PMN-MDSCs细胞对异基因造血干细胞移植术后患者T淋巴细胞增殖及干扰素-γ分泌的影响.pdf
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1、基础研究 细胞对异基因造血干细胞移植术后患者 淋巴细胞增殖及干扰素 分泌的影响陈璐,倪明,王力,潘成云,亢倩,詹云,赵鹏,王季石,(贵州医科大学附属医院 血液内科,贵州 贵阳 ;贵州医科大学 临床医学院,贵州 贵阳 ;苏州大学附属第一医院国家血液病临床研究中心,江苏 苏州 )摘要目的探讨多形核的髓系来源抑制性细胞()对异基因造血干细胞移植()术后患者 淋巴细胞增殖和干扰素 ()分泌的影响。方法抽取 例 术后患者第 天及 例健康供者任意时间点空腹全血标本,先采用中性粒细胞分离液分离 组受检者外周血含 与 细胞的白细胞、再采用流式分选出患者 与 细胞及健康供者 ;采用瑞氏 姬姆萨()染色观察 组受
2、检者外周血 的形态学特征,法检测、及 时 术后患者外周血 细胞凋亡情况,羧基荧光素琥珀酰亚胺酯()染色和荧光酶联免疫斑点()法检测 术后患者外周血 对 细胞增殖及 表达的影响。结果 术后患者 多呈不成熟粒细胞表型,健康供者 呈成熟粒细胞表型,且患者 于 时大部分仍处于存活状态;和 实验表明 术后患者 可抑制其 淋巴细胞的增殖、分裂及胞内 的释放。结论 可抑制 术后患者 淋巴细胞的增殖及分泌 。关键词淋巴细胞;细胞增殖;干扰素 ;多形核的髓系来源抑制性细胞;免疫抑制 中图分类号 文献标识码 文章编号 ():,(,;,;,)()()();第 卷第 期 年 月贵 州 医 科 大 学 学 报 基金项目
3、 国家自然科学基金();国家血液系统疾病临床医学研究中心转化研究课题();贵州省科学技术基金();贵州医科大学附属医院 面上基金培育计划项目()贵州医科大学 级硕士研究生通信作者 :引用本文:陈璐,倪明,王力,等 细胞对异基因造血干细胞移植术后患者 淋巴细胞增殖及干扰素 分泌的影响 贵州医科大学学报,():,;,;()(),;异基因造血干细胞移植(,)术后可发生多种并发症,其中较典型且严重的为移植物抗宿主病(,),及 度急性 (,)患者的年生存率分别为 和 。随着免疫学研究的不断进展,有学者认为免疫调节疗法取代目前的免疫抑制疗法是未来 治疗所追求的目标 。髓系来源的抑制性细胞(,)是一群具有免
4、疫抑制性的髓细胞,最主要的功能是抑制由固有免疫和获得性免疫介导的反应 。大量研究表明,已成为癌症、感染、慢性炎症及自身免疫性疾病中的主要免疫抑制细胞,提示 可能有助于控制 。目前,针对各亚型 通过不同机制预防及控制 的研究基本仅限于动物模型 ,体外实验也仅限于现象学观察,缺乏相关机制学研究 ,。因此,本研究主要通过流式分选出 术后患者新鲜外周血中多形核的 (,)及 淋巴细胞,采用共培养方式探究人 对 淋巴细胞增殖、经典淋巴因子干扰素(,)分泌的免疫抑制作用,为临床 作为 防治策略提供理论和实验依据。材料与方法 实验材料 样本来源及分组选取 年 月 年 月 术后患者 例及健康供者例,要求符合术前
5、接受清髓治疗、术后临床确诊巨细胞病毒(,)感染,排除行自体造血干细胞移植(,)术患者、临床资料不完善者及患传染性疾病(如乙肝、梅毒、艾滋病等)患者。取患者移植完成后第 天时及健康供者任意时间点新鲜外周血(未过夜)作为标本来源。本研究已根据 赫尔辛基宣言 获得了病人以及供者知情同意。主要试剂及仪器抗分化簇 抗体 (,)、抗人类白细胞抗原 抗体(,)及 (美国 公司),、及 (美国 公司),(中国 公 司),、红细胞裂解液及细胞破膜液(美国 公司),羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(,)细胞增殖与示踪检测试剂盒、单抗偶联磁珠(美国 公司),人白细胞介素 (,)及人白细胞介素 重组蛋白(,;美 国 公司),人
6、外周血中性粒细胞分离液、瑞氏 姬姆萨复合染色试剂盒及 (中国 公司),荧光双染细胞凋亡检测试剂盒(中国杭州联贵 州 医 科 大 学 学 报 卷科生物技术股份有限公司),萤光酶联免疫斑点(,)试剂盒、肽段池(,;美国 公司),氨基放线菌素 (,)、标准透明 孔 型底细胞培养板 中国爱必信(上海)生物科技有限公司,磷酸盐缓冲液(,;中国兰杰柯科技有限公司),()培养基、青霉素 链霉素混合液(中国武汉普诺赛生命科技有限公司),胎牛血清(,;中国浙江天杭生物科技股份有限公司),完全培养基配方为 青霉素 链霉素混合液 ,流式试管(墨西哥 公司),流式分选仪和流式细胞仪(美国 公司),型显微镜(日本 公司
7、),荧光酶联免疫斑点分析仪(德国 公司)。研究方法 血液标本抽取 术后患者移植完成后第 天时及健康供者任一时间点的空腹外周血。分离 与 细胞组受检者新鲜外周血标本置于 试管中,加预先放置的中性粒细胞分离液 ,室温下 离心 ,吸出分层的 层细胞(包含了所有白细胞),缓冲液洗涤 次(离心 )。分选 与 细胞 取“”项下 组受检者白细胞置于 流式试管中,室温下 离心 ,缓冲液 重悬,分别加 及 细胞的分选抗体组合,即对于 使用 、及 ,对于 细胞则使用 、及 进行染色,常温避光孵育 ;缓冲液 洗涤细胞 次,加 红细胞裂解液 裂解红细胞,常温避光孵育 ;缓冲液洗涤,完全培养基重悬。遵循 手册建立无菌管
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