氢吗啡酮对大鼠的脑保护作用.pdf
《氢吗啡酮对大鼠的脑保护作用.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《氢吗啡酮对大鼠的脑保护作用.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、目的 探讨氢吗啡酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法 45只SD雄性大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和氢吗啡酮组(HM组)。采用Zea-Longa改良线拴法构建动物模型,再灌注24h后,Zea-Longa评分法评价神经功能;TTC染色检测脑梗死体积;苏木精-伊红(HE)和Nissl染色观察海马神经元病理变化,Tunel染色观察细胞凋亡情况,Westernblot、qPCR检测凋亡相关因子B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白和mRNA表达量。结果 与I/R组相比,HM组神经功能评分下降和脑梗死面积
2、减小(P0.05),Tunel阳性细胞数量减少(P0.05),Bax和Caspase-3蛋白mRNA表达量减少,而Bcl-2表达量显著增加(P0.05)。结论 氢吗啡酮具有神经保护作用,可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。【关键词】氢吗啡酮;脑缺血-再灌注;大鼠;海马神经元DOI:10.3969/j.issn.1000-8535.2023.07.002CerebralprotectiveeffectofhydromorphoneinratsLIYueyang1,FANGGang1,GAOManhai2,LIRong2,WANGJing21 Baotou Medical College,Baotou 0
3、14040,China2 Department of Anesthesiology,the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College,Inner Mongolia University of Science and Technology Baotou Medical College,Baotou 014010,China【Abstract】Objective Toinvestigatetheeffectofhydromorphoneoncerebralischemia-reperfusioninjuryinratsMethods F
4、orty-fiveSDmaleratswererandomlydividedintothreegroups:sham-operatedgroup(Shamgroup),cerebralischemia-reperfusiongroup(I/Rgroup)andhydromorphonegroup(HMgroup)TheanimalmodelswereconstructedusingtheZea-Longamodifiedlinetetheringmethod,andneurologicalfunctionwasevaluatedbytheZea-Longascoreafter24hofrepe
5、rfusionTTCstainingwasusedtodetectthevolumeofcerebralinfarction,hematoxylin-eosin(HE)andNisslstainingwereusedtoobservethepathologicalchangesofhippocampalneurons,andTunelstainingwasusedtoobserveapoptosis,Westernblot,qPCRwereusedtodetectapoptosisBcl-2,Bcl-2-associatedXprotein(Bax)andcysteineprotease(Ca
6、spase)-3proteinandmRNAexpressionResults ComparedwiththeI/Rgroup,theHMgroupshowedlowerneurologicalfunctionscoresandcerebralinfarctarea(P0.05),smallernumberofTunel-positivecells(P0.05),lessmRNAexpressionofBaxandCaspase-3proteinsandsignificantlyhigherexpressionofBcl-2(P0.05)Conclusions Hydromorphonehas
7、neuroprotectiveeffectsandcanreducecerebralischemia-reperfusioninjuryinrats【Keywords】hydromorphone;cerebralischemia-reperfusion;rats;hippocampalneurons基金项目:包头市卫生健康委科技计划项目(wsjkwkj001)通信作者:王静,E-mail:脑卒中是我国成年人致死致残的首位原因,患者可出现失语、认知功能障碍、偏瘫等不同程度的神经后遗症,患者生活质量严重下降1-2。治疗急性脑梗死的方法主要有溶栓治疗,降压治疗等,目的是使缺血的脑组织恢复血供,即再灌
8、注,但这个过程对脑组织可产生有害影响,即缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤3-5。因此最理想的治疗方案是既能恢复血供又能减少论著广州医药23年07期.indd 102023/8/10 17:05:55http:/11脑组织损伤。氢吗啡酮是吗啡的衍生物,作用于阿片受体,具有效能高、不良反应少、镇痛效力是吗啡的56倍等特点,可作为吗啡的公认替代品6-7。但是氢吗啡酮的脑保护作用鲜有研究,本次研究建立I/R损伤模型,探讨氢吗啡酮的脑保护作用,为新药的研发提供实验基础。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1实验动物清洁级SD雄性大鼠,体重250280g,由内蒙古格亿商
9、贸有限公司提供,动物生产许可证号为SCXK(京)2019-0010,本研究所有动物实验方案均经本院医学伦理委员会批准,并且均按照国家实验动物喂养和运作指南的指导方针进行。所有大鼠在包头医学院动物房中饲养,饲养条件:充足的饮水和饮食,12h明暗交换,保持环境和鼠笼干净清洁。1.1.2 主要试剂和仪器 氢吗啡酮注射液(2mL:2mg),湖北宜昌人福药业有限公司生产;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride,TTC)、尼氏染色液、Caspase-3抗体、Bcl-2抗体及Bax抗体(货号分别为T8170、G1436、K107625P、K0035
10、05P、K008076P),中国Solarbio生产,苏木精-伊红染色液(货号为BA-4041),珠海贝索生物技术有限公司;荧光定量PCR仪(ABI7500),光学显微镜(OLYMPUSBX43)等。1.2 方法1.2.1 建立大鼠I/R模型及分组给药 45只大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)和氢吗啡酮组(HM组)。依照文献8构建脑I/R损伤模型,具体方法为:2%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉,充分暴露左侧颈总动脉,颈内动脉及颈外动脉,颈总动脉近心端剪一小口插入线拴(中国北京西浓科技有限公司,直径为0.25mm),线拴经颈总及颈内动脉置入大脑中动脉,缺血2h
11、后拔出线拴至颈内与颈外动脉分叉处。缺血前20min,HM组经颈内静脉注射氢吗啡酮0.2mg/kg,其余两组注射等量生理盐水。造模成功后,进行神经功能评分,随后麻醉处死,断头取脑并进行后续实验项目。1.2.2Zea-Longa神经功能评分造模成功24h后,参照文献9进行神经功能测定,评04分,分值越高表示神经缺损越严重,13分者都可认为造模成功,0分无症状者及4分症状过重者认为造模失败,予以剔除。1.2.3 脑梗死体积的测定 在完成上述步骤后,每组随机取出3只大鼠。断头取脑,将取出的脑组织迅速放入20冰箱中冰冻30min,冠状位切成5片,放入提前备好的2%TTC染液中进行染色,拍照,ImageJ
12、软件分析脑梗死体积,采用梗死体积比率表示梗死体积(梗死体积比率各切面梗死面积之和/各切面面积之和100%)。1.2.4 HE染色 组织样本脱水、石蜡包埋,切成5m厚石蜡切片,苏木精染液染色,酒精再次脱水后,伊红染液染色,光学显微镜观察,选取目标区域进行拍照、分析。1.2.5 Nissl染色 脑组织脱水、包埋切片,用1%甲苯胺蓝染色液染色30min,并用光学显微镜观察各个切片中的尼氏小体,选取目标区域进行拍照、分析。1.2.6 Tunel染色检测细胞凋亡 脑组织石蜡包埋后切成6m的厚石蜡切片,脱蜡复水后滴入蛋白酶K,室温下孵育20min后加入Tunel染色液。荧光显微镜观察,拍照并分析。1.2.
13、7 qPCR检测 大鼠断头取脑,取50mg组织用TRIzol提取组织样本中总RNA,并检测其质量和浓度,进行反转录操作,上机进行qPCR检,用美国Bio-Rad公司荧光定量PCR仪检RNA含量,并测采用2-Ct法进行数据的相对定量分析。1.2.8 Westernblot 取损伤侧海马组织,加入RIPA裂解液,在4下,12000r/min离心15min,收集上清液并加入缓冲液后煮沸。最后用BCA法定量蛋白。将等量的蛋白质置于SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离,经湿法转膜方法将其印迹到PVDF膜上。转膜结束后用5%脱脂奶粉室温孵育封闭1h,TBST缓冲液清洗3次,4下孵育一抗过夜,随后用TBST缓冲液清洗
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 吗啡 大鼠 保护 作用
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。