的界限不清遥造成污染主要有以下几个原
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 马铃薯 脱毒 技术
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。