丹参对大鼠口腔黏膜下纤维化的治疗效果.pdf
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1、作者简介:杨 博,硕士,主治医师。作者单位:,清华大学附属北京清华长庚医院口腔科丹参对大鼠口腔黏膜下纤维化的治疗效果杨 博,吕 娇,张雪梅,聂小汉 【摘要】目的 探讨丹参治疗大鼠口腔黏膜下纤维化的效果。方法 选取 周龄 级雄性健康()大鼠 只,采取槟榔碱涂擦法建立 大鼠口腔黏膜下纤维化模型后,将大鼠分为 个实验组和对照组,每组 只。实验组分别局部注射 丹参酮、丹参酮、隐丹参酮、异隐丹参酮、丹酚酸、丹酚酸,对照组局部注射生理盐水,处理 周后测量局部黏膜病变面积后取局部颊黏膜行 染色观察病理变化;并检测组织内型胶原、和 的表达情况。结果 丹参酮、隐丹参酮和异隐丹参酮组的口腔黏膜下纤维化面积减小分别
2、达到、,治愈率 ,明显优于对照组,差异有统计学意义()。丹参酮、隐丹参酮和异隐丹参酮组的型胶原蛋白灰度比值、蛋白降低明显,蛋白明显增高,与对照组相比差异有统计学意义();而丹参酮、丹酚酸 和丹酚酸 组的黏膜病变减少量、治愈率及型胶原、和 蛋白的表达与对照组比较,差异均无统计学意义。结论 丹参酮、隐丹参酮和异隐丹参酮具有治疗口腔黏膜下纤维化的效果。【关键词】丹参;丹参酮;丹酚酸;口腔黏膜下纤维化;大鼠 【中国图书分类号】,【】,(),【】;口腔黏膜下纤维化是一种以上皮萎缩、胶原堆积和微血管改变为主要病理特征的口腔黏膜慢性疾病。目前,已明确将口腔黏膜下纤维化定为癌前状态,有研究表明,咀嚼槟榔是口腔
3、黏膜下纤维化发病的危险因素之一,我国湖南省及海南省口腔癌高发也与咀嚼槟榔习惯流行高度相关。丹参具有活血祛淤、养血安神等多种功效,临床主要用于保护心脑血管系统、保肝、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗纤维化等。已有研究表明,复方丹参滴丸及曲安奈德联合丹参注射液可有效治疗口腔黏膜下纤维化,。但丹参中许多成分与黏膜纤维化治疗无关,比如多糖类物质可导致局部黏膜红肿及感染,挥发油类物质和含氮类化合物易造成过敏反应等,这些不良反应的发生均会影响丹参对口腔黏膜下纤维化的治疗效果。目前,临床关于丹参治疗口腔黏膜下纤维化有效成分的进一步分析和研究较少。本研究旨在探讨丹参有效成分治疗大鼠口 武警医学 年 月 第 卷 第 期
4、 ,.,.,DOI:10.14010/ki.wjyx.2023.07.018腔黏膜下纤维化的效果。材料与方法 材料与仪器 选取 周龄 级雄性健康 大鼠 只(湖南斯莱克景达实验动物有限公司,许可证编:(湘)。槟榔碱(,公司)、丹参酮(,北京索莱宝科技有限公司)、丹参酮(,上海源叶生物科技有限公司)、隐丹参酮(,公司)、异隐丹 参 酮(,公 司)、丹 酚 酸(,北京索莱宝科技有限公司)、丹酚酸(,北京索莱宝科技有限公司)。型胶原蛋白抗体(稀释比例 ,公司)、转化生长因子抗体(稀释比例 ,公司)、干扰素抗体(稀释比例 ,公司)。台式冷冻离心机(,中国深圳黑马公司),电泳仪(美国),电泳槽(北京六一公
5、司),转膜仪(北京六一公司),电动玻璃匀浆器(日本新芝)。分组 只大鼠体质量 ,均在环境温度()、相对湿度()、光暗循环条件标准饲料喂养。槟榔碱溶液棉签涂擦法 周建立 大鼠口腔黏膜下纤维化病变模型。建立模型后随机将大鼠分为 个实验组和对照组,每组 只。治疗方法实验组(、组)分别于口腔黏膜下纤维化病变双侧颊黏膜局部注射 浓度为 的丹参酮、丹参酮、隐丹参酮、异隐丹参酮、丹酚酸、丹酚酸;对照组于病变区域局部注射生理盐水。每周治疗 次,干预后禁食禁水 ,共治疗 次后取所有大鼠双侧颊部黏膜组织进行观察。蛋白质印迹法 取干预 周后大鼠进行麻醉,取一侧颊黏膜 组织,用冰预冷 清洗。准备好全蛋白提取物。用 分
6、离胶电泳分离蛋白,将蛋白转移至聚偏氟乙烯膜。将膜浸入 脱脂奶粉,室温放置 ,与稀释后一抗共同孵育。将稀释后二抗与膜共同孵育 。使用 化学发光液与膜孵育 ,用吸水纸吸尽液体,用保鲜膜将膜包裹杂交膜,在暗盒内与 线胶片曝光,显影冲洗。将曝光后的底片扫描并用 专业灰度分析软件进行分析,检测型胶原、和 蛋白的表达。组织切片干预 周后麻醉大鼠随机取一侧颊黏膜,的中性甲醛溶液固定,常规组织处理,石蜡包埋,切片,染色,由口腔病理科医师在单盲下完成病理学诊断。观察指标及标准()体重指标及黏膜病变面积:每天观察大鼠口内黏膜变化、进食进水、活动精神等情况,干预前及干预 周后使用游标卡尺测量大鼠口腔黏膜下纤维化病变
7、黏膜面积,记录干预前后大鼠体重变化情况。()蛋白质印迹法检测型胶原、和 蛋白的表达,对各组的数据进行对比。()治愈诊断标准:染色 倍视野中出现的玻璃样变则认定为存在口腔黏膜下纤维化病变,反之为黏膜治愈。统计学处理 采用 统计软件处理所有数据,计量资料以?表示,比较采用独立样本 检验,计数资料采用表示,采取 检验。为差异有统计学意义。结 果 不同成分丹参对大鼠体重及口腔黏膜病变面积的影响干预前后各组体重差异无统计学意义(),具有可比性。干预前,所有大鼠口内双侧颊黏膜纤维化病变面积基本相同,干预 周后,、组黏膜病变面积明显减小,与对照组相比差异有统计学意义(,表),而、组黏膜下纤维化病变面积与对照
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