红霉素抑制PI3K_Akt...单核细胞炎性反应的效果研究_孙雪皎.pdf
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1、论著基础研究 :网络首发 :()红霉素抑制 通路增加 蛋白表达减轻烟草烟雾暴露下单核细胞炎性反应的效果研究孙雪皎,陈琳,陈慧,李程,蓝官引(柳州市人民医院呼吸与危重症医学科,广西柳州 )摘要目的研究红霉素通过抑制 通路增加 蛋白表达从而减轻烟草烟雾暴露下单核细胞炎性反应的效果。方法以人单核细胞株()为研究对象,采用烟草烟雾提取物()制造细胞氧化应激模型,分为空白对照()组、组(刺激细胞)、红霉素组(红霉素预孵育 刺激细胞)、抑制剂组(通路抑制剂 预孵育 刺激细胞)等组。根据转染 干扰细胞中 蛋白的表达,分为 对照组、组、红霉素组、组、组、红霉素组等组。采用逆转录聚合酶链式反应()检测各组细胞中
2、 、的表达。采用 检测各组细胞内 、核因子()蛋白的水平。结果与空白对照组比较,组白细胞介素()水平明显升高,及 蛋白的表达水平上升,蛋白及 的表达水平下降。红霉素组和抑制剂组 水平较 组下降,及 蛋白的表达水平下降,蛋白及 的表达水平有所升高。不同细胞氧化应激模型组 水平比较差异无统计学意义()。组 的表达水平较 组明显降低,但与 组、红霉素组比较无明显差异;组 表达水平下降,而 红霉素组表达水平上升;组及 组 及 表达水平上升,但 红霉素组、红霉素组表达水平下降。组与 组 及 表达水平无明显差异。不同干扰组间 蛋白的表达水平无明显差异。结论红霉素可通过抑制 通路增加 蛋白的表达减轻烟草烟雾
3、暴露下单核细胞的炎性反应。关键词红霉素;烟草烟雾提取物;单核细胞;蛋白;通路炎症 中图法分类号 文献标识码 文章编号 (),(,)()()(),(),:(),(),(),(),重庆医学 年月第 卷第期基金项目:广西壮族自治区自然科学基金(青年基金)项目();广西壮族自治区柳州市科技局科技计划项目()。作者简介:孙雪皎(),主任医师,博士,主要从事慢性阻塞性肺疾病发病机制及治疗方面的研究。通信作者,:。(),(),(),(),(),;慢性阻塞性肺疾病()是累及肺部及全身的慢性炎症性疾病,疾病呈进行性发展,严重的 致残率及致死率较高,会影响患者生活质量,给患者带来极大的心理负担及经济负担。烟草烟雾
4、及环境污染等可引起氧化应激,导致氧化损伤,进而直接损伤气道上皮、加重气道的炎症反应,亦可导致蛋白酶抗蛋白酶失衡等,最终导致气流受限。患者脱离氧化应激环境后气流受限不能完全逆转,呈持续性的气流受限,这是导致 发生、发展的主要原因之一。红系衍生的核因子相关因子()是具有调节抗氧化基因、维持细胞内氧化还原平衡、抑制凋亡及炎症等多种生物活性的关键转录因子,其与多种细胞因子相互关联,从而发挥多重保护作用。与氧化应激、炎症反应、呼吸系统疾病、恶性肿瘤、癌前病变 及 心 血 管 疾 病 等 的 发 生、发 展 有 着 密 切 的 联系。近年来,研究发现 在 的发生、发展中具有重要作用。有研究表明,信号通路激
5、活 ,进而对抗氧化应激,维持氧化抗氧化平衡。然而,是否有药物可以通过作用于 进而改善 患者的炎症反应,国内外尚无类似研究。作者以此为切入点,以单核细胞株(细胞)为研究对象,观察红霉素是否能够通过作用于 蛋白的表达,减轻烟草烟雾暴露下单核细胞的炎症反应,同时验证在单核细胞炎症反应中,通路与 的关系,以及 是否受 通路的调控。本研究将为 的防治提供新的思路。材料与方法材料以人 细胞为研究对象,购于中国科学院细胞库。方法分组采用烟草烟雾提取物()制造细胞氧化应激模型,分为以下组:空白对照组(),细胞培养液培养 细胞,不给予红霉素及 干预;组(),给予 刺激细胞过夜;红霉素组(),给予红霉素预孵育后予
6、 刺激过夜;抑制剂组(),给予 抑制剂 预孵育后予 刺激过夜。根据转染 干扰细胞 蛋白表达方式,分为以下组:对照组(),采用细胞培养液培养,不给予红霉素及 干预;组(),给予 刺激细胞过夜;红霉素组(),给予红霉素预孵育 后予 刺激过夜;组(),应用脂质体法 转染 细胞,转染后的细胞应用细胞培养液培养;组(),转染后的细胞给予 刺激细胞过夜;红霉素组(),转染后的细胞给予红霉素预孵育后予 刺激过夜。细胞的培养 细胞为悬浮细胞,采用由 培养基及胎牛血清配置、含 胎牛血清的培养基培养,于二氧化碳培养箱、环境中温育。培养基存储。严格按照无菌操作,无菌台使用前打开紫外灯照射 ,各种所需的容器、枪头等物
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