淫羊藿苷基于GDF-9_Smads对多囊卵巢小鼠排卵的作用.pdf
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1、h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t淫羊藿苷基于G D F-9/S m a d s对多囊卵巢小鼠排卵的作用王小洁1,张云锋2,张彦敏31.邯郸市妇幼保健院中医妇科,邯郸 0 5 6 0 0 0;2.河北省沧州中西医结合医院中医专家门诊,沧州 0 6 1 0 0 0;3.石家庄市井陉矿区人民医院内科,石家庄 0 5 0 1 0 0摘要:目的 探讨淫羊藿苷(i c a r i i n,I C A)对多囊卵巢综合征(p o l y c y s t i c o v a r i a n s y n d r o m e,P C O S)小鼠排卵障碍和卵泡发育的作用。
2、方法 取5 0只小鼠,4 0只用脱氢表雄酮法建立P C O S模型,随机分为模型组及I C A低剂量、中剂量和高剂量组,每组1 0只,剩余1 0只未建立模型的小鼠作为对照组。I C A低剂量、中剂量和高剂量组分别按2 5、5 0、7 5 m gk g-1 腹腔注射0.5 m L I C A(溶于9 gL-1氯化钠注射液0.5 m L中),对照组和模型组腹腔注射9 gL-1氯化钠注射液,比较各组小鼠激素水平、脏器指数、卵巢形态学差异、卵母细胞凋亡率、生长分化因子9(g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r-9,G D F-9)、骨
3、形成蛋白型受体(b o n e m o r p h o-g e n e t i c p r o t e i n t y p e r e c e p t o r,BMP R-)、激活素受体样激酶5(a c t i v i n r e c e p t o r l i k e k i n a s e 5,A L K 5)、磷酸化S m a d蛋白2(p h o s p h o-S m a d p r o t e i n 2,p-S m a d 2)及p-S m a d 3蛋白水平的差异。结果 HE结果显示I C A各剂量组小鼠各级卵泡数量增多,颗粒细胞层数增加、囊性卵泡数量减少;I C A各剂量组睾
4、酮激素(t e s t o s t e r o n e,T)、促黄体生成激素(l u t e i n i z i n g h o r m o n e,LH)、抗缪勒管激素(a n t i-M l l e r i a n h o r m o n e,AMH)水平、卵巢指数、囊性卵泡数量以及卵泡细胞凋亡率较模型组降低,卵泡刺激素(f o l-l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)、雌二醇(e s t r a d i o l,E2)水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量、G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d
5、 2、p-S m a d 3蛋白表达水平较模型组升高(P0.0 5);T、LH、AMH水平及卵巢指数、囊性卵泡数量、卵泡细胞凋亡率与I C A呈剂量依赖性降低,E2、F S H水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量以及G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白的表达水平与I C A呈剂量依赖性升高(P0.0 5)。结论 I C A能有效调节P C O S小鼠生殖激素水平,改善内分泌代谢,促进卵泡发育、成熟,减少卵泡凋亡,改善排卵,可能与调控G D F-9/S m a d s信号通路蛋白的表达有关。关键词:淫羊藿苷;多囊卵巢综合征;排卵障碍;
6、卵泡发育;生长分化因子9/S m a d蛋白家族D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 1 2中图分类号:R 9 6 5 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 6 5-0 6E f f e c t o f i c a r i i n o n o v u l a t o r y d y s f u n c t i o n a l i n p o l y c y s t i c o v a r y m i c e t h r o u g h G D F-9/S m a d
7、 sWANG X i a o j i e1,Z HAN G Y u n f e n g2,Z HANG Y a n m i n31.D e p a r t m e n t o f G y n e c o l o g y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e(T CM),H a n d a n M a t e r n a l a n d C h i l d r e n H e a l t h H o s p i t a l,H a n d a n 0 5 6 0 0 0,C h i n a;2.T CM E x p e r
8、 t C l i n i c o f C a n g z h o u H o s p i t a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t i o n a l C h i n e s e a n d W e s t e r n M e d i c i n e,C a n g z h o u 0 6 1 0 0 0,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f I n t e r n a l M e d i c i n e,P e o p l e s H o s p i t a l o f J i n g x i n g M i n i
9、 n g A r e a,S h i j i a z h u a n g 0 5 0 1 0 0,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f i c a r i i n(I C A)o n o v u l a t i o n d i s o r d e r a n d f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t i n p o l y c y s t i c o v a r y s y n d r
10、 o m e(P C O S)m i c e.MM ee tt hh oo dd ss 5 0 m i c e w e r e t a k e n a n d 4 0 w e r e u s e d t o e s t a b l i s h P C O S m o d e l b y d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e m e t h o d,w h i c h w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p,I C A l o w,m e d i u m
11、a n d h i g h d o s e g r o u p s,w i t h 1 0 m i c e i n e a c h g r o u p,a n d t h e r e m a i n i n g 1 0 m i c e w i t h o u t m o d e l w e r e u s e d a s c o n t r o l g r o u p.T h e l o w,m e d i u m a n d h i g h d o s e g r o u p s o f I C A w e r e i n t r a-p e r i t o n e a l l y i n
12、j e c t e d w i t h 0.5 m L o f 2 5,5 0 a n d 7 5 m gk g-1 I C A(d i s s o l v e d i n 9 gL-1 S o d i u m C h l o r i d e I n j e c t i o n s),a n d 9 gL-1 S o d i u m C h l o r i d e I n j e c t i o n s w e r e i n t r a p e r i t o n e a l l y i n j e c t e d i n t o t h e c o n t r o l g r o u p
13、a n d t h e m o d e l g r o u p.T h e l e v e l s o f h o r m o n e,o r-g a n i n d e x,o v a r i a n m o r p h o l o g y,o o c y t e a p o p t o s i s,g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r-9(G D F-9),b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n t y p e I I r e c e p t o r(BMP R-)
14、,a c t i v i n r e c e p t o r l i k e k i n a s e 5(A L K 5),p h o s p h o-S m a d p r o t e i n 2(p-s m a d 2)a n d p-S m a d 3 w e r e c o m p a r e d.RR ee ss uu ll tt ss T h e HE s t a i n i n g r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e n u m b e r o f f o l l i c l e s a n d t h e n u m b e r o
15、f g r a n u l a r c e l l l a y e r s i n c r e a s e d,t h e n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s d e c r e a s e d i n d i f f e r e n t d o s e g r o u p o f I C A.T h e l e v e l s o f t e s t o s t e r o n e(T),l u t e i n i z i n g h o r m o n e(LH),a n t i-M l l e r i a n h o r m o n
16、 e(AMH),o v a r i a n i n d e x,n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s a n d f o l l i c u l a r c e l l a p o p t o s i s i n I C A d i f f e r e n t g r o u p s w e r e l o w e r t h a n t h o s e i n m o d e l g r o u p,w h i l e t h e l e v e l s o f e s t r a d i o l(E2),f o l l i c l e
17、s t i m u l a t i n g h o r m o n e(F S H),u t e r i n e i n d e x,n u m b e r o f g r o w i n g f o l l i c l e s,n u m b e r o f c o r p u s l u t e u m a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d p-S m a d 3 p r o-t e i n w e r e h i g h e r t h a n t
18、h o s e i n m o d e l g r o u p(P0.0 5).T h e l e v e l s o f T,LH,AMH,o v a r i a n i n d e x,t h e n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s a n d f o l l i c u l a r c e l l a p o p t o s i s d e c r e a s e d i n a d o s e-d e p e n d e n t m a n n e r w i t h I C A,w h i l e t h e l e v e l
19、 s o f E2,F S H,u t e r i n e i n d e x,t h e n u m b e r o f g r o w i n g f o l l i c l e s,t h e n u m b e r o f c o r p u s l u t e u m,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d 基金项目:2 0 2 2年度河北省中医药类科研计划课题项目(编号:2 0 2 2 6 0 2)56西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8
20、卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e tp-S m a d 3 i n c r e a s e d i n a d o s e-d e p e n d e n t m a n n e r w i t h I C A(P0.0 5).CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn I C A c a n e f f e c t i v e l y r e g u l a t e t h e l e v e l o f r e p r o-d u c t i v e h o r m o n e,i m p r o v e t h e e n
21、 d o c r i n e m e t a b o l i s m,p r o m o t e t h e f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t a n d m a t u r a t i o n,r e d u c e t h e f o l l i c u l a r a p o p t o s i s a n d i m p r o v e t h e o v u l a t i o n i n P C O S m i c e,w h i c h m a y b e r e l a t e d t o t h e r e g u l a t
22、 i o n o f G D F-9/S m a d s s i g n a l i n g p a t h w a y p r o t e i n s.K e y w o r d s:i c a r i i n;p o l y c y s t i c o v a r y s y n d r o m e;o v u l a t i o n d i s o r d e r;f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t;g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r 9/S m a d p r o t
23、 e i n f a m i l y 多囊卵巢综合征(p o l y c y s t i c o v a r i a n s y n d r o m e,P C O S)发病原因复杂,表现出长期无排卵或稀发排卵的高雄激素特征,严重影响患者的青春期心理、育龄期机体代谢等1-2。淫羊藿是我国传统的滋补类中草药,能增强机体性功能和免疫功能,在临床常被用于辅助治疗P C O S3-4。淫羊藿苷(i c a r i i n,I C A)作为淫羊藿的主要有效成分之一,具有抗氧化、抗癌、抗血管生成和抗炎等多种药理活性5。本研究用脱氢表雄酮法建立P C O S小鼠模型,研究I C A对P C O S小鼠排卵障
24、碍和卵泡发育的影响及作用机制。1 仪器与材料1.1 仪器微量移液器(德国E p p e n d o r f公司);HM 3 5 5 S全自动轮转式石蜡切片机(德国M I C ON医疗技术有限公司);P o w e r P a c电泳仪(美国B i o-R a d公司)。1.2 试药脱氢表雄酮(上海恒渡生物科技有限公司);淫羊藿苷(质量分数 9 8%,上海吉至生化科技有限公司);雌二醇(e s t r a d i o l,E2)、睾酮激素(t e s t o s t e r o n e,T)、促黄体生成激素(l u t e i n i z i n g h o r m o n e,L H)、卵泡刺
25、激素(f o l l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)和 抗 缪 勒 管 激 素(a n t i-M l l e r i a n h o r m o n e,AMH)E L I S A试剂盒,均购自武汉华美生物工程有限公司;兔抗小鼠生长分化因子9(g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r 9,G D F-9)、骨形成蛋白型受体(b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n t y p e r e c e p t
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