THUMPD3⁃AS1靶向miR⁃877对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.pdf
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1、 靶向 对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 基金项目:海南省卫生健康行业科研项目()海南西部中心医院肿瘤内科 海南医学院第二附属医院肿瘤内科 海南儋州 海南西部中心医院肿瘤内科卢宏全,黄国定,林 影,张诚胜【摘 要】目的 探讨 反义 ()通过靶向微小()调控肝细胞癌()细胞增殖、迁移和侵袭的潜在机制。方法采用实时荧光定量 检测 在正常肝细胞 和 细胞(、)的表达情况。培养 细胞并分为 组(转染阴性对照序列)、组(转染 干扰序列)、组(转染 干扰序列无关序列)和 组(转染 干扰序列 抑制物)。在线预测结合双荧光素酶报告基因实验验证 和 的靶向关系。采用 法、划痕实验和 小室实验分别评估细胞的增殖、
2、迁移和侵袭能力。检测磷酸化 激酶()和磷酸化信号传导及转录激活因子()的表达。结果与 细胞相比,细胞的 表达升高而 表达降低()。能够结合并负调控 表达。与 组相比,组细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制()。与 组相比,组细胞增殖、迁移和侵袭能力增强()。组的 和 水平低于 组,而 组的 和 水平高于 组()。结论 通过海绵化 促进 细胞增殖、迁移和侵袭并激活 信号,成为 治疗的潜在靶点。【关键词】肝细胞癌;反义 ;微小;侵袭迁移;激酶 信号传导及转录激活因子()信号中图分类号:文献标识码:文章编号:(),【】(),()(),(),(),()(),()()临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,(
3、),(),(),(),【】;()肝细胞癌(,)是世界上癌症相关死亡的主要原因之一,每年全球因肝癌死亡人数达 万,世界卫生组织估计 年将超 万。虽然 的治疗方式多样,如经导管动脉化疗栓塞、肝移植、消融、手术切除、分子靶向治疗等,但由于肝内转移加之复发频繁,患者的 年生存率仍然较低。因此,阐明 的发生发展机制,寻找新的治疗靶点,对于改善患者的预后意义重大。作为一种序列超过 个核苷酸的非编码,长链非编码(,)具有染色质修饰、转录、翻译、剪接和表观遗传调控等多种生物学功能,与癌症的发生密切相关。反义(,)也可称为,最早在肺腺癌中被鉴别出来充当肿瘤预后标志物。之后有学者发现 可以与 和 相互作用加速非小
4、细胞肺癌(,)的自我更新;还能够作为致癌因子促进结直肠癌细胞生长。然而尚不清楚 是否能够在 进展中发挥生物学作用。已被 证 明 可 以 通 过 竞 争 性 结 合 微 小(,)调控靶 表达,以竞争性内源性(,)的方式参与癌症发展。我们通过初步在线预测显示 与 存在互补结合位点,作为肿瘤抑制 在 中表达异常。因此,本研究主要探讨 靶向 对 细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以期为 的诊断与治疗应用提供新思路,现将研究结果报道如下。材料与方法 细胞和主要试剂正常肝上皮细胞 和 细胞购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,购自美国 公司,培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购自美国 公司,、和实时荧光定量 (
5、)试剂盒 购自日本 公司,试剂盒购 自 南 京 曼 夫 特 生 物 科 技 有 限 公 司,兔 源、磷酸化 激酶()和磷酸化信号转导和转录激活因子()一抗及 标记二抗购自美国 公司,条靶向 的小干扰序列(正 义 链:,反义链:;正义链:,反义链:)、序列(正义链:,反义链:)、抑制剂()、模拟物()和 引物均购自通用生物系统(安徽)有限公司。细胞培养和分组 待复苏细胞生长至 汇合时用胰蛋白酶消化传代,达 汇合度更换成无血清培养基进行转染。或 和 或 经 稀释后,与 混合转染细胞。根据转染情况分组为 组、组、组和 组。检测细胞增殖将细胞接种至 孔板,分别在转染后、加入 溶液,培养 后终止反应,波
6、长下用酶标仪测定吸光度值(),根据各孔 值评估细胞的增殖活力。划痕实验 转染后的细胞继续培养,待长满后垂直培养板划一条直线,倒置显微镜下观察并拍 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,照;随后加入无血清的培养基,继续培养 后冲洗脱落细胞碎片,倒置显微镜下观察并拍照,分析细胞划痕愈合情况。小室实验待 包被的小室水化后,将 血清重悬后的细胞接种至小室内,小室外腔加入含 血清的培养液 ,后经多聚甲醛固定和结晶紫染色,显微镜下观察并拍照,随机选取 个视野进行计数,评估侵袭情况。总 提取和 提取总,随后反转录合成 并行,反应条件:;,共 个循环。上游引物:,下游引物:;上游引物:,下游引物:;上 游引物
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