氧化应激因子和铁死亡标志物...妇中的表达情况及其临床意义_宋鹏书.pdf
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1、论著临床研究基金项目:广西壮族自治区卫生健康委员会自筹经费科研课题();广西医学高层次骨干人才“”计划项目();广西壮族自治区卫生健康委员会重点(培育)实验室建设项目()第一作者简介:宋鹏书,硕士,初级研究员,研究方向:妊娠期并发症。通信作者简介:何升,博士,研究员,研究方向:出生缺陷。氧化应激因子和铁死亡标志物在子痫前期孕妇中的表达情况及其临床意义宋鹏书 张奕梅 彭振仁 韦金凤 李 英 何 升(广西出生缺陷防治基础研究重点实验室,广西南宁市;广西壮族自治区妇幼保健院产科,广西南宁市)【摘要】目的探讨氧化应激因子和铁死亡标志物在子痫前期孕妇中的表达情况及其临床意义。方法 选取 例子痫前期孕妇作
2、为子痫前期组,例正常孕妇作为对照组。检测两组孕妇外周血中氧化应激因子超氧化物歧化酶()、丙二醛和谷胱甘肽表达水平。观察两组孕妇胎盘组织的病理学变化,并检测胎盘组织中铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶()和环氧合酶()的蛋白和 表达水平。结果 子痫前期组孕妇外周血中、谷胱甘肽表达水平低于对照组,丙二醛表达水平高于对照组(均 )。对照组孕妇胎盘组织的细胞轮廓清晰且排列整齐,绒毛组织几乎无破损;子痫前期组孕妇的胎盘组织出现细胞溶解和血管水肿破裂的现象。子痫前期组孕妇的胎盘组织中 蛋白及 表达水平均低于对照组,而 蛋白及表达水平均高于对照组(均 )。结论 子痫前期孕妇外周血中的氧化应激因子和胎盘组织中的铁
3、死亡标志物表达异常,氧化应激反应及铁死亡可能参与子痫前期的发病过程。【关键词】子痫前期;氧化应激;铁死亡;谷胱甘肽过氧化物酶;环氧合酶;胎盘组织【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】():,(,;,)【】,(),()(),(),(),【】,子痫前期是妊娠期高血压疾病的常见类型之一,主要特征为妊娠 周后出现血压升高、蛋白尿和水肿,其严重影响母胎安全,是导致孕产妇和围产儿死亡的主要因素。迄今为止,子痫前期的发病机制仍未完全阐明,有学者提出子痫前期发病机制的“两阶段”学说,认为氧化应激在子痫前期的发病过程中处于中心地位,它参与子痫前期病理生理的第一阶段,与滋养层细胞侵袭和血管重塑有关;氧化应激通过
4、释放促炎因子、细胞碎片等到血液循环中,参与第二阶段的血管内皮功能障碍和全身炎性反应。铁死亡是近年来发现的一种氧化性、非凋亡性的细胞死亡途径,是指在小分子物质诱导下不同的信号通路直接或间接地影响谷胱甘肽过氧化物酶的表达,从而导致细胞抗氧化能力下降、氧化还原反应失衡、活性氧簇累积过多而发生膜脂质过氧化反应,进而损伤细胞膜的完整性,导致细胞死亡。本研究通过检测子痫前期孕妇外周血中氧化应激因子和胎盘组织中铁死亡标志物的表达水平,探讨妊娠子痫前期发生、发展与氧化应激及铁死亡的相关性。资料和方法 临床资料 将 年 月于广西壮族自治区妇幼保健院产科确诊为子痫前期的 例孕妇作为子痫前期组,将同期在我院产检的
5、例正常孕妇作为对照组。子痫前期组纳入标准:()头胎且单胎妊娠;()年龄 岁;()符合子痫前期诊断标准,即收缩压 和 或舒张压,蛋白尿 ,可伴有头痛、视觉障碍或上腹部疼痛;()未合并其他影响铁死亡水平的疾病,如妊娠期贫血和地中海贫血等。排除标准:()合并羊水污染、胎儿脐带绕颈等产科复杂情况;()合并慢性高血压、妊娠期糖尿病及肾病;()合并严重神经及精神障碍;()严重心、肝、肾功能不全;()孕周为 周。对照组的纳入标准:()单胎妊娠;()年龄 岁;()妊娠期产检结果均正常;()孕周为 周。排除标准:()羊水量异常;()慢性高血压、妊娠期糖尿病及肾病;()早产。本研究经广西壮族自治区妇幼保健院医学伦
6、理委员会批准,所有受试者均签署知情同意书。实验试剂 多聚甲醛固定液(公司,批号:);超氧化物歧化酶(,)、丙二醛、谷胱甘肽 试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:、);环氧合酶(,)单克隆抗体、谷胱甘肽过氧化物酶(,)单克隆抗体(,批号:、);多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司,批号:);二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司,批号:);辣根过氧化物标记的山羊抗兔()(,批号:);显影液(公司,批号:),试剂、反转录试剂盒、实时荧光定量 试剂盒(公司,批号:、);引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,见表。表 引物信息引物名称引物序列上游引物:下游引物:上游引物:下游引
7、物:上游引物:下游引物:相关指标检测方法 检测氧化应激因子表达水平:在入院后分娩之前采集所有孕妇外周血 ,室温放置 后,在 、条件下离心 ,取上清液,采用 检测血清中丙二醛、和谷胱甘肽的表达水平,所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。染色观察胎盘组织病理学变化:在胎盘娩出 内剪取胎盘母体面组织块(大小约),用生理盐水洗净组织表面的血迹后置于 的中性广西医学 年 月第 卷第 期甲醛固定液固定 ,然后冲洗、酒精梯度脱水、透明、包埋、制作切片,将切片烤干后进行脱蜡处理,之后置于不同浓度的酒精脱水 。蒸馏水冲洗后,将载玻片放入苏木精溶液中染色 ,流水冲洗 次后使用盐酸酒精分化处理 ,充分清洗之后使用 伊
8、红染色液染色 ,使用中性树脂进行封片处理,置于显微镜下观察和拍照。检测铁死亡标志物的蛋白表达水平:取胎盘娩出后 内 胎盘母体面组织,用生理盐水洗净组织表面的血迹,将组织称量、剪碎后放入 管中,加入 组织裂解液,低温裂解。然后在、条件下离心,提取组织总蛋白,使用二辛可宁酸法检测蛋白浓度,在 高温下将蛋白行变性处理。通过 分离样品蛋白,以 恒定电流转移到 膜,脱脂奶粉封闭膜 ,使用 冲洗膜 次,每次 。一抗()和()单克隆抗体 摇晃孵育过夜,选择()作为内参蛋白。使用 冲洗膜 次,每次 。加入 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔()室温孵育 ,使用 冲洗膜 次,每次 ,显影液孵育,上机检测。结果用 图像
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