Caspase-3基因多态性与腰椎间盘突出症的关系.pdf
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1、收稿日期:2022-09-08;修订日期:2022-11-13作者简介:梁莹莹(1995-),女,河南籍,硕士研究生研究方向:骨伤科通信作者:黄遂柱电子邮箱:临床论著Caspase-3 基因多态性与腰椎间盘突出症的关系梁莹莹1,黄遂柱2(1.河南中医药大学,河南郑州 450000;2.郑州颐和医院,河南郑州 450000)摘要:目的 探讨 Caspase-3 基因多态性与腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)的关系。方法 选择2021 年1 月2022 年 7 月在本院就诊的 LDH 患者 137 例作为研究组,选择同期在本院健康体检的受试者 137 例作为对照
2、组。观察两组受试者 Caspase-3 基因中的三个 SNP 位点 rs4647693、rs4647610 和 rs12108497 单核苷酸多态性,观察研究组不同 rs4647693、rs4647610 和 rs12108497 基因型患者的临床资料差异。结果 研究组和对照组 Caspase-3 rs4647693 基因型观察值和期望值吻合度良好,符合 H-W 平衡定律(x2研究组=3.153,P=0.076;x2对照组=2.902,P=0.088)。两组受试者基因型和等位基因频率差异均存在统计学意义(P0.05)。研究组和对照组 Caspase-3 rs4647610 基因型和期望值吻合度
3、良好,符合 H-W 平衡定律(x2对照组=2.058,P=0.151;x2研究组=3.614,P=0.057)。两组受试者基因型和等位基因差异均存在统计学意义(P0.05)。研究组和对照组 Caspase-3 rs12108497 基因型和期望值吻合度良好,符合 H-W 平衡定律(x2对照组=3.367,P=0.067;x2研究组=2.243,P=0.134)。两组受试者基因型和等位基因差异均存在统计学意义(P0.05)。与 rs4647693 GG 基因型比较,rs4647693 GA+AA 基因型患者脊柱负荷 1 2 级患者比例显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。与 rs464761
4、0 AA 基因型比较,rs4647610 AG+GG 基因型患者 LDH 家族史和脊柱负荷 3 4 级比例明显升高(P0.05);与 rs12108497 TT 基因型比较,TC+CC 基因型患者 LDH 家族史和脊柱负荷 3 4 级患者比例显著升高(P0.05)。结论 Caspase-3 rs4647693、rs4647610 和 rs12108497 SNP 与 LDH 的遗传易感性密切相关,Caspase-3 基因多态性与 LDH 风险的影响可能也受脊柱负荷等级和家族史影响。关键词:腰椎间盘突出症;椎间盘退变;细胞凋亡;半胱氨酸蛋白酶;基因多态性中图分类号:R681.5 文献标识码:A
5、文章编号:1005-7234(2023)04-0533-04DOI:10.3969/j.issn.1005-7234.2023.04.008Relationship between caspase-3 gene polymorphism and lumbardisc herniationLIANG Ying-ying1,HUANG Sui-zhu2(1.Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou,Henan 450000,China;2.Zhengzhou Yihe Hospital,Zhengzhou,Henan 45
6、0000,China)Abstract:Objective To investigate the relationship between caspase-3 gene polymorphism and lumbar disc herniation(LDH).Methods A total of 137 patients with LDH who were hospitalized in our hospital from January 2021 July 2022 were selected as thestudy group,and 137 subjects who underwent
7、physical examination in our hospital during the same period were selected as the controlgroup.The single nucleotide polymorphisms of three SNP sites rs4647693,rs4647610 and rs12108497 in caspase-3 gene of the twogroups were observed,and the clinical data of patients with different genotypes rs464769
8、3,rs4647610 and rs12108497 in the studygroup were observed.Results The observed and expected values of caspase-3 rs4647693 genotype in the study group and the controlgroup were in good agreement,which conformed to the H-W equilibrium law(2study group=3.153,P=0.076;2control group=2.902,P=0.088).There
9、 were significant differences in genotype and allele frequency between the two groups(P0.05).The genotype of caspase-3 rs4647610 in the study group and the control group were in good agreement with the expected value,which conformed to the H-Wequilibrium law(2control group=2.058,P=0.151;2study group
10、=3.614,P=0.057).There were significant differences in genotype andallele between the two groups(P0.05).The genotype of caspase-3 rs12108497 in the study group and the control group were in goodagreement with the expected value,which conformed to the H-W equilibrium law(2control group=3.367,P=0.067;2
11、study group=2.243,P=0.134).There were significant differences in genotype and allele between the two groups(P0.05).Compared with rs4647693 GGgenotype,rs4647693 GA+AA genotype significantly increased theproportion of patients with grade 1-2 spinal load(P 0.05).Compared with rs4647610 AA genotype,rs46
12、47610 AG+GG genotypepatients had significantly higher LDH family history and spinal loadgrade 3-4(P0.05).Compared with rs12108497 TT genotype,theLDH family history and spinal load of patients with TC+CC genotype335颈腰痛杂志 2023 年第 44 卷第 4 期 The Journal of Cervicodynia and Lumbodynia 2023,Vol.44 No.4wer
13、e significantly higher(P0.05),有可比性。见表 1。表 1 两组患者一般资料比较组别n性别(男/女,例)年龄(岁)体质量指数(kg/m2)对照组13781/5639.4511.8123.432.85研究组13781/5639.6610.8223.683.07t/20.0000.3710.299P1.0000.7120.7661.2 Caspase-3 基因多态性检测入组后,抽取两组受试者空腹外周静脉血2 mL,加入柠檬酸钠抗凝,保存于 4冰箱中,根据制造商说明,使用全血基因组 DNA 提取试剂盒从全血样本中提取基因组 DNA。采用 1%球脂糖凝胶电液和分光光度计测定
14、 DNA 的纯度和浓度。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)限制性片段长度多态性检测 Caspase-3 基因多态性。通过 Primer Pre-imier 5.0 软件根据 Caspase-3 位点设计和验证 PCR引物,引物由大连宝生物工程公司合成。测序结果为:rs4647693:正向 5-AATTCTGTTGCCACCTTTCG-3,反 向 5-ACCTTCTGCGTGTTTGCTCT-3;RS4647610:正向 5-AACCGCTTCAAGAAATCCTG-3,反 向 5 -ATCTGCCTTGTTGAGCCACT-3;RS12108497:正向
15、 5-AGCCGCTCACGCATCATAGT-3,反向 5-AGTCCGCATCCAGCCAGGTA-3。PCR 反应体系包括:1 L 正向和反向引物、2.0 L模板 DNA、7 mL 的混合 PCR 缓冲液(2)和 7 mL 蒸馏水。PCR 条件为:在 94下进行 5 min 的初始变性,在 94下进行 30 s 的变性,在 58 下进行 30 s的退火,在72下进行30 s 的延伸,共34 个周期,然后在 72下延长 5 min。对 PCR 产物进行 RFLP 检测。整个反应系统包含 10 L PCR 产物、12.5 L蒸馏水、2 L 酶消化缓冲液和 0.5 L 核酸内切酶,并在 37下
16、进行 4 h 的核酸内切酶消化。消化产物在 1.5%琼脂糖凝胶上运行,用溴化乙锭染色,并在紫外线凝胶成像系统下观察和拍照。1.3 临床资料收集收集研究组患者性别、年龄、体质量指数、简化版肌肉骨骼功能评 估 问 卷(short musculoskeletalfunction assessments,SMFA)、职业、吸烟、饮酒、体育锻炼、睡眠条件、腰部负荷、家族史等资料。1.4 统计学方法采用 SPSS 25.0 软件进行数据分析,采用 Hardy-Weinberg 遗传平衡检验评估两组患者 SNP 观察值和期望值的吻合度,符合正态分布的计量资料表示为“均数标准差”,组间比较采用 t 检验;计数
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