富钙微环境对牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响.pdf
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1、:./.论著富钙微环境对牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响齐芳芳 李雅 郝君玲 张立亚 谷希 马文盛 李颖辉项目来源:河北 省医学 科学研 究 课 题 计 划(编 号:)河北省教育厅高等学校科学研究计划(编号:)作者单位:石家庄市河北医科大学口腔医院牙体牙髓科(齐芳芳、郝君玲、张立亚、谷希)牙周科(李雅)口腔正畸科(马文盛、李颖辉)河北省口腔医学重点实验室(齐芳、李雅、郝君玲、张立亚、谷希、马文盛、李颖辉)通讯作者:李颖辉:.【摘要】目的 探讨含有不同浓度钙离子()的培养基对人牙周膜干细胞()增殖与迁移能力的影响 方法 用含 /、/、/、/钙离子的完全培养基干预第 代 其中 组作为对照组通过 法
2、、法及划痕实验分别于相应时间点检测其克隆形成能力、细胞增殖能力及细胞迁移能力并将各组间结果进行对比 结果在含钙离子培养基中与对照组对比 克隆形成能力、细胞增殖能力、细胞迁移能力均显示不同程度的增加 结果显示 /、/、/钙离子组的克隆形成能力明显优于对照组(.)检测结果显示自第 天开始含钙离子组 的增殖能力优于对照组(.)第 天、天时/、/组的增殖能力优于对照组及/组(.)划痕实验结果显示 /、/钙离子组的迁移能力优于对照组(.)在钙离子浓度增至 /时其迁移能力显著下降低于 /、/、/组(.)结论在体外实验中含一定浓度钙离子培养基可促进 的增殖与迁移能力【关键词】牙周膜干细胞钙离子增殖迁移【中图
3、分类号】.【文献标识码】【文章编号】().【】()./()/./(.).(.)/(.)./(.)/.【】近年来应用间充质干细胞进行组织工程和器官再生的研究越来越受到重视而牙齿来源的干细胞由于来源丰富、采集方便、免疫原性低等优点一直是组织工程和细胞治疗良好的种子细胞 人牙周膜干细胞()由 等于 年首次从健康成年人牙周组织中成功分离其具有与骨髓和牙髓间充质干细胞类似的生物学特性是目前牙周疾病的治疗及牙周组织再生最具潜力的种子细胞在牙体种植、牙周病的治疗及加速正畸牙齿移动等领域有着广泛的应用前景现代组织工程学再生理论认为:种子细胞的来源、数量的多少和生物学特性都会直接影响其应用效果而细胞培养时所处的
4、局部微环境也对其生物学功能的发挥起着重要的调控作用 钙信号作为重要的第二信使可调控细胞内多种重要的生理过程并且在多种疾病的发生发展过程中都发挥重要的作用 另外钙离子通道阻滞剂越来越多地用于治疗高血压然而服用钙通道阻滞剂后会发生牙龈组织增生及牙周改变 本研究通过研究钙离子在 增殖分化过程中的作用为 在组织工程中的应用提供依据河北医药 年 月 第 卷 第 期 材料与方法.主要试剂与仪器 培养基、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗、.胰酶细胞消化液购自美国 公 司、流式抗体购自美国 公司购自美国 公司结晶紫购自上海阿拉丁公司 购自上海碧云天公司智能流式细胞仪购自美国 公司多功能酶标仪购自美国 公司.培养
5、取得患者及家长同意选择临床上 岁因正畸需要拔除的牙体牙周均健康的第一或第二前磨牙作为 的来源牙齿拔出后立即保 存 于 含 倍 双 抗(/的 和/的)的 培养基中置于冰盒内尽快带回实验室 用含 倍双抗的 溶液自根尖向冠部反复冲洗直至牙根表面不再有肉眼可见的颗粒用无菌锋利的手术刀片于冠根位置单向刮取根中三分之一的牙周膜组织接种于 培养瓶中加入完全培养基(含、谷氨酰胺的 培养液)在、饱和湿度条件下培养 原代培养至细胞汇合达 时胰酶消化、离心培养基重悬细胞并计数调整细胞密度为 个/以 /孔的用量种于 孔板倒置显微镜下挑选只有单细胞的孔标记补加液 后收集呈克隆生长的细胞扩增培养标记为 代细胞.鉴定取第
6、代 生长至 时进行消化离心、重悬计数并调整细胞密度为 个/孔采用流式细胞术检测 的免疫表型包含 个阳性标记物:、和 以及、个阴性标记物.含钙离子培养液的制备 在含、胎牛血清的 培养基中加入不同浓度 调整钙离子终浓度为 /、/、/、/.克隆形成率()检测第 代 在含钙离子终浓度为 /、/、/、/的培养基中调整至细胞密度 /吹打混匀 接种于 培养皿 内不换液不观察防止影响细胞贴壁之后每 天换液待克隆长至 时 冲洗 次中性甲醛固定结晶紫染色倒置显微镜下观察 细胞数 个的集落记为 个克隆 培养皿扫描后人工计数克隆数重复 次取均值计数以形成的克隆个数计算克隆形成率 克隆形成率(克隆数/接种细胞数).细胞
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