高产酸性蛋白酶白曲霉培养条件的优化研究_曹润洁.pdf
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1、酿酒科技2023年第4期(总第346期)LIQUOR-MAKING SCIENCE&TECHNOLOGY2023 No.4(Tol.346)DOI:10.13746/j.njkj.2022318作者简介:曹润洁。高产酸性蛋白酶白曲霉培养条件的优化研究曹润洁1,杜成龙2,何宏魁1,2,马金同1,王冕1,袁志强2,周鹏磊1,马叶胜2(1.安徽瑞思威尔科技有限公司,安徽 亳州 236800;2.安徽古井贡酒股份有限公司,安徽 亳州 236800)摘要:以实验室保藏的白曲霉菌株为目标菌株,从生长条件、产酶活力的关键工艺因素进行研究分析,以提高白曲霉菌株酸性蛋白酶活力为目的,探究高产酸性蛋白酶白曲霉的实
2、验室最佳培养条件。研究结果表明,以麸皮为主要原料,培养基水分添加量为100%,培养基pH值为5,培养温度38,培养时间72 h,为该实验菌株的实验室最佳培养条件。关键词:白曲霉;酸性蛋白酶活力;最佳培养条件中图分类号:TS262.3;TS261.1文献标识码:A文章编号:1001-9286(2023)04-0028-04Optimization of Cultivation Conditions of Aspergillus albicanswith High Yield of Acid ProteaseCAO Runjie1,DU Chenglong2,HE Hongkui1,2,MA Ji
3、ntong1,WANG Mian1,YUAN Zhiqiang2,ZHOU Penglei1and MAYesheng2(1.Riswell Technology Co.Ltd.,Bozhou,Anhui 236800;2.Gujing Gongjiu Co.Ltd.,Bozhou,Anhui 236800,China)Abstract:In order to improve the acid protease activity of Aspergillus albicans,the key technological factors influencing the growthconditi
4、ons and enzyme activity of Aspergillus albicans were studied,and the best laboratory cultivation conditions of Aspergillus albi-cans with high yield of acid protease was explored.The best laboratory cultivation conditions were determined as follows:the mainraw material was bran,the water content of
5、the medium was 100%,the pH value of the medium was 5,the cultivation temperaturewas 38,and the cultivation time was 72 h.Key words:Aspergillus albicans;acid protease activity;optimum cultivation conditions酸性蛋白酶可应用于不同工艺、不同香型白酒的生产,能在酸性环境下水解蛋白质,可以促进微生物生长及酶的形成,可形成白酒风味物质,使酒体丰满醇厚,适合在酿酒的环境中发挥作用,有改善白酒风味的作用,
6、并能提高原酒品质1。白曲霉具有蛋白酶活性强、耐酸度高、培养条件粗放等特点2。本研究以实验室保藏的白曲霉菌株为目标菌株,从生长条件、产酶活力的关键工艺因素进行研究分析,以提高白曲霉菌株的酸性蛋白酶活力为目的,探究高产酸性蛋白酶白曲霉实验室最佳培养条件,对其应用于酿酒生产具有指导意义3。1材料与方法1.1材料、试剂及仪器1.1.1试验原料及耗材试验菌株:本公司选育、保藏的白曲霉(Asper-gillus albicans)菌株M047,该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号是CCTCC M2022054。菌种保藏(斜面)培养基:麦芽粉130.0 g/L,氯霉素0.1 g/L,琼
7、脂15.0 g/L,蒸馏水1000 mL,pH值6.00.2(25 下),121 灭菌20 min。种子(平板)培养基:马铃薯浸出粉6.0 g/L,葡萄糖 20.0 g/L,氯霉素 0.1 g/L,琼脂 15.0 g,蒸馏2828水 1000 mL,pH 值 5.45.8(25 下),115 灭菌20 min。液体培养基:1份高粱粉,加水4份蒸煮0.51 h,按淀粉酶使用说明加入淀粉酶进行液化,液化后补加5575 温水1份,搅拌均匀,在5575 糖化 0.51 h,稀碘液试之不显蓝色,用细纱布过滤,测量溶液的糖度并调整为810波美度,自然pH值,115 灭菌20 min后使用。三角瓶菌种培养基
8、:250 mL 三角瓶装入 20 g麸皮和20 mL水,搅拌均匀后封口膜封口,自然pH值,121 灭菌20 min。1.1.2试剂及耗材磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钠、氢氧化钠、三氯乙酸、乳酸、甘油(均为分析纯),国药集团;琼脂(BR),国药集团;干酪素(BR),AOBOX;福林酚试剂(BR),罗恩试剂。1.1.3仪器设备ME204E型电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;一列八孔型电热恒温水浴锅,龙口市先科仪器有限公司;SX-700型高压灭菌锅,TOMYKOGYO公司;BSC-1300A2型生物安全柜,苏净集团苏州安泰空气技术有限公司;MHP-100智能霉菌培养箱,
9、上海三发科学仪器有限公司;UV9000型紫外可见光分光光度计,上海元析仪器有限公司;PhS3C/0-14 型 pH 计,上海仪电科学仪器有限公司。1.2试验方法1.2.1菌种活化将本公司选育、保藏的白曲霉菌株M047制成孢子菌悬液,进行平板涂布,置于3032 恒温培养48 h,做平板划线培养4。1.2.2平板菌种的制备将活化后的白曲霉菌株点接于种子(平板)培养基上,置于 3032 智能霉菌培养箱中,培养3648 h,白曲霉成熟后即可使用。1.2.3三角瓶菌种制备250 mL三角瓶装入20 g麸皮和20 mL水,搅拌均匀后封口膜或者棉塞进行封口,每个三角瓶物料厚度在2 cm左右,于121 灭菌3
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