基于血清蛋白质组学分析桥本甲状腺炎合并肥胖患者血清蛋白质差异表达.pdf
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1、 年 月第 卷 第 期基础医学与临床 收稿日期:修回日期:基金项目:新疆自治区自然科学基金()通信作者():文章编号:()研究论文基于血清蛋白质组学分析桥本甲状腺炎合并肥胖患者血清蛋白质差异表达马国英,加孜热亚再依拿提,李素丽,郭艳英,新疆糖尿病临床医学研究中心,新疆 乌鲁木齐;新疆内分泌糖尿病研究所,新疆 乌鲁木齐;新疆维吾尔自治区人民医院 内分泌科,新疆 乌鲁木齐 摘要:目的 探讨体质量对桥本甲状腺炎()患者中肥胖与正常体质量对血清中蛋白质表达差异的影响,探寻存在的差异蛋白质与相关通路。方法 收集桥本甲状腺炎患者中肥胖与正常体质量患者血清各 例,健康对照组血清 人,提取血清中蛋白质,使用胰
2、蛋白酶降解,进行液相色谱质谱联用分析,与对照组对比分析,鉴定两组差异蛋白质的表达变化,并进行生物信息学分析。结果 检测到正常体质量的桥本甲状腺炎组与对照组的血清差异蛋白质共有 个,差异表达的蛋白质参与的通路有 信号通路,心肌细胞中肾上腺素能信号通路和心肌收缩等;桥本甲状腺炎合并肥胖组与对照组进行对比,血清中差异蛋白质共有 个,差异蛋白质相关的通路有 通道的炎性反应介质调节,型凝集素受体信号通路,信号通路;正常体质量的桥本甲状腺炎和桥本甲状腺炎合并肥胖组对比,结果显示血清中差异蛋白质共有 个,差异蛋白质富集的通路是雌激素信号通路。结论 桥本甲状腺炎患者是否合并肥胖对血清中蛋白质表达具有一定的影响
3、,合并肥胖时可能增加向甲状腺癌转化的风险。该结论为桥本甲状腺炎进一步的研究提供理论基础,对临床诊断与治疗具有重要意义。关键词:桥本甲状腺炎;肥胖;蛋白质组学;差异蛋白质中图分类号:文献标志码:,;,;,:(),基础医学与临床 (),;,;,;,:;桥本甲状腺炎(,)又称慢性淋巴性甲状腺炎,是临床常见的自身免疫性疾病之一,据统计每 人中就有 人为 患者。患者的主要特征是体内甲状腺过氧化物酶抗体(,)和甲状腺球蛋白抗体(,)水平升高。高 水平与肥胖密切相关,肥胖人群中患 和 升高的风险分别增加了 和。普遍观点认为肥胖继发于甲状腺功能障碍,但近期研究观点认为甲状腺的功能异常可能受肥胖影响,但对于甲状
4、腺疾病与肥胖之间的具体作用机制还未见报道。材料与方法 材料 资料收集:将在三甲医院就诊的桥本甲状腺炎患者及健康体检者作为参与者,在获得单位伦理委员会的批准书(审批文号:)及受试者签署的知情同意书后,收集参与者的一般信息,甲状腺功能检查包括甲状腺相关激素以及甲状腺自身抗体的检测结果。将符合桥本甲状腺炎诊断结果的患者纳入研究,根据 评分标准进行分类,并将健康体检参与者作为对照,分为对照组()(人),桥本甲状腺炎正常体质量组()(例),桥本甲状腺炎肥胖组()(例)收集各组参与者血样,放置在 下 后,离心 ,收集血清,保存于 备用。试剂(盒):蛋白质提取试剂盒、胰蛋白酶(公司,、);二硫苏糖醇、碘乙酰
5、胺(公司,、)。方法 提取蛋白质:从 冰箱中取出样品,离心 ,去除细胞碎片,将上清液转移至新的离心管,使用 试剂盒进行蛋白质浓度测定。使用高丰度蛋白质去除试剂盒,按照说明书去除高丰度蛋白质。胰蛋白酶酶解:从 组中取等量的蛋白质进行酶解,用裂解液将体积调整至一致,再加入二硫苏糖醇(,)使其终浓度为 。之后加入碘乙酰胺(,)使其终浓度为 。将烷基化好的样本转移至超滤管,用 尿素置换 次,再用置换 置换尿素 次,按蛋白酶 蛋白 的比例加入胰蛋白酶,酶解过夜。离心后回收肽段,再用超纯水回收肽段 次,将 次回收的肽段溶液混合。液相色谱质谱联用(,)分析:分离蛋白:将提取的肽段用液相色谱流动相 相溶解,流
6、动相(甲酸乙腈的水溶液),再使用超高效液相系统进行分离。流动相(甲酸乙腈的水溶液),设置液相梯度:,;,;,;,流速设置为马国英 基于血清蛋白质组学分析桥本甲状腺炎合并肥胖患者血清蛋白质差异表达 。质谱分析:分离的肽段注入 离子源中进行电离,然后进行质谱分析。离子源电压设置为 ,使用高分辨的 对肽段母离子及其二级碎片进行检测和分析。一级质谱扫描范围设置为 ,二级质谱扫描范围则固定起点为 。数据采集选择信号强度最高的前 肽段母离子依次进入 碰撞池使用 的碎裂能量进行碎裂,进行二级质谱分析。自动增益控制()设置为 ,信号阈值设置为,最大注入时间设置为 ,串联质谱扫描的动态排除时间设置为 ,避免母离
7、子的重复扫描。数据库搜索:二级质谱数据使用 进行检索。检索参数设置:数据库为(条序列),为降低假阳性率而添加了反库;为消除鉴定结果中污染蛋白的影响,在数据库中加入了常见的污染库。酶切方式设置为(),漏切位点数设为;肽段最小长度设置为 个氨基酸残基;肽段最大修饰数设为;和 的一级母离子质量误差容忍度分别设为 ()和 ,二级碎片离子的质量误差容忍度为 。定量方法设置为非标定量技术(,),蛋白鉴定、肽匹配图谱(,)鉴定的假阳性率都设置为。生物信息学分析:分别使用、等软件对差异蛋白进行蛋白注释、功能分类、功能富集分析、聚类分析及蛋白相互作用分析。统计学分析计量资料每组各个标本的相对定量值以 为底数取对
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