珠芽黄魔芋软腐病病原菌分离与鉴定.pdf
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1、陕西农业科学():./.珠芽黄魔芋软腐病病原菌分离与鉴定张龙芝张金军郑清芳张 艳阮 佳王 梦陈敬民白 玉吴 涛何 斐(.安康市汉滨区农业技术推广站陕西 安康.安康市汉滨区流水镇农业综合服务站陕西 安康.安康学院 现代农业与生物科技学院陕西 安康.安康市农技推广中心 陕西 安康)摘 要:为了对引种驯化的珠芽黄魔芋软腐病病害进行有效防控采集陕西省镇巴县有软腐病发病症状的珠芽黄魔芋叶柄进行病原细菌分离纯化、致病性检测、分离菌株的菌落形态特征观察、生理生化特征及 序列比对分析 试验结果表明从软腐病症状的珠芽黄魔芋叶柄中分离获得了不同形态的 株细菌致病性试验发现其中的 菌株可使珠芽黄魔芋、花魔芋、胡萝卜
2、和白菜离体组织表现出软腐症状并导致珠芽黄魔芋和花魔芋植株发病 分离的 菌株单菌落圆形突起乳黄色边沿光滑整齐杆状菌体 序列分析结果表明该菌株与已报道的胡萝卜软腐果胶杆菌()亲缘关系最近相似度为.这是陕南地区首次报道由胡萝卜软腐果胶杆菌引起的珠芽黄魔芋软腐病害该研究结果有助于为引种驯化的珠芽黄魔芋软腐病害防治提供理论依据关键词:珠芽黄魔芋软腐病病原菌分离鉴定中图分类号:.文献标识码:文章编号:()收稿日期:修回日期:基金项目:陕西省重点研发计划项目()安康市科技计划项目()第一作者简介:张龙芝()女陕西安康人主要从事魔芋提质增效栽培技术研究通信作者:何斐 (.):.:魔芋是多年生天南星科草本植物
3、截止目前全世界已发现并命名的魔芋有 种我国共有 种主要分布在华南、西南地区 魔芋在我国贵州、云南、湖北、陕南等地区有大面积栽培主栽品种主要是花魔芋、白魔芋以及杂交种 伴随着我国各地区魔芋栽培面积的不断增加魔芋各种病虫害日趋严重尤其以细菌性软腐病病害发生最严重、最普遍 引起魔芋软腐病的病原菌主要是胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种(.)和菊果胶杆菌(.)珠芽魔芋(.)及其相关种既可以用实生种子和地下球茎繁殖也可以用叶面着生的珠芽进行繁殖 珠芽魔芋目前主要分布在我国云南、老挝、缅甸及泰国等地区该品种具有抗性强、产量高、繁殖系数大等优势 与花魔芋和白魔芋相比珠芽魔芋在产量、黏度等特性指标方面有明显优势 近年来
4、陕南地区对珠芽魔芋进行了引种驯化、栽培繁殖技术的研究 近年来在魔芋生产中调查发现镇巴县珠芽黄魔芋生产基地出现细菌性软腐病 为了能有效防控珠芽黄魔芋软腐病课题组对实验基地采集的珠芽黄魔芋软腐病叶柄材料进行病原细菌的分离、致病性测定和病原菌菌种鉴定现将研究结果报道如下 材料与方法.材料珠芽黄魔芋软腐病发病的叶柄:取自汉中市镇巴县珠芽黄魔芋种植区.培养基牛肉膏蛋白胨培养基:主要用于细菌的活化与培养.病原菌分离将发病的魔芋叶柄切成小块用 溶液浸泡 无菌水洗 次再用镊子去掉叶柄表面组织在 缓冲液(.)中震荡浸泡 然后取 上清液依次进行梯度稀释取 稀释液均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上条件下培养 用无菌
5、接种针取单菌落反复划线纯化 次获得的纯菌株接种斜面保藏备用.致病性测定分别取自来水冲洗干净的健康魔芋、胡萝卜和白菜依次用 酒精震荡浸泡 无菌水洗 次后切块备用 在放置 张滤纸的培养皿中各加入无菌水 浸润滤纸然后每皿放置一块消毒处理后的组织切块用无菌接种针分别接种上述已纯化活化的菌株每个切块一个接种点每个分离株的致病性检测重复 皿 培养观察记录细菌分离株在各组织切块上的侵染情况魔芋植株致病性检测:挑选健康且长势相近的珠芽黄魔芋和花魔芋植株用无菌注射器在魔芋叶柄处分别注射 菌液(浓度为/)每个菌分别接种 株同时以注射无菌水的植株作为对照 每隔 观察魔芋发病情况.生理生化特性检测明胶液化、吲哚试验、
6、甲基红试验及革兰氏染色反应等参考文献 进行.病原菌的分子鉴定按照 柱式细菌基因组 抽提试剂盒操作说明书的方法步骤提取病原细菌的总 采用 通用引物进行 扩增扩增产物寄送上海生工生物工程有限公司进行测序 测序拼接的序列与 数据库中相关序列进行 比对 用 .软件按照 方法构建系统发育树 结果与分析.软腐病菌分离及致病性检测采用平板分离法从发病珠芽黄魔芋叶柄中共分离获得 种不同形态的单菌落 将分离纯化的菌株分别进行植物离体组织回接接种培养 后其中 株细菌 菌株可使珠芽黄魔芋、花魔芋、胡萝卜和白菜组织腐烂、恶臭表现出明显的软腐症状(图)张龙芝等:珠芽黄魔芋软腐病病原菌分离与鉴定图 菌株 对魔芋、胡萝卜和
7、白菜组织块的侵染现象.珠芽黄魔芋.花魔芋.胡萝卜.白菜图 菌株 对魔芋植株的侵染现象及其菌落形态.珠芽黄魔芋.花魔芋.菌落形态 将该菌株进一步接种珠芽黄魔芋(图)和花魔芋(图)植株进行回接试验 结果显示该菌株 即可使魔芋植株表现出典型的软腐病症状其发病症状与前期田间采集的样品发病症状基本一致 再次采集回接发病的魔芋组织样品从中分离又获得了病原菌其菌落形态和原始分离菌株一致因此确认 菌株即为珠芽黄魔芋软腐病的病原菌.病原细菌菌种鉴定.菌落形态 病原菌 菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上培养形态一致(图)菌落圆形突起乳黄色边沿光滑整齐.生理生化特性 生理生化指标测定结果显示 分离株为革兰氏阴性杆菌明胶液化
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