江苏地区水禽源主要细菌病流行情况调查分析.pdf
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1、江苏地区水禽源主要细菌病流行情况调查分析2023 年 第 9 期江苏地区水禽源主要细菌病流行情况调查分析顾陈怡,董洪燕,郭长明,封琦,谢军,宋海港,吴植*(江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300)摘 要:试验旨在了解江苏地区水禽细菌病的发生与流行情况,于20212022年从江苏省10个地级市的64个水禽养殖场采集768份样品,分别设计引物对大肠杆菌F1菌毛fimA基因、沙门氏菌stn基因、鸭疫里氏杆菌OmpA基因进行PCR检测,并进行细菌的分离鉴定。结果显示,大肠杆菌fimA检出率为74.21%(570/768),沙门氏菌stn检出率为5.60%(43/768),鸭疫里氏杆菌OmpA检
2、出率为2.73%(21/768)。研究表明,江苏地区水禽细菌性疾病中大肠杆菌的发病率最高。该研究结果可为江苏地区水禽源细菌病的防控提供参考。关键词:水禽;大肠杆菌;沙门氏菌;鸭疫里氏杆菌中图分类号:S 852.65 文献标识码:A 文章编号:1672-9692(2023)09-0061-04Investigation and analysis on the prevalence of major bacterial diseases of waterfowl in Jiangsu ProvinceGu Chenyi,Dong Hongyan,Guo Changming,Feng Qi,Xie
3、Jun,Song Haigang,Wu Zhi*(Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College,Jiangsu Taizhou 225300)Abstract:The aim of the experiment was to understand the occurrence and prevalence of waterfowl bacterial diseases in Jiangsu Province.A total of 768 samples were collected from 64 waterfowl farms in ten
4、 prefecture-level cities in Jiangsu Province from 2021 to 2022,synthesis of primers based on Escherichia coli F1 fimbriae subunit A(fimA),the gene of outer membrane protein(ompA)in Riemerella anatipestifer and the enterotoxin gene of Salmonella(stn).Three important pathogens of waterfowl including p
5、athogenic E.coli,Riemerella anatipestifer and Salmonella were identified by PCR.The results showed that the average detection rate of fimA,ompA,stn in waterfowl samples was 74.21%(570/768),2.73%(21/768)and 5.60%(43/768),respectively.The study indicates that the incidence of E.coli in watery and poul
6、try bacterial diseases in Jiangsu Province is the highest.All these data is expected to provide reference for prevention and control of waterborne bacterial diseases.Key words:Waterfowl;Escherichia coli;Salmonella;Riemerella anatipestifer中国是水禽生产大国,饲养量占世界总量的70%,肉鸭、蛋鸭及肉鹅产业的产值均呈稳定增加态势1-2。但随着饲养规模化程度不断提高
7、,饲养密度不断增大,水禽养殖中许多疫病不断发生,尤其是细菌感染已成为制约水禽产业快速发展的重要影响因素。大肠杆菌病、沙门氏菌病和鸭疫里氏杆菌病是当前危害水禽养殖业的主要细菌疾病。在商品代水禽场,大肠杆菌、沙门氏菌和鸭疫里氏杆菌感染所导致的病理变化较相似,以“三炎”即心包炎、肝周炎和气囊炎为主。在种水禽场,大肠杆菌病导致的危害更大,常导致患病禽类关节肿大、产蛋率下降和死淘率上升。有调查指出,细菌感染严重会导致水禽发病死亡3-5。江苏是水禽养殖大省,但水禽疫病的控制形势不容乐观。当前对水禽细菌性疾病的流行情况、血清型分型、耐药基因和毒力基因的携带情况等均缺乏系统调查研究,加之部分地区药物敏感性监测
8、尚不完善,因而造成抗生素药物的不规范使用,在生产养殖中给水禽细菌病的预防和控制带来了严峻的挑战。基于此,本研究依托江苏省现代农业(水禽)产业技术体系,对江苏全省范围内水禽源常见细菌病开展流行现状的调研与分析,以期为江苏地区水禽细菌性疾病的防控提供参考。收稿日期:2023-02-20作者简介:顾陈怡,大专,研究方向为动物医学。通讯作者:吴植,硕士,副教授,研究方向为水禽疫病防控技术。基金项目:江苏现代农业产业技术体系集成创新中心资助项目(JATS 2022 345);江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(18)1004)612023 年 第 9 期Modern Journal of Anim
9、al Husbandry and Veterinary Medicine1材料与方法1.1样品采集20212022年共采集江苏省10个地级市64个水禽养殖场的样品768份,主要包括肛拭子和组织样品两种类型。肛拭子的采集对象为临床健康水禽,用灭菌的脱脂棉棒插入肛门24 cm处,在肛门口内轻轻旋转涂擦。组织样品采集对象为剖检具有典型腹膜炎、心包炎、肝周炎和气囊炎等病理变化的水禽,无菌采集肝脏、心脏、肺脏等组织。将棉棒或组织分别放入盛有TSB培养基(需氧增菌培养)和TSB+石蜡培养基(厌氧增菌培养)的指形管中保存,依次编号记录,带回实验室。详细记录养殖场的性质、水禽的日龄、免疫程序、发病情况和药物使
10、用等背景资料。1.2主要试剂50TAE、细菌DNA模板提取试剂盒购自康为世纪生物科技股份有限公司;琼脂糖、DL2000 DNA Marker、PCR产物回收试剂盒购自大连宝生物公司;胎牛血清购自Gibico公司;DNA凝胶回收试剂盒购自康宁公司;布氏培养基、肉汤培养基、牛肉浸粉等购自青岛海博生物技术有限公司;优质琼脂糖购自西班牙Bio-west。1.3仪器设备SW-CJ-1F净化工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)、IS-RDS3摇床(广州深华生物技术有限公司)、TGL-16B台式冷冻离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司)、9902 PCR基因扩增仪(赛默飞世尔科技中国有限公司)、DDY
11、-6C电泳仪(北京六一仪器厂)、Tanon-2500凝胶成像系统(上海天能公司)等。1.4PCR引物设计与合成参考相关文献6-8分别合成大肠杆菌fimA、沙门氏菌stn、鸭疫里氏杆菌OmpA特异性引物用于PCR检测,引物序列由南京金斯瑞生物科技有限公司提供,引物序列信息具体见表1。1.5临床样品处理将无菌采集的肛拭子和组织样品立即放置于37、220 r/min的摇床上培养1224 h。采用煮沸法提取细菌的DNA 模板,吸取 0.81.0 mL 菌体培养液于指形管中,12 000 r/min离心35 min,弃上清;菌体沉淀重新悬浮于1 mL的ddH2O中,12 000 r/min离心35 mi
12、n,再次弃上清;菌体沉淀重新悬浮于200 L的ddH2O中,用100 沸水煮沸10 min后,再0 冰浴5 min,之后12 000 r/min离心810 min,吸取的上清液即为细菌DNA,转移至新的指形管中并于-20 保存。1.6临床样品PCR检测以分别提取的DNA为模板,分别按照参考文献建立的PCR的体系和反应程序,利用设计的引物对大肠杆菌fimA、沙门氏菌stn、鸭疫里氏杆菌OmpA引物进行PCR快速检测。PCR 扩增体系(共 20 L):细菌 DNA 模板 2 L、Primer-F 0.5 L、Primer-R 0.5 L、Premix Taq 10 L、无菌水7 L。PCR 检测扩
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