布托啡诺调节HIF-1α_VEGF信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响.pdf
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1、:./.论著布托啡诺调节/信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响刘庆冬 宋美微 袁魁项目来源:黑龙江省中医药科研项目(编号:)作者单位:黑龙江省牡丹江市肿瘤医院麻醉科(刘庆冬)妇瘤二科(袁魁)黑龙江省牡丹江市第一人民医院呼吸内科(宋美微)【摘要】目的 探讨布托啡诺()调节缺氧诱导因子()/血管内皮生长因子()信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响 方法以人子宫内膜癌 细胞为研究对象用不同浓度(、.、/)处理 细胞 法检测 细胞增殖并计算半抑制浓度()取对数生长期的 细胞将其分为对照组(组)、低剂量 组(组/)、中剂量 组(组/)、高剂量 组(组/)、(激活剂)组(/)、
2、组(/)划痕实验检测 细胞迁移能力 实验检测 细胞侵袭能力基质胶法检测 细胞管腔形成 检测 细胞中基质金属蛋白酶()、环氧化酶()、蛋白表达 结果 与 /比较.、/处理的 细胞 值降低(.)经计算得 值为./因此选取、/作为后续处理 细胞的低、中、高剂量浓度 与 组比较 组、组、组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达降低 组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达升高(.)与 组比较 组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达升高(.)结论 可能通过抑制/信号通路抑制 细胞迁移、侵袭和血管生成【关键词】子宫内膜癌布托啡诺缺氧诱导因子/血管内皮生长因子信号
3、通路迁移侵袭血管生成【中图分类号】.【文献标识码】【文章编号】()/.【】()()/()./()().()/()/()/()/()/().()()././(.)././.(.)(.).(.)./.【】/子宫内膜癌是妇科常见肿瘤严重威胁女性身心健康 世界卫生组织国际癌症研究机构的数据显示河北医药 年 月 第 卷 第 期 年全球大约有 万例子宫内膜癌新病例 其中中国约有 万例约占全球发病率的/越来越多的研究表明细胞迁移、侵袭和血管生成参与了子宫内膜癌的进展 目前子宫内膜癌的治疗以手术为主放疗、化疗、孕激素治疗、新型靶向治疗为辅 然而经过一段时间的治疗后癌细胞容易发生转移最终导致治疗失败 因此开发新
4、的药物抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成具有重要的临床意义 布托啡诺()是一种合成阿片类药物该类药物已被证明可以抑制肿瘤生长和转移 已有研究报道 可抑制肝癌细胞转移和血管生成 而 能否抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成尚不明确 相关研究显示抑制缺氧诱导因子()/血管内 皮 生 长 因 子()的表达显著提高了子宫内膜癌细胞的放射敏感性 而笔者发现 能否通过调控/信号通路影响子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成尚不明确 因此本研究主要探究 对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响以及其作用机制 材料与方法.细胞来源人子宫内膜癌细胞系 购自厦门逸漠生物科技有限公司.主要试剂 布托啡诺(规格:
5、)购自南京北鱼生物科技有限公司 激活剂 购自北京安必奇生物科技有限公司 试剂盒购自无锡菩禾生物医药技术有限公司兔源一抗基质金属蛋白酶()、环氧化酶()、辣根过氧化物酶()标记的羊抗兔 二抗均购自英国 公司.细胞培养人子宫内膜癌细胞系 在补充有 胎牛血清的 培养基中孵育 所有细胞均在、的加湿培养箱中培养.法检测 细胞增殖取对数生长期的 细胞稀释其浓度为 个/取 细胞悬液置于 孔板中加入终浓度为、.、/含 胎牛血清的 培养液处理 然后每孔加入 试剂孵育 酶标仪测量 处的光密度()值并计算半抑制浓度().细胞分组 取对数生长期的 细胞将其分为对照组(组)、低剂量 组(组)、中剂量 组(组)、高剂量
6、组(组)、(激活剂)组、组参考文献及前期预实验结果 组、组、组、组 细 胞 分 别 用/、/、/、/处理 组 细胞同时用 /和 /处理 组 细胞为正常培养的 细胞.划痕愈合实验检测 细胞迁移 将 细胞以 个/孔的密度接种于 孔板中当细胞单层达到 汇合度时用 移液管尖端轻轻地刮擦细胞层 将含有 的培养基更换为无 的培养基 在、观察细胞划痕的宽度并记录 的划痕宽度为 的划痕宽为 划痕愈合率()()/.检测 细胞侵袭将 预涂于 上室并接种 个 细胞下室加入含 的培养基、条件下孵育 将侵袭的细胞用甲醇固定 .结晶紫染色 利用光学显微镜观察 细胞侵袭情况并计数.基质胶法检测 细胞管腔形成将 胶预涂于 孔
7、板的每个孔上待其凝固后加入 个/细胞悬液在细胞培养箱中培养 利用倒置显微镜观察 细胞管腔形成情况.检测 细胞中、蛋白表达使用 缓冲液提取 细胞蛋白质 将蛋白质进行定量、电泳、转膜、封闭后将膜与一抗()、()、()、()、()、()在 孵育过夜 随后将膜和 标记的山羊抗兔 二抗()共同孵育 通过 系统观察蛋白质条带 软件评估蛋白条带灰度值.统计学分析应用 .统计软件计量资料以 表示多组间采用单因素方差分析 组间比较采用 检验.为差异有统计学意义 结果.不同浓度 对 细胞增殖能力的影响 与 /比较.、/处理的 细胞 值降低(.)经计算得 值为./因此后续分别选取河北医药 年 月 第 卷 第 期 、
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