疏肝和胃方水提醇沉法的急性毒性试验及部分药效学研究_徐亭亭.pdf
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1、引用:徐亭亭,朱生樑,周秉舵,王轶,王阿会,迪力库马尔马坎,李亚鼎疏肝和胃方水提醇沉法的急性毒性试验及部分药效学研究 J 湖南中医杂志,2023,39(1):168172.疏肝和胃方水提醇沉法的急性毒性试验及部分药效学研究徐亭亭,朱生樑,周秉舵,王轶,王阿会,迪力库马尔马坎,李亚鼎(上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院,上海,200437)摘要 目的:探索疏肝和胃方水提醇沉法的安全性并验证其疗效,为疏肝和胃方新药的推广提供实验依据。方法:1)急性毒性试验。将昆明小鼠分为药物高、中高、中、低剂量组及对照组,每组各 10 只,雌雄各半。灌胃剂量根据昆明小鼠 10 倍生药量计算,并按 85%等比递减
2、,按照 4 ml/10 g 体质量,1 d 内灌胃2 次,连续 14 d。观察 14 d 内实验小鼠的一般情况、体质量变化、内脏湿重与内脏病理改变。2)药效学研究。将 SD 大鼠分为假手术组(0.9%氯化钠注射液 1.5 ml)、模型组、中药组(中药混悬液 1.5 ml)、西药组(奥美拉唑水溶液 1.5 ml),每组各 10 只。对除假手术组外的其余组大鼠制备酸反流模型后给药,每天 2次,连续 14 d。观察各给药组大鼠食管病理改变及食管下段组织白细胞介素1(IL1)mNA、白细胞介素6(IL6)mNA 表达情况。结果:急性毒性试验结果显示,各组小鼠精神状态良好,组间体质量差异无统计学意义(P
3、0.05),组间内脏湿重无明显改变、内脏无明显病理改变。药效学研究结果显示,中药组大鼠食管下段组织黏膜上皮基底层更为平坦,棘细胞减少,无黏膜糜烂与溃疡。各给药组大鼠食管 IL1mNA、IL6 mNA 表达较模型组、西药组下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:疏肝和胃方水提醇沉法安全性高,且可修复食管黏膜,抑制食管炎症。关键词 疏肝和胃方;提取方法;急性毒性试验;药效学实验 中图分类号 285.5 文献标识码 ADOI:1016808/jcnkiissn10037705202301040基金项目:上海市 2018 年度科技创新行动计划生物医药领域科技支持项目(18401932600);上海
4、市科学技术委员会科技创新行动计划项目(19401971800);上海中医药大学杏林传承型人才培养计划项目(上中医人字 2019 10 号)第一作者:徐亭亭,女,主治医师,研究方向:中医内科学(脾胃病方向)通信作者:周秉舵,男,主任医师,研究方向:中医内科学(脾胃病方向),Email:bingduozhou 163comAcute toxicity test of the waterextraction and alcoholprecipitation method forShugan Hewei prescription and a partial pharmacodynamics study
5、XU Tingting,ZHU Shengliang,ZHOU Bingduo,WANG Yi,WANG Ahui,DILIKUMAE Makan,LI Yading(Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,ShanghaiUniversity of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200437,China)AbstractObjective:To investigate the safety of the water extraction and
6、 alcohol precipitation method forShugan Hewei prescription and its clinical effect,and to provide an experimental basis for promoting the new drug of Shu-gan Hewei prescription.Methods:In the acute toxicity test,Kunming mice were divided into high,mediumhigh,middle,and lowdose drug groups and contro
7、l group,with 10 mice(5 male mice and 5 female mice)in each group.The dosefor gavage was calculated as 10 times of crude drug in Kunming mice and was reduced proportionally at a percentage of85%,and the drug was given by gavage twice a day at a dose of 4 ml/10 g body weight for 14 consecutive days.Th
8、e micewere observed in terms of general status,change in body weight,visceral wet weight,and pathological changes of viscera.Inthe pharmacodynamic study,SpragueDawley rats were divided into shamoperation group(0.9%sodium chloride injec-tion 1.5 ml),model group,traditional Chinese medicine(TCM)group(
9、TCM suspension 1.5 ml),and Western medicine861第 39 卷第 1 期2023 年 1 月HUNAN JOUNAL OF TADITIONAL CHINESE MEDICINEVol.39No.1Jan.2023group(omeprazole solution 1.5 ml),with 10 rats in each group.All rats except those in the shamoperation group wereused to establish a model of acid reflux,and then the drug
10、 was given twice a day for 14 consecutive days.The rats were ob-served in terms of the pathological changes of the esophagus and the mNA expression levels of interleukin1(IL1)and interleukin6(IL6)in the lower segment of the esophagus.esults:The acute toxicity test showed that the mice ineach group h
11、ad a good general status,and there was no significant difference in body weight between groups(P0.05),while there were no obvious changes in visceral wet weight or no pathological changes of viscera.The pharmacodynamicstudy showed that the TCM group had a smooth basal layer of the mucosal epithelium
12、 in the lower segment of the esophagusand a reduction in prickle cells,with no mucosal erosion or ulceration.The medication groups had significantly lower m-NA expression levels of IL1 and IL6 than the model group and the Western medicine group(P0.05).Conclusion:The waterextraction and alcoholprecip
13、itation method shows high safety for Shugan Hewei prescription,and Shugan Heweiprescription can repair esophageal mucosa and inhibit esophageal inflammation.Keywords Shugan Hewei prescription;extraction method;acute toxicity test;pharmacodynamic study胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GED)是常见的上消
14、化道系统疾病,临床症状包括烧心、反酸等食管内症状,也包括咽喉梗阻感、呛咳等食管外症状,长期反复可导致患者生活质量下降1。质子泵抑制剂(PPI)是 GED 常规治疗药物,可通过抑制胃酸分泌减少其对食管黏膜的损伤,但研究发现经标准剂量的 PPI 治疗后高达54.1%的 GED 患者仍存在着相关症状,同时 PPI毒副作用明显,长期服用会增加骨折的风险,也会改变肠道菌群增加肠道感染的几率23。朱生樑教授带领团队从事 GED 的中医研究近三十年,提出了肝失疏泄、胃失和降是其基本病机,自拟疏肝和胃方,并经大量临床试验证实,该方在缓解症状、提高患者生活质量、改善食管黏膜炎症方面优于 PPI45。本研究拟将疏
15、肝和胃方药物及剂量固定,采用水提醇沉法制成粉剂,并进行急性毒性试验及部分药效学研究,以期为疏肝和胃方中成药的研制奠定基础。1急性毒性试验1.1实验材料1.1.1实验动物SPF 级昆明小鼠 50 只,雌雄各半,体质量(202)g,动物由浙江维通利华实验动物技术有限公司提供,动物许可证编号:SYXK(沪)20180040,饲养于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院动物中心。1.1.2药物与试剂疏肝和胃方组成:柴胡9 g,香附 12 g,枳壳 12 g,旋覆花 12 g,代赭石 15 g,黄连3 g,吴茱萸3 g,焦山栀9 g,煅瓦楞30 g,延胡索9 g,黄精15 g,生姜3 g。中药由上海中医药
16、大学附属岳阳中西医结合医院中药房提供。试剂:无水乙醇(国药集团医药股份有限公司,货号:100092683),二甲苯(国药集团医药股份有限公司,货号:10023418),HE染液(Servicebio,生产批号:G1003)。1.1.3仪器正置显微镜(日本尼康,型号:E100)。1.2实验方法1.2.1动物分组按照随机数字表法将小鼠分为药物高、中高、中、低剂量组及对照组,每组各10 只,雌雄各半。适应性饲养 3 d 后给药。1.2.2剂量换算根据小鼠与人的体质量换算系数为 9.01,计算小鼠的常规生药量为 1.32 g/ml,将生药量扩大 10 倍设为高剂量(13.2 g/ml),按 85%剂量
17、等比递减设为中高剂量(11.22 g/ml)、中剂量(9.537 g/ml)、低剂量(8.10 g/ml)6。1.2.3给药方法按照最大给药体积 0.4 ml/10 g小鼠体质量、1 d 内灌胃 2 次,持续 14 d。对照组给予相同剂量的 0.9%氯化钠注射液灌胃。1.3标本制备与指标检测1.3.1标本制备灌胃结束后禁食 24 h,分别取心脏、肝脏及肾脏放入甲醛中固定。HE 染色观察脏器损伤情况。1.3.2观察指标1)小鼠一般情况。给药 4 h 内观察小鼠的精神状态及死亡情况;连续 14 d 观察小鼠的毒性反应情况,包括小鼠的精神状态、有无异常分泌物,计算 LD50(半数致死剂量)。如有死亡
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