银川某牛场牛源金黄色葡萄球...的耐药性分析及毒力基因检测_达举云.pdf
《银川某牛场牛源金黄色葡萄球...的耐药性分析及毒力基因检测_达举云.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《银川某牛场牛源金黄色葡萄球...的耐药性分析及毒力基因检测_达举云.pdf(8页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、动物医学进展,():银川某牛场牛源金黄色葡萄球菌的耐药性分析及毒力基因检测达举云,宋倩,史金莲,卢挺,崔晓,丁渲攀,张勇,赵兴绪(甘肃农业大学动物医学院甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室,甘肃兰州 )摘要:为了解宁夏某牛场引发奶牛乳房炎致病菌情况,采集临床型乳房炎奶牛乳样 份,采用 选择性培养基分离纯化细菌,革兰氏染色镜检、生化试验、序列分析鉴定疑似菌株。采用琼脂纸片扩散法(法)对细菌进行药敏试验,利用 检测分离株中携带的耐药基因、基因和毒力基因。结果显示,份乳样分离鉴定出 株金黄色葡萄球菌,其中有 株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(),检出率为;不同程度的多重耐药菌株达到 株,多重耐药率达到
2、,万古霉素的敏感率为 ,左氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星的敏感率达到了 以上;磺胺类耐药基因 和 的检出率均为 ,内酰胺类耐药基因 、和氯霉素类耐药基因 的检出率 以上,其他类耐药基因检出率较低;毒力基因检测结果显示,、的检出率为 ,和 的检出率较高,、的检出率较低。关键词:奶牛乳房炎;金黄色葡萄球菌;耐药性;毒力基因中图分类号:;文献标识码:文章编号:()奶牛乳房炎是病原微生物通过乳头管入侵奶牛乳腺组织,其中的乳汁为天然的培养基,使得病原微生物大量繁殖,进而引发乳房炎。众所周知,引起奶牛乳房炎的病原微生物种类繁多,最主要的是由收稿日期:基金项目:宁夏回族自治区重点研发项目();甘肃省科学技术厅
3、项目();甘肃省引导科技创新专项资金项目();甘肃省委组织部人才项目()作者简介:达举云(),男,甘肃白银人,硕士研究生,主要从事奶牛围产期疾病研究。通讯作者 ,(,):,:;DOI:10.16437/ki.1007-5038.2023.06.007细菌引起,其中最常见的细菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房炎链球菌、停乳链球菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和牛支原体等。研究表明,金黄色葡萄球菌则是引起乳房炎最主要的病原菌,金黄色葡萄球菌干扰免疫系统和以抗生素为主的治疗方式,是导致金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎更加难以治疗的原因。世纪 年代出现了人畜共患病原菌 耐 甲氧 西林 金 黄 色 葡
4、 萄 球 菌(,),牛源性 检出率的增加,对人类公共卫生安全造成严重危害。临床滥用抗菌药物导致细菌耐药性问题日益严峻,究竟原因是耐药基因的不断扩散和转移,截止 年月,国际抗菌药耐药基因数据库(,)已收录了 条抗菌药耐药基因序列,包括 种耐药基因亚型,涉及 种抗菌药物、个菌属、个菌种、个细菌基因组、个耐药基因载体。金黄色葡萄球菌的致病性强弱与其携带的毒力因子有关,目前已报道的毒力因子共有 多种。本试验采用 琼脂选择性培养基分离培养金黄色葡萄球菌,然后通过形态学鉴定、生化鉴定和 相结合的方法鉴定金黄色葡萄球菌,分析该牛场引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌对 种抗菌药物的耐药状况,检测 菌株的流行情况、
5、种耐药基因的携带情况以及 种毒力因子携带情况,对有效防治该牛场奶牛乳房炎以及选用抗菌药物治疗提供理论依据。材料与方法材料样品的采集根据驻场兽医描述,识别乳房炎奶牛,采集宁夏省银川市某奶牛场乳房炎乳样 份。采集时,用酒精棉球擦拭乳头,弃前把乳样,乳样盛在 离心管,保存,带回实验室,备用。主 要 试 剂脑 心 浸 液 肉 汤 琼 脂 培 养 基、琼脂培养基()、琼脂培养基、营养肉汤琼脂培养基,北京索莱宝科技有限公司产品;羊血清,天津康源生物技术有限公司产品;无菌脱纤维绵羊血,南京森贝伽生物科技有限公司产品;生化鉴定管和药敏片,杭州滨和微生物试剂有限公司产品;细菌基因组提取试剂盒,北京天根生化科技有
6、限公司产品;冻干兔血浆,青岛海博生物技术有限公司产品;质控菌株,北京质检生物技术有限公司产品。主要仪器 型电脑三恒多用电泳仪、型电泳槽,北京六一生物科技有限公司产品;超净工作台,美国 公司产品;恒温培养箱,上海一恒科技有限公司产品;正置光学显微镜,日本 公司产品;扩增仪、凝胶成像系统,美国 公司产品。方法细菌分离将新鲜乳样接种于 羊血清脑心浸液肉汤培养基中,恒温摇床过夜培养。用灭菌棉签蘸取已培养的乳样均匀涂在 绵羊血琼脂平板和 琼脂平板上,恒温培养箱过夜培养。细菌鉴定形态学鉴定用生理盐水将单菌落用火焰固定在载玻片上,进行革兰氏染色。显微镜下观察细菌的形态、颜色。生化鉴定 质控菌株作为对照菌株,
7、将 株新鲜菌液分别接种到甘糖、甘露醇、麦芽糖、木糖、乳糖、蕈糖、蔗糖、尿素和硝酸盐还原等微量生化鉴定管中;将各菌株分别进行玻片触酶试验和凝固酶试验。结果依据 常见细菌系统鉴定手册 和 伯杰细菌鉴定手册 对比,判定细菌的种属。分子生物学鉴定及系统发育进化树参照文献 设计 引物,以细菌基因组 为模板,利用 技术扩增 序列,扩增的 产物送兰州天启生物技术有限公司测序,序列提交至 网站 进行菌种同源性鉴定。从 下载了 种金黄色葡萄球菌球菌的 序列,使用 软件多序列比对后通过邻接法构建系统发育进化树()。细菌药敏试验选取诺氟沙星、复方新诺明、青霉素、环丙沙星、米诺环素、万古霉素、氨曲南、多黏菌素、苯唑西
8、林、左氟沙星和克林霉素共 种抗菌药物。采用琼脂纸片扩散法(法),将新鲜菌悬液稀释至麦氏浊度,均匀涂布纸培养基,恒温培养,测量抑菌圈直径,按照美国临床与 实验室标准化协会()颁布的 抗微生物药物敏感性试验执行标准 判断对药物的敏感性,金黄色葡萄球菌()作为质控菌。细菌耐药基因的检测参照文献 设计 对耐药基因引物,包括磺胺类(和 )、氨基糖苷类(和 )、链霉素类()、四环素 类()、内 酰 胺 类(、和)、喹诺酮类(、和 )、氯霉素类()。以细菌基因组 为模板,利用 动物医学进展 年第 卷第期(总第 期)扩增耐药基因序列。菌株的筛选参照文献 ,设计 基因引物,利用 检测 菌株。反应阳性的菌株为 耐
9、 甲氧 西林 金 黄 色 葡 萄 球 菌(,),阴性的菌株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(,)。毒力基因的检测参照文献 ,设计 种毒力基因,包括耐热核酸酶()、葡萄球菌 蛋白()、溶血素()、肠毒素基因(、)、凝固酶()、凝集因子()、纤连蛋白结合蛋白()、杀白细胞素()和纤连蛋白结合蛋白()。利用 检测金黄色葡萄球菌 种毒力基因在 株分离株中的携带情况。动物致病性试验参照文献 ,选取标准体重的清洁级昆明小鼠 只,随机分笼成 组,每组只,组对照组,组试验组。对照组小鼠腹腔注射无菌营养肉汤,试验组小鼠腹腔注射金黄色葡菌球菌的纯培养营养肉汤,浓度为 ,试验组按菌株命名编号。注射后每观察次小鼠,记录精
10、神状况、死亡时间、死亡数量等。对同组只小鼠全部死亡并用时最短的一组小鼠,立即进行无菌剖检,观察心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的病理变化,将脏器抹片进行革兰氏染色,同时用 中性甲醛溶液将脏器固定,制作病理切片。结果细菌分离 份乳样共分离出株大肠埃希氏菌,株链球菌,株金黄色葡萄球菌。其中大肠埃希氏菌和链球菌的分离率均为,金黄色葡萄球菌的分离率为,确定金黄色葡萄球菌是该养殖场中导致奶牛乳房炎发生的优势菌株,同时,将 株金黄色葡萄球菌重新编号为 ,以后备用。细菌鉴定形态学鉴定革兰氏染色镜检观察细菌呈深蓝色,为单个、成对、四联或不规则的簇群,以葡萄串状居多(图);而培养基观察可见边缘圆润有晕环,中间凸起呈
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 银川 某牛场牛源 金黄色 葡萄 耐药性 分析 毒力 基因 检测 达举云
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。