HCG22靶向miR-17-3p对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响.pdf
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1、 靶向 对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响 通讯作者,:四川遂宁 遂宁市中心医院口腔医学中心尹 江,唐 平,张 慧,杨 森【摘 要】目的 探讨 基因复合体()通过调控微小()对口腔鳞癌()细胞生物学行为的影响。方法 通过实时定量()检测 组织和细胞系中 和 的表达。双荧光素酶报告基因实验检测 和 之间的相互作用。在 细胞 中转染 过表达载体和 模拟物,将细胞分为 组(空白)、组(过表达)、组(过表达)和 组(过表达 和)。、划痕愈合和 法分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过 和 检测基质金属蛋白酶()和 的表达。结果 组织中 表达下调,而 表达上调,且两者表达呈负相关(,)。与 细胞相比,、和
2、细胞中 低表达,而 高表达()。双荧光素酶报告基因实验证实 能够与 靶向作用。组 细胞的 表达水平低于 组()。与 组比较,组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制,而 组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强。挽救实验显示,可抵消 诱导 细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。组的 和 水平降低(),而 组的 和 水平上调()。与 组相比,组的 和 水平均升高()。结论 可能通过靶向抑制 表达调控 细胞的增殖、迁移和侵袭过程。轴在 中可能存在负反馈回路。【关键词】口腔鳞癌;基因复合体;微小;迁移;侵袭中图分类号:文献标识码:文章编号:(),:,:【】()()(),(),(),()(),()(),(,),
3、(),临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,()()(),【】;口 腔 鳞 状 细 胞 癌(,)是头颈部最常见的鳞状细胞癌之一,死亡率很高。的发病机制与饮酒、吸烟等因素有关,但具体发病机制尚不清楚,。虽然 手 术 治 疗 有 效,但 是 对 于 患者的总体生存情况仍然不容乐观。因此,揭示 病变分子机制对探索新的治疗策略至关重要。长链非编码(,)是非编码 家族亚群成员,不能编码蛋白质。最近,被证实参与不同的细胞进程,如细胞增殖、凋亡、侵袭、转移、耐药等。此外,一系列研究报道了 在包括 在内的多种癌症发生发展中的重要作用。基 因 复 合 体 (,)作为一种肿瘤抑制,已经被发现在某些类型肿瘤中表达异
4、常缺失,并参与调控肿瘤进展。例如,等研究表示 通过破坏 稳定性调控 的表达,介导 效应抑制,对膀胱癌细胞的增殖、迁移和上皮间充质转化产生负面影响。另外,与食管鳞状细胞癌患者的分化程度和临床 分期存在明显相关性,是食管鳞状细胞癌的良好预后指标;同时作为细胞迁移抑制剂,与 和 相互作用,抑制肿瘤进展。值得注意的是,有学者通过转录组测序筛选发现 在 中表达较健康口腔黏膜异常下调。还被发现作为 患者的预后生物标志物具有一定价值。然而,在 中的具体功能尚不清楚。最近 研 究 数 据 表 明,微 小 (,)能够与 通过内源性竞争(,)机 制 参 与 发 展。现 有 研 究 显 示 被、等 海绵化,加速黑素
5、瘤、结 直 肠 癌 进 展。中 与 的相互作用关系尚不清楚。因此,本研究分析 和 在 细胞中表达及其对细胞生物学行为的影响,探讨调控的潜在生物学机制,现将研究结果报道如下。材料与方法 组织、细胞和主要试剂 对 组织和癌旁组织为本院 年 月至 年 月外科手术切除(所有患者均签署知情同意且经本院伦理委员会批准),人 细胞(、)和人正常口腔角质细胞 购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,购自美国 公司,试剂购自美国 公司,培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购自美国 公司,和 检测试剂盒购自南京知了生物科技有限公司,荧光定量 ()试 剂 盒 和反转录试剂盒 合成试剂盒购自碧云天生物技术公司,荧光素酶报
6、告质粒 和双荧光报告基因检测试剂盒购自美国 公司,兔源多克隆基质金属蛋白酶(,)、和 一抗及 标记的羊抗兔二抗购自美国 公司,模拟物()、空载 、过表 达 载 体 和 引物购自通用生物(安徽)股份有限公司。细胞培养将含有 胎牛血清和 双抗的完全培养基,放置于恒温培养箱中培养细胞,根据细胞生长状态和需要常规换液。按照 操 作 说 明 书 将 、和 转 染 细 胞,分 成 组、组、组 和 组。细胞增殖实验 转染第、向每孔细胞加入浓度为 工作溶液,孵育 后终止反应。酶标仪测定各孔细胞在 波长下的吸光度值。临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,细胞迁移实验 将细胞按照 的密度接种至 孔板,每组设置 个
7、重复。使用枪头垂直于孔板划出光滑划痕,显微镜拍照记录划痕宽度,记为 结果。细胞中添加不含血清的培养基继续培养 ,显微镜记录划痕宽度,记为 结果。细胞侵袭实验 将 细胞按照 孔密度接种至 小室上室,下室加入 含胎牛血清的培养基。孵育 ,利用 多聚甲醛固定 ,结晶紫染液工作液染色 。倒置显微镜下观察并拍照。总 提取和 试剂提取细胞总,挑选质量较好的 反转录合成,以此为模板使用 实时系统进行。作为、和 表达的内参,作为 表达的内参。上游引物:,下游引物:;上游引物:,下游引物:;上游引物:,下 游 引 物:;上游引物:,下游引物:;上游引物:,下 游 引 物:;上 游 引 物:,下 游 引 物:。双
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