加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响.pdf
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1、加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响2023 年 第 9 期加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响郝洪丹,刘冠慧*,张议心,尚佳静,罗娟(河北工程大学生命科学与食品工程学院,河北 邯郸 056038)摘 要:试验旨在研究加味理中汤方对脾虚泄泻模型小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响。试验中复方由干姜、党参、白术、甘草、茯苓、山药、木香、桂枝、砂仁组成。选择无特定病原体级ICR小鼠72只,随机分为6组,每组12只小鼠,雌、雄各半。除空白对照组(C组)小鼠灌胃同体积的生理盐水外,其余各组小鼠灌胃番泻叶提取物9 d建立脾虚泄泻模型。试验第10 d停用番泻叶,恩诺沙星治疗
2、组(A组)小鼠灌胃恩诺沙星水溶液,各中药组分别给予低剂量(6.5 g/kg)、中剂量(13.0 g/kg)、高剂量(26.0 g/kg)灌胃治疗,C 组和泄泻模型组(M组)用同体积的生理盐水灌胃,连续治疗3 d。结果显示,与C组相比,M组小鼠空腹血糖含量、淋巴细胞百分比、肝脏指数均极显著降低(P0.01),血小板数目显著降低(P0.05),中性粒细胞百分比及白细胞数目显著增加(P0.01)。与M组比,各治疗组小鼠中性粒细胞百分比极显著降低(P0.01),淋巴细胞百分及空腹血糖含量极显著升高(P0.01);中药高剂量组(ZH组)小鼠血小板数目显著提高(P0.05),肝脏指数极显著提高(P0.01
3、)。与A组比,ZH组小鼠血糖含量、肝脏指数均极显著升高(P0.01),血小板数目、肾脏指数均显著升高(P0.05)。研究表明,加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠的血常规、血糖及肝肾脏器指数等指标异常具有一定的改善作用,高剂量中药效果最佳且优于恩诺沙星。关键词:理中汤;番泻叶;脾虚泄泻;小鼠;血常规;血糖;脏器指数中图分类号:S 859 文献标识码:A 文章编号:1672-9692(2023)09-0005-06Effect of Jiawei Lizhong Decoction on blood routine,blood glucose and organ index in mice with di
4、arrhea due to spleen deficiencyHao Hongdan,Liu Guanhui*,Zhang Yixin,Shang Jiajing,Luo Juan(College of Life Science and Food Engineering,Hebei University of Engineering,Hebei Handan 056038)Abstract:The aim of the experiment was to study the effect of Jiawei Lizhong Decoction on blood routine,blood gl
5、ucose and organ index in mice model of splenic deficiency diarrhea.The compound was composed of Rhizoma zingiberis,Codonopsis pilosula,Atractylodes macrocephala,licorice,tuckahoe,yam,Aucklandiae Radix,cassia twig and Fructus amomi.A total of 72 mice without specific pathogen grade ICR were randomly
6、divided into six groups with 12 mice in each group(half female and half male).Except for the mice in blank control group(group C),the mice in the other groups were administrated with Folium sennae for 9 d to establish spleen deficiency diarrhea model.On the 10th day of the experiment,Folium sennae w
7、as stopped,enrofloxacin treatment group(group A)was given enrofloxacin aqueous solution,and the Chinese medicine groups were given low dose(6.5 g/kg),medium dose(13.0 g/kg)and high dose(26.0 g/kg),respectively,group C and diarrhea model group(group M)were given the same volume of normal saline.The t
8、reatment was continued for 3 d.The results showed that compared with group C,fasting blood glucose content,lymphocyte percentage and liver index in group M were extremely decreased(P0.01),platelet number was significantly decreased(P0.05),neutrophil percentage and white blood cell number were extrem
9、ely increased(P0.01).Compared with group M,the percentage of neutrophil in each treatment group was extremely decreased(P0.01),收稿日期:2023-06-16作者简介:郝洪丹,硕士,研究方向为动物疾病诊断与治疗。通讯作者:刘冠慧,博士,副教授,硕士生导师,研究方向为植物功能性提取物调控动物应激反应。52023 年 第 9 期Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicineand the percenta
10、ge of lymphocyte and fasting blood glucose were extremely increased(P0.01).The number of platelet was significantly increased in the high dose group(ZH group)(P0.05),and the liver index was extremely increased(P0.01).Compared with group A,the blood glucose content and liver index of mice in ZH group
11、 were extremely increased(P0.01),and the platelet number and kidney index were significantly increased(P0.05).The study indicates that Jiawei Lizhong Decoction can ameliorate the abnormal blood routine,blood glucose and liver and kidney indexes in mice with splenic deficiency and diarrhea,and the ef
12、fect of high dose Chinese medicine was the best and better than enrofloxacin.Key words:Lizhong Decoction;Folium sennae;Spleen diarrhea;Mice;Blood routine;Blood glucose;Organ index腹泻是常见的动物消化系统疾病。腹泻病属于中医“泄泻”范畴,以排便次数增加为主要症状,大便呈溏薄状或水状1。泄泻证型不同治疗方法也不同,但临床中通常不辨证,普遍只给予抗生素治疗。目前,随着抗生素的广泛应用,其引起的耐药情况在全球范围内已十分普遍
13、,且兽用抗生素滥用问题也日渐凸显2。抗生素过度使用会造成肠道菌群失调,使免疫系统和代谢紊乱,引起慢性腹泻、抗生素耐药及其他临床并发症3-4。中药具有耐药性低、多靶点、天然低毒等治疗特点,可用于代替抗生素治疗人类和动物各种疾病。已有研究表明,中药对于肠激惹综合征、溃疡性结肠炎、慢性腹泻等多种病因引起的腹泻5-9均具有很好的疗效。张景岳主张泄泻病位在脾胃,呈现脾虚邪实10,脾虚和湿邪是主因。畜禽临床中,由于饲养不当、营养过剩导致脾胃亏虚,且多食寒凉,脾虚寒湿泄泻证常见。伤寒论中的理中汤是治疗脾胃虚寒的代表方剂。为更好地治疗泄泻造成的津伤气虚及腹痛,本研究针对脾虚寒湿泄泻,在理中汤中加入茯苓、山药,
14、加强祛湿作用兼而保护津液;加木香、桂枝、砂仁增加行气止痛和助阳止泻的功效。番泻叶为苦寒之品,是建立脾虚泄泻模型常用的苦寒泻下法药物11-12。本试验通过建立脾虚泄泻小鼠,研究理中汤加减对其血常规、血糖及脏器指数等指标的影响,为后续理中汤加减应用于兽医临床治疗腹泻提供参考。1材料与方法1.1试验动物无特定病原体级ICR小鼠72只,体重(202)g,购自北京斯贝福生物技术有限公司,许可证号为SCXK(京)2019-0010。动物饲养于河北工程大学动物房,雌、雄分笼饲养,在适宜的饲养环境下(室温约 22,相对湿度为50%70%,室内清洁且安静),光照12 h、黑暗12 h交替进行,自由采食标准饲粮及
15、饮用纯净水,每日清理鼠笼1次。1.2试剂与仪器本研究所用中药均购自北京同仁堂邯郸药店,包括干姜(批号:22051101)、党参(批号:391210701)、白术(批号:117220601)、茯 苓(批 号:325220701)、山 药(批 号:220622002)、木 香(批 号:211017005)、桂 枝(批 号:261220701)、砂 仁(批 号:348200701)、甘 草(批 号:27220802)。恩诺沙星片(KVP Kiel有限责任公司,生产批号:KV03CRF)。主要仪器:FA1104电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)、XFH-75CA高压灭菌锅(浙江新丰医疗器械有限公
16、司)、DHG-9070A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)、BC-2800自动血液细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)、BCD-182LTMPA冰箱(青岛海尔生物医疗股份有限公司)、582血糖仪(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)。1.3试验用药物制备1.3.1恩诺沙星溶液的制备取恩诺沙星片50 mg加入灭菌蒸馏水41.41 mL中,配制成浓度为1.21 g/L的溶液,4 冰箱保存。1.3.2中药复方提取物的制备取中药干姜15 g、党参15 g、白术15 g、茯苓15 g、山药20 g、木香 5 g、桂枝 5 g、砂仁 5 g、甘草 5 g(生药量为100 g)。中药加蒸馏水1
17、L,浸泡1 h后煎煮30 min,使用12层纱布过滤;药渣加蒸馏水0.5 L再煎煮20 min,再次使用 12 层纱布过滤。两次滤液合并后加热蒸发浓缩至50 mL(按生药计2 g/mL),冷却至室温后分装5份,每份10 mL,高压灭菌后4 冰箱保存。1.4加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响1.4.1试验设计无特定病原体级ICR小鼠72只,适应性饲养3 d,试验前一晚禁食不禁水12 h后称空腹体重,根据体重将小鼠随机分为6组,即空白对照组(C组)、泄泻模型组(M组)、恩诺沙星治疗组(A组)、中药低剂量组(ZL组)、中药中剂量组(ZM组)、中药高剂量组(ZH组),每组12只小鼠
18、,雌、雄各半。除C组外,其余各组小鼠按照30 g/kg灌胃番泻叶提取物,C组小鼠灌胃同体积的生理盐水,均每日1次,连续6现代畜牧兽医2023 年 第 9 期9 d,建立脾虚泄泻模型13-16。试验第10 d停用番泻叶,前一晚禁食不禁水12 h,A组小鼠按24.15 mg/kg灌胃恩诺沙星水溶液治疗,各中药组分别给予低剂量(6.5 g/kg)、中剂量(13.0 g/kg)、高剂量(26.0 g/kg)灌胃治疗(分别对应正常治疗剂量的0.5倍、1.0倍、2.0倍),C组和M组采用同体积的生理盐水灌胃,均每日1次,连续治疗3 d。各组末次给药后禁食不禁水12 h,禁水1 h,眼球取血后断颈处死。试验
19、流程见图1。1.4.2测定指标及方法1.4.2.1血常规检测试验结束后,每组随机选取5只小鼠眼球取血1 mL,注入EDTA抗凝管中,混匀后使用全自动血细胞分析仪进行血常规检测15。检测指标包括:白细胞数目、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、中性粒细胞百分比、红细胞数目、血红蛋白以及血小板数目。1.4.2.2血糖含量试验第10 d灌胃前和试验最后1 d眼球取血前,每只小鼠尾根静脉采血1滴,使用血糖仪试纸条检测小鼠空腹血糖含量并记录结果。1.4.2.3肝脏、肾脏脏器指数记录试验最后1d眼球取血前的空腹体重,此为治疗末体重。解剖1.4.1中处死的小鼠,摘取肝脏和肾脏,在精密天平中称重,分别计算肝脏指数
20、、肾脏指数。肝脏指数=肝脏质量/治疗末体重100%(1)肾脏指数=肾脏质量/治疗末体重100%(2)1.5数据统计与分析试验数据采用IBM SPSS Statistics 25软件进行分析,单因素方差分析(ANOVA)进行组间比较,LSD法(假定等方差)及塔姆黑尼法(不假定等方差)进行两两比较,卡方检验进行不同性别间验证。结果以“平均值标准误”表示,P0.05表示差异显著,P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规指标的影响(见表1)由表1可知,与C组相比,M组小鼠白细胞数目、中性粒细胞百分比分别升高了171.18%、384.25%(P0.01),淋巴细胞百分
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